PIG7慢病毒表达载体的构建

目的:构建一个含有PIG7基因ORF区的表达载体pPRRL-PIG7-IRES,为研究PIG7基因的功能打下基础。方法:采用RT-PCR方法从经苯丁酸钠处理过的Kasumi-1细胞获得PIG7基因SIMPLE转录本的ORF片段,再用酶切-连接的方法将目的片段亚克隆入慢病毒表达质粒PRRL.SIN.CPPT.PGK/GFP.WPRE。结果:PIG7基因ORF区成功亚克隆入了慢病毒表达质粒PRRL.SIN.CPPT.PGK/GFP.WPRE。结论:成功完成了PIG7慢病毒表达载体的构建,为研究PIG7基因的功能打下了基础。

PIG7基因与疾病

P53分子介导的凋亡途径是细胞内重要的信号整合机制,通过识别细胞损伤启动下游促凋亡信号。PIG7是与P53诱导凋亡密切相关的基因,与代谢、炎症、肿瘤等关系紧密,逐渐成为近年相关领域的研究热点。本文从PIG7基因的发现、生物学功能及与人类疾病的关系等方面对该基因的研究进展予以综述。

组蛋白脱乙酰基酶抑制剂苯丁酸钠对基因PIG7的表达作用研究

目的研究组蛋白脱乙酰基酶抑制剂苯丁酸钠(PB)作用于Kasumi-1细胞后PIG7基因的表达变化及其与细胞分化凋亡的关系。方法采用半定量RT-PCR检测1,2,3mmol/LPB作用后24h、48hKasumi-1细胞PIG7基因的表达水平,同步观察细胞的形态变化,流式细胞仪检测CD11b、CD13和AnnexinV/PI表达水平。结果处理前PIG7低表达不能检测到,处理后均明显升高(P<0.05),不同浓度、作用时间间差异无统计学意义(P>0.05);细胞形态呈现分化凋亡改变;CD11b、CD13表达增加(P<0.05),AnnexinV+/PI-增加(P<0.05)。结论组蛋白脱乙酰基酶抑制剂苯丁酸钠作用后Kasumi-1细胞PIG7基因的表达增加,同时细胞发生分化凋亡,PB可能通过上调PIG7的表达引起上述生物学效应。

pig7基因在急性白血病细胞中的表达及其临床意义

目的检测 pig7基因在急性白血病(AL)细胞中的表达水平及其临床意义,在基因甲基化调控方而探讨 pig7基因表达异常的可能机制。方法应用实时定量逆转录 PCR(RT-PCR)方法对138例 AL 患者、21名正常人骨髓标本以及6个白血病细胞株进行了 pig7转录本的检测,并在全反式维甲酸(ATRA)作用下观察 NB4细胞分化效应及 pig7基因表达情况。进行限制性内切酶分析以鉴定白血病细胞中存在的 pig7转录剪接体。通过甲基化特异性 PCR(MSP)检测白血病细胞 pig7基因启动子区域是否存在过度甲基化。结果 AL 进展期(包括初治、复发/难治)患者骨髓细胞 pig7 mRNA 相对表达水平与正常骨髓细胞相比明显降低(RQ 中位数分别为0.62和18.30,P<0.01),其中急性髓系白血病(AML)与急性淋巴细胞白血病(ALL)差异无统计学意义,而初治组与复发/难治组比较 pig7mRNA 水平差异有统计学意义,前者明显高于后者(RQ 中位数分别为1.43和0.16,P<0.05)。pig7低表达患者完全缓解率也较低(P<0.05)。NB4细胞经 ATRA 诱导分化后 pig7表达水平由1.61±0.72增至44.75±3.93(P<0.01)。酶切结果提示白血病细胞中仅存在 SIMPLE 剪接体。在 K562、HL-60及 Nalm-6细胞 pig7启动子区域存在过度甲基化,而 U937、NB4和 kasumi-1细胞中该区域非甲基化状态占优势。结论 pig7基因在 AL 的表达下调为白血病发病机制的探讨和疗效预测提供了新的思路。

PIG7基因与Litaf/Simple蛋白

PIG7基因是与p53诱导凋亡密切相关的基因,与代谢、炎症、肿瘤等关系紧密。该基因可能存在2种不同的转录本——Litaf与Simple,Litaf在LPS诱导TNF-α表达过程中起转录激活作用,Simple可能参与溶酶体介导的细胞内蛋白分选和降解过程。