嗜肺军团菌pilE基因的克隆及其原核表达

目的克隆嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛蛋白pilE基因,构建重组质粒pET-pilE,并在原核系统中表达。方法采用聚合酶链反应(PCR)从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增军团菌Ⅳ型菌毛蛋白pilE基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达重组质粒pET-pilE,经限制性内切酶鉴定、PCR及测序分析后,转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果扩增出了429bp完整的pilE基因,构建的原核表达重组质粒pET-pilE表达出35.7 kDa的融合蛋白质。结论成功构建了军团菌pilE基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中得到了高效表达,为以后深入研究奠定了基础。