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嗜肺军团菌pilE基因体外表达及其免疫原性研究 被引量:3
1
作者 杨志伟 陈建平 +2 位作者 王涛 田玉 刘德松 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期141-145,共5页
目的构建嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛pilE基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-pilE,研究其真核细胞中的表达及其免疫原性。方法以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR扩增获得嗜肺军团菌pilE基因,将其定向插入载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA3.1... 目的构建嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛pilE基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-pilE,研究其真核细胞中的表达及其免疫原性。方法以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR扩增获得嗜肺军团菌pilE基因,将其定向插入载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA3.1--pilE。经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-pilE转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法和Western-blot分别鉴定pcDNA3.1-pilE的瞬时和稳定表达产物。将pcDNA3.1-pilE作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠体内抗原特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、IFN-γ产生水平、CTL杀伤活性等指标,评价疫苗的免疫原性。结果扩增出了429bp的PilE基因,在细胞膜与细胞内观察到较强的绿色荧光,在相对分子质量15000处检测到阳性杂交信号,表明pcDNA3.1-pilE在细胞内表达PilE蛋白。pcDNA3.1-pilE免疫组的免疫原性均高于对照组pcDNA3.1(+)组(P<0.01)。结论成功构建了嗜肺军团菌pilE基因的真核表达重组质粒,并在NIH3T3细胞中得到了表达,免疫小鼠后诱导了特异的体液免疫应答和细胞免疫应答。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 Ⅳ型菌毛蛋白 免疫原性 体外表达
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3株致病性鸡大肠杆菌P型菌毛结构基因的克隆、序列测定及同源性分析 被引量:1
2
作者 苗玉和 王文成 张贵刚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期250-252,共3页
用鸡致病性大肠杆菌分离株O1、O2和O78的基因组DNA做为模板,PCR分别扩增出了0.55kb的P型菌毛结构基因(papA)。将扩增得到的3个papA基因片段分别克隆进pGEM-T○R载体中,转化至受体菌JM109中,用Amp/IPTG/X-gal琼脂平板蓝白菌落筛选法,得... 用鸡致病性大肠杆菌分离株O1、O2和O78的基因组DNA做为模板,PCR分别扩增出了0.55kb的P型菌毛结构基因(papA)。将扩增得到的3个papA基因片段分别克隆进pGEM-T○R载体中,转化至受体菌JM109中,用Amp/IPTG/X-gal琼脂平板蓝白菌落筛选法,得到含阳性重组子的菌株,提取质粒后用BamH和Sal双酶切进行鉴定。所得阳性重组子进行DNA序列测定,测序结果经DNAStar核酸分析软件包分析比较,结果表明,所构建的克隆质粒中均含有相应完整papA基因,其开放式阅读框架大小为549bp,编码182个氨基酸。此3株菌的P型菌毛结构基因的同源性为98.9%~100%,其中O1株和O78株的P型菌毛基因的ORF序列100%相同,O2株有2个碱基与前两者不同。 展开更多
关键词 结构基因 P型菌毛 鸡大肠杆菌 同源性分析 克隆 鸡致病性大肠杆菌 DNA序列测定 基因组DNA 分析软件包 基因片段 琼脂平板 IPTG 分析比较 Star 菌毛基因 重组子 分离株 PCR 受体菌 筛选法 Amp Sal 双酶切 开放式 氨基酸
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腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL-2融合基因的分泌型表达
3
作者 刘艳环 苗利光 +2 位作者 王克坚 刘波 李理 《动物医学进展》 CSCD 2004年第2期69-70,共2页
用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养... 用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养肉汤中进行 Pilin-IL-2融合基因的表达。培养 16~ 18h后 ,离心 ,向上清液中加入饱和 ( NH4) 2 SO4提取 Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳 。 展开更多
关键词 腐蹄病 节瘤拟杆菌 纤毛蛋白 绵羊 融合基因工程疫苗 分泌型表达 白细胞介素2 免疫佐剂
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昆虫病原线虫共生菌YL001菌毛蛋白亚基基因的克隆与序列分析
4
作者 冯纪年 李玉凤 +1 位作者 王永宏 张兴 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第8期143-145,150,共4页
为了准确克隆昆虫病原线虫共生菌YL001菌毛蛋白亚基基因,根据已报道的菌毛蛋白亚基序列设计引物,以昆虫病原线虫共生菌YL001的总DNA为模板进行PCR扩增,获得1条大约500 bp的特异性片断,将此片断克隆到T-easy载体上,获得了重组子pGEM-PSYL... 为了准确克隆昆虫病原线虫共生菌YL001菌毛蛋白亚基基因,根据已报道的菌毛蛋白亚基序列设计引物,以昆虫病原线虫共生菌YL001的总DNA为模板进行PCR扩增,获得1条大约500 bp的特异性片断,将此片断克隆到T-easy载体上,获得了重组子pGEM-PSYL001,序列测定和结构分析结果表明,PSYL001阅读框全长537bp,编码179个氨基酸,预测分子量和等电点分别为18.9 ku和6.94,GenBank登录号为DQ537944。与GenBank(AY140909)上公布的Xenorhabdus nematophilus菌毛蛋白亚基核苷酸序列的同源性为99%,氨基酸序列的同源性为98%。上述分析表明,菌毛蛋白亚基基因得到了成功克隆。 展开更多
关键词 昆虫病原线虫共生菌 菌毛蛋白亚基 基因克隆 序列分析
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“毗陵四家”与《文统》编纂 被引量:1
5
作者 陈圣宇 《南京审计学院学报》 2011年第2期103-108,F0003,共7页
清初"毗陵四家"陈玉璂、董以宁、邹祗谟、龚百药致力于古文创作,在当时文坛较有影响。"毗陵四家"为了贯彻其古文理念,集体从事《文统》编纂的工作。《文统》以文章选本形式,贯彻了清初理学重臣魏裔介的道统观念,与... 清初"毗陵四家"陈玉璂、董以宁、邹祗谟、龚百药致力于古文创作,在当时文坛较有影响。"毗陵四家"为了贯彻其古文理念,集体从事《文统》编纂的工作。《文统》以文章选本形式,贯彻了清初理学重臣魏裔介的道统观念,与魏氏《圣学知统录》、《圣学知统翼录》等相为表里,也与康熙亲政后追求"道统"与"治统"合一的正统化主张遥相呼应。 展开更多
关键词 毗陵四家 魏裔介 《文统》 选本编纂
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腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因在PAK/2pfs细胞中的表达与鉴定
6
作者 刘艳环 郑皓 +1 位作者 苗利光 王克坚 《特产研究》 2004年第4期5-7,共3页
将前期工作中筛选出的含有腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2(Pilin-IL-2)融合基因表达载体的PAK/2pfs工程菌[1]接种于营养肉汤,40℃培养16~18h,离心,向上清液中加入饱和(NH4)2SO4提取Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔... 将前期工作中筛选出的含有腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2(Pilin-IL-2)融合基因表达载体的PAK/2pfs工程菌[1]接种于营养肉汤,40℃培养16~18h,离心,向上清液中加入饱和(NH4)2SO4提取Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳,证明该融合蛋白具有特异性,且有较高的表达量。经SDS-PAGE电泳和Westernblot确证其为Pilin-IL-2融合蛋白。 展开更多
关键词 融合基因 IL-2 白细胞介素-2 纤毛 融合蛋白 表达 杆菌 腐蹄病 绵羊 对流免疫电泳
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鸡致病性大肠杆菌O_1、O_2和O_(78)的Ι型菌毛结构基因的克隆、序列测定及同源性分析
7
作者 王文成 张贵刚 《中国兽药杂志》 2002年第12期24-26,46,共4页
提取鸡致病性大肠杆菌分离株O1,O2和O78的基因组DNA作为模板,用TD-PCR技术从其中分别扩增出了0.55kb的I型菌毛细菌基因(piliA),将扩增得到的piliA基因片段,TA克隆的方法分别克隆进pGEM-T载体中,转化至受体菌JM109中,用Amp/IPTG... 提取鸡致病性大肠杆菌分离株O1,O2和O78的基因组DNA作为模板,用TD-PCR技术从其中分别扩增出了0.55kb的I型菌毛细菌基因(piliA),将扩增得到的piliA基因片段,TA克隆的方法分别克隆进pGEM-T载体中,转化至受体菌JM109中,用Amp/IPTG/X-gal琼脂平板蓝白菌落筛选法,得到含阳性重组子的菌株,提取质粒用PstI单酶切及NcoI和PstI双酶切鉴定,结果证实,所构建的克隆质粒中均含有相应piliA基因,经DNA序列分析,其结果基因阅读框架大小为549bp,但其中O1菌株I型菌毛基因在第72位发生突变,有6个碱基插入,经DNA Star核酸分析软件分析,此3菌株的I型菌毛基因的同源性为89.9%-92%。 展开更多
关键词 同源性分析 致病性大肠杆菌 I型菌毛 DNA测序 基因克隆
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Impact of Sequence Non-Identities on Recombination within the <i>pil</i>System of <i>Neisseria gonorrhoeae</i>
8
作者 Stuart A. Hill Jenny Wachter 《Open Journal of Genetics》 2014年第3期227-238,共12页
Neisseria gonorrhoeae engages in extensive intra-cellular gene conversion between the PilE-expression locus (pilE) and the transcriptionally-silent pil gene copies (pilS). In silico analyses were applied to investigat... Neisseria gonorrhoeae engages in extensive intra-cellular gene conversion between the PilE-expression locus (pilE) and the transcriptionally-silent pil gene copies (pilS). In silico analyses were applied to investigate the extent of sequence heterogeneity between the various pilS gene copies. Analysis of synonymous and non-synonymous substitutions between the different pilS genes indicated that relatively few amino acid changes would occur due to nucleotide polymorphisms towards the 5’ end of the pilS genes whereas more frequent amino acid substitutions would be incorporated within the “hypervariable” region. The lack of non-synonymous substitutions at the 5’ end of the genes was found to be under selective pressure as indicated by a positive DT score utilizing the Tajima test. The presence or absence of mismatch repair appeared to only impact recombination when non-identical DNAs recombined via the DNA transformation route, where small pil sequence heterogeneities were sufficient to terminate recombination tracts, with these sequence constraints being relieved in cells carrying a mutS mutation. Therefore, the data indicate that the effect of sequence heterogeneity on recombination within the pil system appears to depend upon the context with which the non-identical DNAs recombine. 展开更多
关键词 Recombination Antigenic Variation pilin SEQUENCE HETEROGENEITY
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益生菌对促进肠道发育作用的研究进展 被引量:14
9
作者 关嘉琦 李柏良 +6 位作者 焦雯姝 李慧臻 岳莹雪 李娜 史佳鹭 赵莉 霍贵成 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第21期278-285,共8页
肠道细胞的正常增殖分化、黏膜屏障完整性作为评价肠道发育的重要指标,很大程度上决定了人和动物的能量稳态和整体生长性能,是决定人和动物生理稳态的根本因素。而良好的微生物-宿主通讯机制及其共生关系对肠道发育及稳态具有积极作用... 肠道细胞的正常增殖分化、黏膜屏障完整性作为评价肠道发育的重要指标,很大程度上决定了人和动物的能量稳态和整体生长性能,是决定人和动物生理稳态的根本因素。而良好的微生物-宿主通讯机制及其共生关系对肠道发育及稳态具有积极作用。近年来国内外大量研究显示肠道微生物参与调控肠道增殖分化,其中益生菌(主要是乳酸菌)发挥了极重要的益生作用。本文详述了肠道组成及发育机制,并从益生菌的自身组分(如菌毛蛋白、细胞壁成分等)、代谢产物(丁酸及其盐类)、肠道菌群的多样性和定植状态3个方面对益生菌促进肠道上皮细胞与肠道干细胞增殖分化、增强黏膜屏障功能、维持肠道良好形态的功能及其干预机制的研究进展进行综述,旨在加深和完善关于益生菌调控肠道发育的认识。 展开更多
关键词 益生菌 肠道发育 菌毛蛋白 细胞壁成分 丁酸盐 肠道菌群
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K_(88)、K_(99)基因工程菌菌毛抗原的提纯及其检测 被引量:3
10
作者 李春华 梁宏德 +2 位作者 杨艳艳 邓瑞广 张改平 《河南畜牧兽医(综合版)》 1999年第4期7-8,共2页
采用SephadexG-100凝胶过滤和酸盐沉淀两种方法从基因工程菌(GHG001)提纯K88、K99菌毛抗原,经SDS-PAGE测定,所提纯的K88、K99抗原的分子量分别为25000和17000道尔顿.
关键词 K88、K99菌毛抗原 酶联免疫吸附试验
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共表达K88/987p菌毛产肠毒素性大肠杆菌的分离鉴定及其卵黄抗体的制备 被引量:4
11
作者 彭姣 李职 +1 位作者 祁振强 卢超 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期303-308,共6页
为制备针对一些大型养猪场产肠毒素性大肠杆菌(enterotrxigenic Escherichia coli,ETEC)分离株的特异性卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin,IgY),试验对从这些养殖场分离的ETEC分离株菌毛基因类型进行了PCR鉴定,纯化该分离株的菌毛蛋白... 为制备针对一些大型养猪场产肠毒素性大肠杆菌(enterotrxigenic Escherichia coli,ETEC)分离株的特异性卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin,IgY),试验对从这些养殖场分离的ETEC分离株菌毛基因类型进行了PCR鉴定,纯化该分离株的菌毛蛋白免疫蛋鸡制备IgY,对该IgY的效价、特异性和体外抑菌效果进行了检测。结果表明,该分离株具有K88和987p两种菌毛基因,纯化后的分离株菌毛具有较强的免疫原性,经3次免疫后产生的IgY对K88和987p全菌和菌毛的效价可达到1∶64 000,分离株菌毛IgY能特异地与K88和987p反应,与K99、F41无交叉反应,5mg/mL分离株菌毛IgY在体外具有很好的抑菌效果。 展开更多
关键词 K88 987p 共表达 菌毛蛋白 卵黄抗体 体外抑菌
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地层柱状模拟新方法及在详细沉积断面综合柱状模拟中的应用
12
作者 金友渔 《地球科学(中国地质大学学报)》 EI CAS CSCD 北大核心 1991年第6期697-704,共8页
本文提出地层垒积序列的新概念,应用地层垒积序列中岩性百分比、相对重心、相对标准离差3个参数反映地层序列层序结构特征的演化,并应用时间序列分析方法建立这3个结构特征参数的预报方程,在此基础上提出地层柱状模拟的一种新方法。
关键词 地层 垒积序列 层序结构 沉积 断面
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杀鲑气单胞菌溶血素和菌毛蛋白的重组表达及其免疫保护效果研究
13
作者 李乐 刁菁 +4 位作者 于晓清 王晓璐 王友红 叶海斌 吴海一 《广西科学院学报》 2021年第2期101-108,共8页
为探究杀鲑气单胞菌溶血素和菌毛蛋白能否作为亚单位疫苗候选抗原,本研究针对前期分离的杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida subsp.masoucida,ASM),利用原核表达系统对其进行重组表达,免疫虹鳟后检测其免疫保护效果与诱导... 为探究杀鲑气单胞菌溶血素和菌毛蛋白能否作为亚单位疫苗候选抗原,本研究针对前期分离的杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida subsp.masoucida,ASM),利用原核表达系统对其进行重组表达,免疫虹鳟后检测其免疫保护效果与诱导的免疫应答特征。Western-blotting结果显示,虹鳟抗灭活ASM血清可与2种重组蛋白发生阳性反应,说明其具有较好的免疫原性。免疫保护实验结果显示,重组溶血素、重组菌毛蛋白及两者混合物免疫对虹鳟的相对免疫保护率(Relative Percentage Survival,RPS)分别为64.6%、37.5%和75.0%;ELISA检测发现,重组溶血素和重组菌毛蛋白单独免疫以及两者混合免疫均能有效诱导虹鳟产生抗各抗原的特异性抗体,在免疫2周后特异性抗体水平均显著高于对照组(P>0.05),其中混合免疫组虹鳟血清中抗重组溶血素抗体水平显著高于重组溶血素单独免疫组,但其诱导产生的抗重组菌毛蛋白抗体水平与重组菌毛蛋白单独免疫组无显著性差异;荧光定量PCR检测结果显示,3个免疫组中IL-6、IL-8、TCR及CD4基因的表达水平均显著高于PBS对照组,其中重组溶血素与重组菌毛蛋白共免疫组中IL-6、CD4、MHC-Ⅱ及IgM基因表达水平显著高于其他免疫组。研究结果表明,重组溶血素对虹鳟具有较好的免疫保护效果,且提示重组菌毛蛋白具有开发成为佐剂分子的潜在价值,该结果可为杀鲑气单胞菌亚单位疫苗的研制及应用提供了重要参考。 展开更多
关键词 杀鲑气单胞菌 重组表达 溶血素 菌毛蛋白 免疫保护 虹鳟
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人产肠毒素大肠杆菌基因工程疫苗的研究进展 被引量:3
14
作者 王荣荣 马永平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期544-548,共5页
产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起腹泻的主要致病菌之一,在世界范围内,每年可导致数亿人发生腹泻,尤其是发展中国家的婴幼儿和儿童。目前,世界各国通过构建新型的ETEC基因工程疫苗预防ETEC引起的腹泻。将ETEC的肠毒素基因和菌毛蛋白基因转... 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起腹泻的主要致病菌之一,在世界范围内,每年可导致数亿人发生腹泻,尤其是发展中国家的婴幼儿和儿童。目前,世界各国通过构建新型的ETEC基因工程疫苗预防ETEC引起的腹泻。将ETEC的肠毒素基因和菌毛蛋白基因转化至无毒的受体菌中,构建出基因工程疫苗,免疫人体后可有效预防ETEC引起的腹泻。本文就ETEC的致病机理及国内外ETEC基因工程疫苗的最新研究进展作一综述。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 基因工程疫苗 肠毒素 菌毛蛋白 腹泻
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嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化 被引量:2
15
作者 徐佳楠 陈建平 《热带医学杂志》 CAS 2009年第2期135-139,共5页
目的扩增编码Ⅳ型菌毛蛋白的嗜肺军团菌pilE基因,构建重组质粒pET32a(+)-pilE并在原核系统中表达,纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE,为进一步探讨Ⅳ型菌毛蛋白的作用及其作为军团病的诊断抗原提供实验基础。方法采用聚合酶链式反应(PCR)从嗜肺军团... 目的扩增编码Ⅳ型菌毛蛋白的嗜肺军团菌pilE基因,构建重组质粒pET32a(+)-pilE并在原核系统中表达,纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE,为进一步探讨Ⅳ型菌毛蛋白的作用及其作为军团病的诊断抗原提供实验基础。方法采用聚合酶链式反应(PCR)从嗜肺军团菌扩增得到pilE基因,构建重组质粒pET32a(+)-pilE,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用聚合酶链式反应、限制性酶切分析、序列分析鉴定后,IPTG诱导表达PILE蛋白,用硫酸十二烷酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western印迹鉴定。使用HisTrapTMHP亲和层析柱纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE。结果扩增出430bp的pilE基因;构建了重组质粒pET32a(+)-pilE;表达并纯化出35700Mr的目标蛋白。结论成功构建了嗜肺军团菌pilE基因的原核重组质粒,并在原核系统中得到了高效表达。成功纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 Ⅳ型菌毛蛋白 表达 纯化
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鼠李糖乳杆菌菌毛SpaA亚基的表达、抗体制备及其种属特异性研究
16
作者 魏永峰 杨振泉 +4 位作者 高璐 饶胜其 尹永祺 方维明 顾瑞霞 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1288-1294,共7页
【目的】制备鼠李糖乳杆菌菌毛亚基Spa A多克隆抗体,研究其种属特异性。【方法】应用PCR方法从鼠李糖乳杆菌GG的基因组扩增出spa A,并连接到质粒p ET-28α(+)中。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和镍柱纯化制备重组Spa... 【目的】制备鼠李糖乳杆菌菌毛亚基Spa A多克隆抗体,研究其种属特异性。【方法】应用PCR方法从鼠李糖乳杆菌GG的基因组扩增出spa A,并连接到质粒p ET-28α(+)中。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和镍柱纯化制备重组SpaA。通过免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,利用全菌ELISA、Western和Dot-blot分析了SpaA在18株乳酸菌(12个种)中的分布特征。【结果】表达的重组SpaA分子量为36 k D,与预期大小一致;获得的Spa A抗体效价为1:12 800。Western结果显示抗体与天然Spa A具有良好的反应性。在测定的18株乳酸菌中,鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌3个种属菌株的spa A基因PCR和RT-PCR检测均为阳性。但全菌ELISA和Dot-blot结果显示,只有3株鼠李糖乳杆菌的全菌细胞与SpaA抗体呈特异性反应,而其它种属的菌株没有明显的交叉反应。【结论】尽管spa A基因在鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌中具有高度同源性,但SpaA蛋白只特异性地呈现在鼠李糖乳杆菌细胞表面。本研究中获得的Spa A抗体,为高黏附性鼠李糖乳杆菌的免疫磁珠分离及菌毛功能研究提供了工具。 展开更多
关键词 鼠李糖乳杆菌GG 菌毛 SpaA亚基 表达 抗体
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Pg FimA Ⅱ型特异性单克隆抗体制备及鉴定
17
作者 韩海芳 李智涛 +3 位作者 梁梦歌 王烁 谷变利 高社干 《生物技术》 CAS 2023年第6期677-682,共6页
[目的]诱导表达、纯化牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)FimAⅡ蛋白,将其作为免疫原制备抗Pg FimAⅡ单克隆抗体(mAbs),对抗体特性进行初步研究。[方法]将BL21-pET28a-FimAⅡ菌株诱导表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白并作为抗... [目的]诱导表达、纯化牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)FimAⅡ蛋白,将其作为免疫原制备抗Pg FimAⅡ单克隆抗体(mAbs),对抗体特性进行初步研究。[方法]将BL21-pET28a-FimAⅡ菌株诱导表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白并作为抗原免疫BALB/c小鼠,经PEG融合法和腹水法获得FimAⅡ单克隆抗体;分别采用SDS-PAGE法、酶联免疫吸附实验检测抗体纯度、效价和亚型,Western Blot和Biacore检测抗体的特异性和亲和力。[结果]FimAⅡ重组蛋白为可溶性表达,最适诱导条件为1 mmol/L IPTG诱导12 h;纯化后的重组蛋白纯度为90%以上,该免疫原制备的FimAⅡ单克隆抗体为IgG1亚类,kappa亚型,效价为1:8×104以上,特异性良好,亲和力可达到9nM。[结论]成功诱导表达、纯化FimAⅡ蛋白并制备抗Pg FimAⅡ特异性单克隆抗体,为后续开发快速检测Pg诊断试纸条奠定基础。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌 FimAⅡ菌毛蛋白 FimAⅡ型特异性单克隆抗体 特性鉴定
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