鹿茸肽的提取纯化、药理作用、载体应用研究进展

由中药鹿茸中提取的鹿茸肽(VAP)具有抗骨损伤、抗肿瘤、抗神经疾病、抗氧化、抗炎、保护五脏、促进创面愈合等多种作用,是鹿茸的重要生物活性成分之一。系统综述VAP的提取、分离纯化方法,总结当前已知VAP的化学组成、结构。另外,还综述了VAP相关载体新剂型的研究进展,将VAP与某些高分子材料结合,使之增加药理活性或减少不良反应,为VAP及其载体应用的进一步研究提供了基础。

鹿茸粗提液对大鼠成骨肉瘤细胞增殖的调节作用

目的 :观察鹿茸粗提液 (PAE)对大鼠成骨肉瘤细胞系UMR 10 6增殖的影响 ,从而为研究鹿茸强筋健骨的分子机理以及筛选鹿茸防治骨质疏松的生物活性成分提供实验依据。方法 :通过SephacrylS 2 0 0HR凝胶过滤色谱对PAE进行初级分离 ,用MTT法检测不同分离组分对UMR 10 6细胞增殖的影响。结果 :发现SephacrylS 2 0 0HR凝胶过滤色谱第 2峰P2次组分 ,当其蛋白质浓度高于 0 .972mg·L - 1并低于 97.2mg·L - 1时 ,对UMR 10 6细胞增殖活性的影响表现为抑制 ;若浓度达到 97.2mg·L- 1后则会促进细胞的增殖 ,且增殖效应随蛋白质浓度的增加而明显上升。当样品蛋白质浓度达到 9.72g·L- 1时 ,相应的细胞增殖率为 477.92 % ,接近PAE的增殖水平 (499.62 % )。经SDS PAGE电泳分析第 2峰分子量集中于 59kDa左右。此外 ,发现第 3、第 4和第 5峰对UMR 10 6细胞增殖有显著的抑制作用。结论 :鹿茸蛋白中含有多种双向调控UMR 10 6细胞增殖的生物活性因子 ,既有剂量双向效应 ,也有与分子量相关的不同调控蛋白 。

鹿茸多糖的研究概况

鹿茸多糖(PAPS)作为鹿茸的主要活性成分,具有增强机体免疫能力、肝损伤保护及抗肿瘤等多种生物活性。文中就近年来鹿茸多糖提取、纯化、结构鉴定、药理活性等方面进行综述,为合理开发鹿茸多糖产品奠定文献基础。

鹿茸醇提取物对大鼠海马长时程增强的易化作用

目的研究鹿茸醇提物对海马CA3区Schaffer侧枝-CA1区通路长时程增强的影响。方法采用立体定位仪固定大鼠头部,按照脑立体定位图谱确定刺激电极坐标和记录电极坐标,在体电生理技术检测海马CA1区长时程增强。本研究共包括3组实验,LRE和LRW对基础突触传递的作用,实验分为两组LRE(500mg/kg)组和LRW(500mg /kg)组,每组各5只大鼠;LRE和LRW对强高频刺激S-HFS诱导LTP的影响,实验分为3组,即溶剂对照组(Vehicle)(n=8)、LRE(500mg/kg)组(n=5)和LRW(500mg k/g)组(n=5);LRE和LRW对弱高频刺激W-HFS诱导LTP的影响,实验分为5组,即Vehicle组(n=7)、LRW(500mg/kg)组(n=6)、LRE(100mg/kg)组(n=5)、LRE(250mg/kg)组(n=5)、LRE(500mg/kg)组(n=5)。结果单独给予20pulses100Hz的弱刺激不能诱导出长时程增强;灌胃给予鹿茸醇提物500mg/kg,作用30min后,应用同等强度的弱刺激能够成功诱导出长时程增强;而鹿茸水提物则无此作用。结论鹿茸醇提物能够易化海马CA1区长时程增强,具有潜在的促智作用。

鹿茸多糖提取工艺的优化

通过响应面分析法与旋转正交回归法对鹿茸多糖的提取工艺进行优化,以期得到最佳工艺。应用响应面分析法对酶解温度、时间、pH值进行考察,得到最佳工艺参数为:温度54℃,时间11h,pH8;确定醇析最适浓度为70%;对三氯乙酸除蛋白法、单宁除蛋白法及酶-Sevag除蛋白法进行比较,并采用旋转正交回归法对酶-Sevag法进行分析,证明当多糖溶液:Sevag试剂=1:1,氯仿:正丁醇=4.2:1时,除蛋白效果最佳。应用最佳工艺后,多糖提取率比传统方法提高了48.35%。

鹿茸多肽超声提取工艺研究

目的通过正交试验法进行鹿茸多肽超声提取工艺的研究。方法采用正交试验法,以水为溶媒进行回流提取,以鹿茸多肽为指标,优选鹿茸多肽超声提取工艺中的溶媒用量,对提取时间及提取次数进行优化。结果与结论考虑实际生产成本及实际生产实践经验,确定鹿茸多肽超声提取工艺:用10倍量水,提取3次,每次10 min。

鹿茸醇提物对用环磷酰胺处理的小白鼠红细胞免疫功能的影响

结果表明 ,鹿茸醇提物组 (即实验组 )小白鼠红细胞的C3b受体酵母菌花环率为( 1 3 5± 0 2 ) %,对照组为 ( 1 0 1± 0 1 ) %,两组相比较 ,差异显著 (P <0 0 5) ;试验组小白鼠红细胞的免疫复合物酵母菌花环率为 1 1 3± 0 2 %,对照组为 1 6 3± 0 3%,两组相比较 ,差异显著 (P <0 0 5)。这一试验结果提示 ,鹿茸醇提物可增强由环磷酰胺诱导的免疫功能低下的小白鼠红细胞的免疫功能 ,即鹿茸醇提物对于环磷酰胺对机体的副作用具有一定的对抗作用。

鹿茸蛋白提取物对小鼠心肌缺血损伤的保护作用

目的:探讨口服鹿茸蛋白提取物(pilose antler extracts,PAEs)对急性心梗小鼠模型的保护作用。方法:采用C57BL/6小鼠冠状结扎方法制备急性心梗动物模型,将小鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、氯沙坦钾组、PAEs高、中、低剂量组,造模成功后灌胃给药,14 d后N-BT染色法计算心肌梗死面积,HE染色法观察心肌损伤程度,Masson染色法确定纤维含量并确定心肌酶含量的变化。结果:PAEs低、中、高浓度对小鼠心肌缺血程度(Σ-ST)有显著改善作用,显著减小梗死面积,降低纤维化程度和小鼠心梗后心肌组织CK、CK-MB、LDH与血清LDH含量。结论:口服鹿茸蛋白提取物对损伤心肌具有明显的保护作用,其作用机制可能与调节心肌酶水平、降低心肌纤维化程度、促进缺血心肌恢复等机制有关。

梅花鹿茸多糖提纯

以梅花鹿鹿茸为原料,经提取、分离、纯化得到鹿茸多糖(PAPS)粗样品,将粗品在DEAE-Cellulose 32和Sephadex G-75柱上进一步纯化,得到PAPS样品.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,PAPS的相对分子量为70 kDa-80 kDa,采用苯酚-硫酸法测得总糖含量为825.51μg/mg,Folin-酚法测得蛋白质含量为20.27μg/mg,硫酸钡比浊法测得硫酸基含量为58μg/mg.红外光谱分析表明:PAPS具有明显的多糖特征吸收峰.

鹿茸醇提物对白细胞减少动物模型影响初探

用鹿茸醇提物对环磷酰胺诱导的白细胞减少动物模型进行灌胃实验。实验结果表明 :鹿茸醇提物对环磷酰胺所诱导的小鼠白细胞减少。

鹿茸醇提物抗氧化作用的实验研究

用鹿茸醇提物对用环磷酰胺处理后的小鼠进行灌胃实验,以探讨鹿茸醇提物对该小鼠抗氧化作用的影响。实验结果表明:鹿茸醇提物组(即实验组)小鼠每50μL血中的红细胞内SOD的活性为191±07u,而对照组为152±09u,两组相比较,差异显著(P<0.05);实验组小鼠肾脏中丙二醛(MDA)的含量为327±02nmol/g,而对照组为356±05nmol/g,两组相比较,差异显著(P<0.05)。结果提示。

复方茸血胶囊鹿茸多肽的含量测定及提取工艺研究

目的：制定复方茸血胶囊中鹿茸多肽含量测定方法及制备工艺的研究。方法：采用正交实验设计。以出膏率为指标，优选杜仲、枸杞、当归、熟地黄提取最佳工艺中的溶媒用量、提取时间及提取次数。采用福林酚法测定复方茸血胶囊中鹿茸多肽含量。结果：最佳提取工艺第一次加水十倍量，煎煮2．0h，第二次煎煮时间1．5h，加水8倍量。鹿茸多耿线性范围：0．2142～0．4998μg。样品含量测定数据：不得少于36．8mg。结论：本法简便、准确，可用于复方茸血胶囊的含量测定。经过优化后制备的复方茸血胶囊各项指标符合规定，工艺重复性好。适于规模化生产。

鹿茸醇提物对用环磷酰胺处理的小白鼠生理生化指标的影响

用环磷酰胺处理小白鼠 ,就鹿茸醇提物对小白鼠的影响进行实验研究 ,用以探讨鹿茸醇提物对小白鼠的作用及作用机制。结果表明 :鹿茸醇提物组 (即实验组 )小白鼠血清钙、镁、磷含量分别为 2 2 4± 0 0 3mmol/L、 1 6 5± 0 0 2mmol/L、 2 2 8± 0 0 4mmol/L ,对照组则分别为 2 1 2± 0 0 3mmol/L、 1 6 4± 0 0 3mmol/L、 2 2 9± 0 0 3mmol/L ,两组相比 ,无显著性差异 (p >0 0 5 ) ;实验组小白鼠血清中高密度脂蛋白 (HDL)、总胆固醇 (CHO)、甘油三酯(TG)含量分别为 1 4 8± 0 0 7mmol/L、 2 0 7± 0 1 0mmol/L、 0 78± 0 0 8mmol/L ,对照组则分别为 1 1 5± 0 0 9mmol/L、 2 1 3± 0 1 5mmol/L、 0 82± 0 0 5mmol/L ,与对照组相比 ,实验组HDL较高 ,有显著差异 (P <0 0 5 ) ,总胆固醇、甘油三酯较低 ,差异不显著 (P >0 0 5 ) ;实验组小白鼠血清总蛋白、白蛋白、球蛋白分别为 74 6± 0 5 6g/L、 2 5 2± 0 2 9g/L、 49 4± 0 73g/L ,对照组则分别为 6 2 1± 0 2 3g/L、 2 1 3± 0 2 1g/L、 40 8± 0 2 5g/L ,实验组总蛋白、白蛋白、球蛋白极显著高于对照组 (P <0 0 1 )实验组小白鼠体重增加 2 37± 0 1 8g/只 ,而对?

鹿茸醇提物对小白鼠溶血素含量的影响

用鹿茸醇提物给用环磷酰胺处理的小白鼠进行灌胃试验。结果表明，鹿茸醇提物可显著提高环磷酰胺处理过的小白鼠体内以鸡红细胞作为抗原的溶血素的含量。这一结果提示，鹿茸醇提物可提高用环磷酰胺处理过的小白鼠的特异性免疫功能。

鹿茸提取物对血管性痴呆大鼠模型的治疗作用及其机制

目的:研究鹿茸提取物对血管性痴呆(vascular dementia,VaD)大鼠模型的治疗作用及其机制。方法:选取120只Wistar大鼠,通过结扎双侧颈总动脉造模,将大鼠随机分为假手术组、模型组、西药组(盐酸多奈哌齐:0.45 mg/kg)、中药不同剂量组(鹿茸提取物:5~20 mg/kg)。术后3 d开始灌胃,连续28 d。采用水迷宫实验分析大鼠定航及空间探索能力变化,HE染色评价海马区细胞形态学改变,免疫组织化学判断Bcl-2表达水平变化,蛋白质印迹法测定蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、真核细胞起始因子2α(eukaryoticinitiation factor 2α,EIf2α)表达水平变化。结果:与模型组相比,鹿茸提取物可使VaD大鼠定向航行能力及空间探索能力得到显著改善。HE染色提示鹿茸提取物不同剂量组大鼠海马细胞形态和排列方面有不同程度改善。免疫组织化学结果显示鹿茸提取物处理后可提高大鼠海马细胞Bcl-2的表达。蛋白质印迹法显示鹿茸提取物可下调PERK,EIf2α的表达。结论:鹿茸提取物对大鼠VaD模型具有一定治疗作用,其机制可能与抑制PERK/EIf2α、上调Bcl-2表达有关。鹿茸提取物可能是治疗VaD的潜在药物。

响应面法优化超声提取梅花鹿鹿茸多肽工艺

目的:采用响应面法优化梅花鹿鹿茸多肽的提取工艺。方法:以鹿茸多肽含量为评价指标,通过单因素试验分别考察粉碎粒度、液料比和提取时间3个因素对多肽含量的影响,采用Box-Behnken的中心组合实验设计原理优化梅花鹿鹿茸多肽的提取工艺。结果:最佳提取工艺:粉碎粒度为80~100目,液料比为12,提取时间为40 min。结论:响应面法优化梅花鹿茸多肽提取工艺合理,具有较好的应用价值。

鹿茸蛋白提取物对帕金森模型秀丽隐杆线虫毒性作用与药理作用的研究

目的研究不同浓度鹿茸提取物对帕金森模型线虫A30P(以下简称A30P线虫)的毒性作用与药理作用。方法分别给予A30P线虫0、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8 mg/mL鹿茸蛋白提取物,观察A30P线虫生存率、生长发育、生殖能力评价鹿茸蛋白提取物对A30P线虫的毒性作用。观察A30P线虫运动行为、树突恢复评价鹿茸蛋白提取物对A30P线虫的药理作用。结果与对照组相比,8 mg/mL鹿茸蛋白提取物降低了A30P线虫的存活率(P<0.05),且抑制A30P线虫产卵(P<0.05)。1、2、4 mg/mL鹿茸蛋白提取物增加A30P线虫身体弯曲频率(P<0.01),促进A30P线虫树突的修复(P<0.01),显著增加A30P线虫树突恢复比率(P<0.01)。结论一定浓度范围内,鹿茸蛋白提取物能恢复A30P线虫行为,抑制树突退化缺失,有效治疗A30P线虫帕金森病,提示鹿茸蛋白提取物是其治疗帕金森病的潜在药物,值得进一步开发。

鹿茸血提取物改变乳腺癌荷瘤小鼠免疫细胞比例并抑制移植瘤生长

目的研究鹿茸血对健康及荷瘤小鼠免疫系统的影响。方法建立荷乳腺癌小鼠模型,流式细胞术检测鹿茸血灌胃处理后,健康鼠以及荷瘤小鼠外周血总T细胞(CD3^+)、辅助性T细胞(CD4^+)、毒性T细胞(CD8^+)、总B细胞(CD45R^+)以及髓性抑制细胞(MDSC,CD11b^+Gr-1^+)比例。结果鹿茸血提取物能下调健康小鼠外周血总T细胞,减弱细胞免疫,上调B细胞比例,增强体液免疫,并且能够增加荷瘤小鼠辅助性T细胞、毒性T细胞、总T细胞以及总B细胞比例,并降低MDSC比例,抑制移植瘤的生长速度。结论鹿茸血天然提取物增强小鼠免疫功能,抑制移植瘤生长。

鹿茸基因组DNA提取方法的比较研究

本研究旨在建立一种稳定、高效的鹿茸药材DNA提取方法,以满足后续的鹿茸DNA条形码鉴定方法需求。采用2种试剂盒、改良的CTAB法以及SDS法对市场上5个厂家共8批次的鹿茸药材进行基因组DNA的提取,参考2015版《中华人民共和国药典》四部通则9107考察了样品量、水浴温度、水浴时间3个因素。实验结果表明4种方法均可以从鹿茸药材中提取出基因组DNA,其中天根试剂盒提取效果最佳,改良的CTAB法提取效果较差;通过方法学考察得出使用天根试剂盒,提取条件为样品量70 mg、水浴温度56℃,水浴时间6 h时提取效果最佳。本研究优化得到的天根试剂盒提取鹿茸DNA方法操作简便,提取DNA浓度、质量优良,能够用于后续的DNA条形码鉴定中。

基于Hippo信号通路探讨鹿茸提取液对BMSCs成骨分化的影响

目的观察鹿茸提取液对SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨分化及Hippo信号通路的影响。方法将3、4代BMSCs随机分为正常组、诱导组以及鹿茸组。酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法分别检测6、12 d以及18 d碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性及水平;茜素红染色法检测3组BMSCs钙结节生长增殖情况;qRT-PCR法和蛋白质印迹法(Western blot)检测RUNX2及Hippo信号通路MST1和YAP的转录表达与蛋白表达水平。结果ELISA实验结果表明,鹿茸提取液可以提高ALP的活性,12 d鹿茸组ALP的活性达到最高,18 d鹿茸组ALP的活性显著上调(P<0.01);茜素红实验结果显示,鹿茸组观察到大量且密集的钙结节形成,提示鹿茸提取液可有效促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化;qRT-PCR的实验结果表明,与正常组相比,鹿茸组YAP和RUNX2 mRNA显著上调(P<0.01);Western blot法检测结果显示,鹿茸提取液可显著上调YAP蛋白表达水平(P<0.01),并且明显上调RUNX2蛋白表达水平(P<0.05)。结论鹿茸提取液能够影响RUNX2以及Hippo信号通路中MST1和YAP相关蛋白进而推进骨髓间充质干细胞向成骨细胞的转化。