The Effects of Low-Energy Nitrogen Ion Implantation on Pollen Exine Substructure and Pollen Germination of Cedrus deodara

The aim of this study is to investigate the biological effects of ion beams on pollen. Pollen grains of Cedrus deodara were implanted with 30 keV nitrogen ion beams at doses ranging from 1 × 10^15 ions/cm^2 to 15 × 10^15 ions/cm^2. The effects of N^＋ implantation on the pollen exine substructure were examined using an atomic force microscope （AFM）, and the structure and morphology of pollen and pollen tubes were observed using a laser scanning confocal microscope （LSCM）. AFM observations distinctly revealed the erosion of the pollen exine caused by N^＋ implantation in the micrometer to nanometer range. Typical results showed that the erosion degree was linearly proportional to the ion dose. Pollen germination experiments in vitro indicated that N^＋ implantation within a certain dose range increased the rate of pollen germination. The main abnormal phenomena in pollen tubes were also analyzed. Our results suggest that low energy ion implantation with suitable energy and dosage can be used to break the pollen wall to induce a transfer of exogenous DNA into the pollen without any damage to the cytoplasm and nuclei of the pollen. The present study suggests that a combination of the method of ion-beam-induced gene transfer and the pollen-tube pathway method （PTPW） would be a new plant transformation method.

A New Flavonoid in Pine Needles of Cedrus deodara

Objective To study the chemical constituents of flavonoids in pine needles of Cedrus deodara.Methods Flavonoids were isolated and purified from ethyl acetate extract of pine needles by chromatography on silica gel and Sephadex LH-20.Their structures were identified on the basis of spectroscopic analysis and chemical evidence.Results Five flavonoids were isolated and purified.Their structures were identified as cedrusone A(1),myricetin (2),2R,3R-dihydromyricetin(3),quercetin(4),and 2R,3R-dihydroquercetin(5).Conclusion Compound 1 is a new compound.Compounds 2-5 are isolated from pine needles of this genus for the first time.

HPLC-DPPH法评价雪松松针抗氧化活性成分

目的评价雪松松针抗氧化活性成分。方法以维生素C(VC)和没食子酸为阳性对照,采用高效液相色谱(HPLC)法测定1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)溶液加入雪松松针抗氧化活性成分后DPPH峰面积的衰减情况,并通过计算DPPH自由基的清除率和半数抑制浓度(IC_(50)),来评价雪松松针3种有效部位及8个单体成分的抗氧化活性。采用Agilent Eclipse Plus-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-水(62∶38,V/V)为流动相;检测波长为517 nm;流速为1.0 mL/min;柱温为25℃;进样量为20μL。结果雪松松针各有效部位清除DPPH自由基活性的能力大小依次为总黄酮>总多酚>总木脂素,IC_(50)分别为76.10、100.50、115.40μg/mL。与阳性对照比较,除山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷外,7个单体化合物清除DPPH自由基活性的能力大小依次为二氢杨梅素>金丝桃苷>原儿茶酸>没食子酸>阿魏酸>杨梅素>山柰酚-3-O-(6″-O-E-阿魏酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷>VC>异鼠李素,IC50分别为16.50、19.40、23.73、27.24、32.10、32.20、47.60、93.20、297.20μg/mL。结论建立了HPLC-DPPH法用于评价雪松松针抗氧化活性;雪松松针具有较强的抗氧化活性,其中有效部位总黄酮、总多酚及单体成分二氢杨梅素、金丝桃苷等是具有开发前景的纯天然抗氧化剂。

雪松松针多糖的醇沉、脱蛋白工艺及抗氧化活性研究

对雪松松针多糖的醇沉、脱蛋白工艺及其体外抗氧化活性进行研究。在单因素试验基础上,利用Box-Behnken模型对提取液浓缩比、乙醇体积分数和醇沉时间进行优化,比较多糖得率确定最佳雪松松针多糖醇沉工艺条件。以蛋白质清除率和多糖损失率为指标,比较了Sevage法和三氯醋酸(TCA)法的脱蛋白效果,并对试剂用量、脱蛋白次数进行了考察,然后利用DPPH和ABTS自由基法对纯化后多糖的抗氧化活性进行评价。研究结果表明:优化的雪松松针多糖一级醇沉条件为粗提液体积和松针干质量的比例(浓缩比)为3∶1(mL∶g,下同),乙醇体积分数为71%,醇沉温度为40℃,醇沉时间为10 h,在此条件下,雪松松针多糖得率为3.81%,结果与预测值接近。收集多糖后的上清液再按浓缩比1∶1浓缩,筛选得到二级醇沉的乙醇体积分数为80%。Sevage法脱蛋白效率优于TCA法,其最佳条件为Sevage试剂与多糖溶液的体积比为1∶1,脱除蛋白次数为3次,经UV法测得脱蛋白后的一级、二级醇沉多糖(以葡萄糖折算)质量分数分别为35.36%和36.62%。清除DPPH与ABTS自由基能力依次为Vc>二级醇沉多糖>BHT>一级醇沉多糖,纯化后的雪松松针80%醇沉多糖表现出良好的抗氧化活性。

雪松松针二氯甲烷提取物的化学成分研究

目的:研究雪松Cedrus deodara松针二氯甲烷提取物的化学成分。方法:采用硅胶和Sephadex LH-20等柱色谱方法对其化学成分进行分离和纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定结构。结果:从雪松松针95%乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位分离得到9个化合物,分别鉴定为:豆甾醇(1)、齐墩果酸(2)、对羟基苯甲醛(3)、β-谷甾醇(4)、丁香脂素(5)、胡萝卜苷(6)、对羟基苯甲酸(7)、没食子酸甲酯(8)、没食子酸(9)。结论:除了化合物4外,其余8个化合物均为首次从该属植物针叶中分离得到。

大孔吸附树脂富集纯化雪松松针总黄酮工艺的优化

目的优化大孔吸附树脂富集纯化雪松Cedrus deodara(Roxb.)Loud.松针总黄酮工艺。方法 40%乙醇回流提取总黄酮,紫外分光光度法测定其含有量。考察12种大孔吸附树脂(D-101、NKA-9、HPD100、AB-8、D4020、ADS-17、HPD826、HPD450、DM130、XAD-16、HPD722、HP-20)对总黄酮的吸附解吸能力;以上样液质量浓度、上样液p H值、上样量为影响因素考察最佳树脂吸附能力;以乙醇体积分数、除杂溶剂、乙醇洗脱用量为影响因素,考察最佳树脂解吸能力,优化富集纯化工艺。结果 HPD722大孔吸附树脂纯化效果最好,最佳条件为上样液质量浓度3.85 mg/m L,上样液p H值4.0,上样量4 BV,乙醇体积分数70%,除杂溶剂4 BV水,乙醇洗脱用量2 BV,总黄酮纯度达到54.28%。结论该方法合理可行,可用于富集纯化雪松松针总黄酮。

雪松松针总皂苷的超声提取工艺优选及体外抗肿瘤活性研究

目的:优选雪松松针总皂苷的超声提取工艺,并考察其体外抗肿瘤活性。方法:采用紫外分光光度法测定雪松松针总皂苷的含量。在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、液料比、提取时间为因素,根据Box-Behnken设计进行试验,以雪松松针总皂苷含量为响应值进行响应面分析,对雪松松针总皂苷的超声提取工艺进行优化。考察所制雪松松针总皂苷对人肺癌A549细胞、人肝癌Hep G2细胞和人胃癌MKN45细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果:优选工艺为乙醇体积分数73%,液料比13∶1,提取2次、每次65 min;以此工艺所得雪松松针总皂苷平均含量为6.693 mg/g,与预测值6.508 mg/g的相对误差为2.84%。雪松松针总皂苷对A549、Hep G2、MKN45细胞的增殖均有抑制作用,且呈明显的浓度依赖性,IC_(50)分别为(63.98±6.79)、(154.91±10.20)、(176.32±14.26)μg/ml。结论:优选的雪松松针总皂苷的超声提取工艺合理、可行;其对A549、Hep G2、MKN45细胞增殖均有一定的抑制作用,其中对A549细胞作用最为明显。

雪松松针总多酚的纯化工艺和抗氧化活性研究

通过吸附-解吸附能力考察，从树脂NKA-9、S-8、AB-8、D101、HPD-100及HPD-600中筛选出适合纯化雪松松针总多酚的大孔树脂，并确定纯化工艺参数。结果表明，HPD-600树脂为纯化雪松松针总多酚的优良材料；最佳纯化工艺为：上样量为8BV、浓度1．5mg／mL、pH4．0—5．0，以2BV／h流速进行动态吸附；以10BV／h流速的6BV蒸馏水冲洗除杂后，用3BV的70％乙醇以4BV／h的流速进行解吸。在此条件下，多酚的纯度由9．88％提高到34．56％，约为纯化前的3．5倍。利用DPPH和ABTS自由基法对纯化前后雪松松针总多酚的抗氧化活性进行了比较，结果显示，清除DPPH和ABTS自由基能力依次为Vc〉纯化后的总多酚提取物〉BHT〉纯化前的总多酚提取物。通过测定纯化后雪松松针总多酚对野生型秀丽隐杆线虫体内活性氧的水平评价其体内抗氧化能力，结果显示，雪松松针总多酚降低了线虫体内的活性氧水平，10μg／mL雪松松针总多酚提取物溶液与4000μM／L的Vc对线虫的体内抗氧化能力相当，表现出良好的抗氧化活性。

雪松松针二氯甲烷提取物的化学成分研究(Ⅱ)

目的:研究雪松松针二氯甲烷提取物的化学成分。方法:利用硅胶及Sephadex LH-20柱色谱分离、纯化,根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果:从雪松松针二氯甲烷提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为:阿魏酸(1)、蛇床子素(2)、β-苯丙烯酸(3)、丹皮酚(4)、β-谷甾醇(5)、厚朴酚(6)、和厚朴酚(7)。结论:除化合物5外均为首次从该植物中分离得到。

正交试验法优选雪松松针中总黄酮提取工艺

目的：优选雪松松针中总黄酮的最佳提取工艺。方法：以总黄酮含量为检测指标，采用L9（3^4）正交试验进行超声提取。结果：影响提取工艺的因素依次为：温度（A）〉提取时间（C）〉固液比（B），确定的雪松松针中总黄酮的最佳提取工艺为：用30倍的无水乙醇，于40℃下超声提取3次，每次20min。结论：该工艺简便快速，合理可行。

XRF法测定雪松松针及花粉中的无机元素

结合薄样技术,采用自制XRF分析仪,建立了雪松松针及花粉中多种无机元素进行同时测定的方法,并对本地雪松松针及花粉样品进行了分析.结果表明：雪松松针及花粉中均含有K、Ca、Ti、Mn、Fe、Co、Cu、Zn、Rb、Sr等多种无机元素,其中K、Ca含量相对较高;不同地点松针中无机元素含量存在差异;精密度（RSD）（n=6）在2.4%~6.3%之间,加标回收结果表明,同一元素3种不同加标水平的平均加标回收率在94%~104%之间.

Box-Behnken设计-响应面法优选雪松松针中蛇床子素的提取工艺

目的:优选雪松松针中蛇床子素的提取工艺。方法:采用高效液相色谱法测定蛇床子素含量。在单因素考察的基础上,以乙醇体积分数、提取时间、料液比为考察因素,以蛇床子素含量为响应值,采用Box-Behnken设计-响应面法优选雪松松针中蛇床子素的提取工艺,并进行验证试验。结果:确定的最佳提取工艺为乙醇体积分数88%,料液比1∶20(g/mL),提取2次、每次57min。在此工艺条件下,提取得到蛇床子素的平均含量为0.675 7 mg/g(RSD=1.78%,n=3),与预测值0.680 9 mg/g的相对误差为0.59%。结论:优选的最佳提取工艺方法简便、可行,可用于雪松松针中蛇床子素的提取。

^(60)Co-γ射线辐照处理对雪松种子萌芽及幼苗生长作用的影响

利用60Co-γ对催芽后的雪松种子进行辐照处理,剂量分别为0(对照)、20、40、608、0 Gy,剂量率为2 Gy/min。研究了不同剂量处理对种子萌芽期、萌芽率、幼苗成活率、绿黄苗比率、绿黄苗生长高度的影响。结果表明:辐照处理延缓了种子萌芽期和萌芽高峰期;20 Gy处理使种子萌芽率下降了52%;经20 Gy处理的幼苗存活率几乎与对照相同,但经40、60和80 Gy处理后幼苗成活率下降了85%左右;20 Gy处理对雪松幼苗中黄色苗比例影响不大,经40 Gy处理后没有出现黄色苗,辐照处理同时也降低了幼苗的生长高度,对黄色苗的抑制作用较为明显。若进行雪松的诱变育种,20 Gy是首选剂量。

雪松松针多糖超声波酶法提取及其抗氧化性

为优化雪松松针多糖超声波酶法的提取工艺,并研究多糖结构及其抗氧化性。通过响应面法分析确定最佳提取参数为:3. 0 g松针粉末,液料比20∶1(m L∶g),提取温度80℃,超声功率560 W,超声时间47 min,纤维素酶用量12 FPU/g原料,提取两次,多糖得率高达10. 39%。采用高效液相色谱、红外光谱和核磁共振光谱等对松针多糖进行了结构表征,松针多糖以β-糖苷键为主要连接方式,并由葡萄糖、果糖、阿拉伯糖和半乳糖等单糖组成。体外抗氧化性研究结果表明:松针粗多糖对羟基自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)的清除能力远高于纯化多糖,呈现出良好的量效关系,粗多糖对·OH和DPPH·的半抑制浓度IC50分别为0. 47 g/L和0. 076 g/L。

雪松松针乙醇提取物的抗氧化活性及构效关系研究

研究雪松松针乙醇提取物的抗氧化活性及构效关系。通过体外化学分析法,测定雪松松针乙醇提取物的抗氧化活性;采用福林酚法和三氯化铝法,测定其总酚和总黄酮含量;利用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)与核磁共振(NMR)技术,鉴定其主要成分,并对其抗氧化作用的构效关系进行初步探讨。结果表明,雪松松针乙醇提取物对实验体系中的ABTS(EC50:0.48±0.01 mg/mL)和DPPH(EC50:32.40±0.76μg/mL)自由基有很好的清除作用,能够高效地清除羟自由基(EC50:1.73±0.01 mg/mL)和过氧化氢(EC50:89.48±0.54μg/mL)中的活性氧,抑制脂质过氧化(EC50:9.85±0.14 mg/mL)并具有较高的还原能力,展现出显著的抗氧化活性;提取物拥有较高的总酚(40.30±2.13 mg没食子酸当量/g提取物)和总黄酮(56.62±1.53 mg芦丁当量/g提取物)含量;甲基松柏苷、阿魏酸-β-D-吡喃葡萄糖苷、荛花酚、断氧化马钱苷、(E)-1-O-对香豆酰-α-D-吡喃葡萄糖苷和天竺葵素-3-O-葡萄糖苷是松针乙醇提取物的主要成分,这些化合物结构中大量存在的具有氢原子转移或单电子转移能力的酚羟基、甲氧基、苄基等基团,是其展现良好抗氧化活性的重要原因。

雪松松针黄酮类化学成分的研究

目的研究雪松Cedrus deodara松针中黄酮类化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱方法对其醋酸乙酯萃取部位中黄酮类化学成分进行分离和纯化,并根据其理化性质及波谱数据鉴定结构。结果从雪松松针中分离得到5个黄酮类化合物,分别鉴定为3′,5′-二甲氧基杨梅素-3-O-(6″-O-乙酰基)-α-D-吡喃葡萄糖苷[3′,5′-dimethoxymyricetin-3-O-(6′′-O-acetyl)-α-D-glucopyranoside,1]、杨梅素(myricetin,2)、2R,3R-二氢杨梅素(2R,3R-dihydromyricetin,3)、槲皮素(quercetin,4)、2R,3R-二氢槲皮素(2R,3R-dihydroquercetin,5)。结论化合物1为新化合物,命名为雪松酮A(cedrusone A),化合物2～5均为首次从该属植物针叶中分离得到。

雪松松针醋酸乙酯部位化学成分研究

目的研究雪松Cedrus deodara松针醋酸乙酯部位的化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、聚酰胺等柱色谱方法对化学成分进行分离和纯化,根据其理化性质及波谱数据鉴定结构。结果从雪松松针95%乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位分离得到12个化合物,分别鉴定为杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷(1)、3′,4′-二甲氧基杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷(2)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(3)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(4)、山柰酚-3-O-(6″-O-E-阿魏酰基)-β-D-葡萄糖苷(5)、山柰酚-3-O-(6″-O-E-肉桂酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、金丝桃苷(7)、雪松素(8)、山柰酚(9)、莽草酸(10)、莽草酸丁酯(11)、原儿茶酸(12)。结论除化合物10、12外,其余10个化合物均为首次从该属植物针叶中分离得到。

响应面分析法优化雪松松针多糖提取工艺研究

目的:建立雪松松针中多糖的含量测定方法,并优化确定其提取工艺。方法:以葡萄糖为对照品,采用紫外分光光度法,在波长488nm处测定雪松松针中多糖的含量;在单因素试验的基础上,采用响应面法,通过三因素三水平的Box-Behnken中心组合实验设计,对雪松松针中多糖提取工艺的主要影响因素(提取时间、液料比、提取次数)进行考察并建立相应的数学模型,以多糖得率为响应值进行响应面分析(RSA)。结果:葡萄糖在0.005-0.030mg/m L(r^2=0.9993)浓度范围内线性关系良好,加样平均回收率和RSD分别为100.42%和2.24%(n=6);最佳工艺条件为提取时间114min,液料比22∶1(mL/g),提取次数2次,提取温度为100℃;在此最佳工艺条件下,多糖的含量为4.37%,结果与模型预测值相符。结论:所建立的含量测定方法简便、准确、重复性好,可用于雪松松针中多糖的含量测定和质量控制;优选得到的最佳工艺条件经验证稳定、合理、可行。

正交试验优选雪松松针中莽草酸的提取工艺

目的优选雪松松针中莽草酸的最佳提取工艺。方法采用L9(34)正交试验设计,以莽草酸的含量为指标,以液料比、浸泡时间、提取时间为因素,优化雪松松针中莽草酸的提取工艺。结果最佳提取工艺为加20倍量的水,浸泡0.5 h,加热回流2 h。在最佳工艺条件下,提取的莽草酸含量为3.58%。结论优选得到的提取工艺简单、稳定、可行。

RP-HPLC法同时测定雪松松针中杨梅素、槲皮素和山柰酚的含量

目的:建立同时测定雪松松针中3个黄酮类化合物杨梅素、槲皮素和山柰酚含量的反相高效液相色谱法。方法:样品用50倍60%甲醇回流提取1 h,提取液加10%盐酸水解1 h。采用TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长360 nm,柱温30℃。结果:雪松松针中杨梅素、槲皮素和山柰酚3个黄酮类化合物浓度在0.4～8.0μg.mL-1、0.5～9.5μg.mL-1和0.8～15.2μg.mL-1范围内呈良好线性关系,相关系数在0.9998～0.9999之间;加样回收率(n=9)分别为98.4%,97.5%,98.9%。结论:该方法简单、快速、高效,可用于雪松松针中黄酮类化合物的测定。