掌叶半夏提取物的有效部位对体外培养宫颈癌细胞的促凋亡作用

目的:观察中药掌叶半夏提取物的有效部位(pinellia extract fraction,PE)对体外培养的两种宫颈癌细胞株的作用,力求寻找一种能有效防治女性宫颈病变的纯中药制剂。方法:将4种不同浓度PE分别作用于Hela和Caski细胞1-5天,用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,溴化噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:PE对两种宫颈癌细胞株的生长均表现出明显的抑制作用,流式细胞术检测结果显示PE作用后两种细胞株均呈现出凋亡,且随着作用时间延长,凋亡细胞的比例明显增加。结论:PE对两种宫颈癌细胞株有明显的抑制生长和促凋亡作用;为进一步研究PE的药物作用机制和新药的研制开发奠定了初步的基础。

掌叶半夏提取物对宫颈癌荷瘤小鼠脾脏免疫的作用

目的观察掌叶半夏提取物(Pinellia extracts,PE)对HPV+TC-1荷瘤小鼠T细胞免疫应答的作用。方法宫颈癌荷瘤小鼠建模后随分成4组:机对照组(生理盐水,0.2 mL/d,灌胃)、PE低剂量组(10 mg/kg,0.2mL/d,灌胃)、PE高剂量组(20 mg/kg,0.2 mL/d,灌胃)、CDDP组(4 mg/kg,0.2 mL/3 d,腹腔注射)。给药期间测瘤、描绘肿瘤生长曲线,21天后处死小鼠并计算抑瘤率,流式细胞术检测脾脏CD4+和CD8+T细细胞以及Th1、Th2、Treg和Th17亚群的比例。结果抑瘤率:CDDP组(29.82%)>PE高剂量组(21.73%)>PE低剂量组(8.23%);PE高剂量组和CDDP组CD4+和CD8+T细胞比例较阴性对照组均显著增多(P<0.01);PE两组Th1比例显著升高、Th2和Th17比例显著下降(呈现剂量依赖性),Treg亚群分泌TGF-!减少,而FOXP3水平增高。结论 PE能通过诱导CD4+T细胞向Th1型分化,抑制Th1/Th2漂移,改善Treg和Th17的比例,发挥抗肿瘤免疫作用。

掌叶半夏提取物的有效部位对宫颈癌细胞株HPVE6和P53基因表达的影响

目的:观察中药掌叶半夏提取物的有效部位(PE)对CaSki和HeLa细胞人乳头瘤病毒(HPV)E6基因和P53基因表达的影响,进一步阐明PE的抑癌机制。方法:0.15mg/mL的PE作用于CaSki和HeLa细胞24h后,采用RT-PCR方法检测两种细胞HPVE6和P53 mRNA表达的变化,采用Western Blot检测CaSki和HeLa细胞HPVE6、P53蛋白表达的变化。结果:0.15mg/mL的PE作用24h后CaSki和HeLa细胞HPVE6 mRNA和蛋白的表达均明显下降,而P53mRNA和蛋白的表达均明显上升(P<0.05,P<0.01)。结论:PE可以明显抑制CaSki和HeLa宫颈癌细胞株HPVE6基因的表达、促进其P53基因的表达,这可能是PE抗宫颈癌作用的关键环节。

掌叶半夏提取物的有效部位不同给药途径对人宫颈癌细胞株CaSki裸小鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察不同给药途径下掌叶半夏提取物的有效部位(PE)对Ca Ski裸小鼠皮下移植瘤的抑制作用,以探索PE的体内最佳给药途径。方法:建立Ca Ski裸小鼠皮下移植瘤模型,待移植瘤体积增至大约100mm3,将裸小鼠随机分为阴性对照组、灌胃组、腹腔注射组、皮下注射组、顺铂阳性对照组。测量肿瘤径线,计算肿瘤体积并描绘肿瘤生长曲线。药物处理21d,第22天颈椎脱臼处死裸小鼠,称取瘤重,计算抑瘤率。HE染色观察移植瘤组织形态,免疫组化检测移植瘤组织中Ki-67的表达情况。结果:灌胃组、腹腔注射组、顺铂阳性对照组裸小鼠移植瘤重量明显小于阴性对照组和皮下注射组(P<0.05),抑瘤率分别为38.71%,31.86%,45.92%。且灌胃组、腹腔注射组移植瘤组织Ki-67表达明显低于阴性对照组和皮下注射组(P<0.05)。结论:PE能够抑制Ca Ski裸小鼠皮下移植瘤的生长,其体内实验的最佳给药途径可以是灌胃或者腹腔注射,推荐实验中采取灌胃方式。抑制Ki-67的表达可能是PE体内抑瘤作用机制之一。

掌叶半夏提取物的有效部位对CaSki的促凋亡作用机制研究

目的:前期的研究已证实中药掌叶半夏提取物的有效部位(pinellia extract fraction,PE)对体外培养的宫颈癌细胞株CaSki和HeLa有促凋亡作用,通过本次研究进一步明确PE对CaSki的促凋亡作用机制。方法:采用RT-PCR方法检测0.15g/L的PE作用24h后CaSki细胞Bcl-2和Bax mRNA表达的变化,采用Western Blot检测0.15g/LPE作用24h后CaSki细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果:0.15g/L的PE作用24h后CaSki细胞Bcl-2 mRNA和蛋白的表达均明显下降,而Bax mRNA和蛋白的表达均明显上升。结论:PE对CaSki宫颈癌细胞株促凋亡作用之一是抑制Bcl-2基因的表达、促进Bax基因的表达。这为进一步研究PE的抗宫颈癌作用机制以及新药的研制开发奠定了一定的实验基础。