PPTA对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后Caspase-1的影响

目的探讨在豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,I/RI)后盐酸椒苯酮胺(piperphentonamine hydrochloride,PPTA)对蜗内含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)的影响。方法将24只豚鼠随机分为4组,每组6只,分别为正常组、假手术组、I/RI组、PPTA组。PPTA组在豚鼠I/RI后经股静脉注射PPTA,I/RI组以生理盐水代替PPTA注射。RT-PCR检测蜗内Caspase-1的mRNA表达,组间比较检测结果。结果各组耳蜗Caspase-1的mRNA表达量比较:I/RI组显著高于正常组、假手术组和PPTA组(P<0.001);PPTA组显著高于正常组和假手术组(P<0.001);正常组和假手术组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PPTA可能通过抑制Caspase-1 mRNA的表达,从而减少细胞凋亡来对I/RI耳蜗起保护作用。

盐酸椒苯酮胺对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤的听力保护作用

目的探讨盐酸椒苯酮胺(piperphentonamine hydrochloride,PPTA)对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后听功能保护作用及其对耳蜗组织形态的影响。方法将32只成年豚鼠随机分为4组,每组8只,第1组为正常组(不做任何处理),第2组为空白对照组(手术切开颈前正中皮肤,分离出双侧椎动脉、双侧颈总动脉,但不做其它处理),第3组为缺血再灌注对照组(阻断双侧椎动脉及右侧颈总动脉建立豚鼠耳蜗缺血再灌注模型,再灌注同时股静脉给予与PPTA同等剂量生理盐水),第4组为缺血再灌注实验组(手术造模成功后,再灌注同时静脉给予PPTA 10mg/kg)。测量实验前后各组动物的听性脑干反应(ABR)波Ⅲ反应阈。动物造模成功后24小时迅速断头取听泡,每组取4只扫描电镜下观察耳蜗结构、另外4只用透射电镜观察耳蜗结构。结果实验前4组动物ABR波Ⅲ反应阈差异无统计学意义(P>0.05),缺血再灌注24h后第3组ABR波Ⅲ反应阈显著高于第1组和第2组(P<0.05),第4组ABR波Ⅲ反应阈比第3组明显降低(P<0.05);扫描及透射电镜下可见第3组耳蜗外毛细胞纤毛倒伏、脱落,内毛细胞纤毛散乱,血管纹内皮细胞核固缩、边集,神经元可见脱髓鞘改变,而第4组的耳蜗组织损伤明显减轻。结论 PPTA可以防止耳蜗缺血再灌注损伤后毛细胞损伤缺失,对豚鼠耳蜗缺血再灌注听力损伤有保护作用。

盐酸椒苯酮胺致畸敏感期毒性试验

目的评价盐酸椒苯酮胺的安全性,了解其有否致畸变作用。方法用成年Wistar大鼠,从受孕第7天起隔日1次尾静脉注射盐酸椒苯酮胺1、5、20 mg/kg,共4次,覆盖胚胎的器官形成期。于受孕第20天处死动物,解剖观察母鼠及胎鼠内脏与骨骼。结果未见畸变和胚胎毒性。结论盐酸椒苯酮胺的致畸试验为阴性。

冻干工艺及助溶剂聚乙二醇对盐酸椒苯酮胺冻干制剂的影响

目的建立适合盐酸椒苯酮胺的冻干工艺,并考察助溶剂聚乙二醇对盐酸椒苯酮胺制剂性状的影响。方法采用真空冷冻干燥速冻法-30℃预冻3 h和慢冻法-30℃预冻5 h制备盐酸椒苯酮胺冻干制剂,考察其性状,并观察加入不同相对分子质量的聚乙二醇后,冻干样品及其复溶后溶液的外观性状、颜色、澄清度和pH值。结果 2种冻干工艺获得的样品,其外观、溶解性及澄清度无明显差别,水分均<5%。加聚乙二醇冻干后的样品性状好,加水后易溶、澄清、无附着现象,但放置一段时间后颜色变黄,复溶后的溶液稍放一段时间后也变黄。结论 2种冻干工艺均可用于生产盐酸椒苯酮胺冻干制剂,优选慢冻法,聚乙二醇不适宜作为盐酸椒苯酮胺的助溶剂。

盐酸椒苯酮胺对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的：探讨盐酸椒苯酮胺（piperphentonamine hydrochloride，PPTA）对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury，I/RI）后凋亡细胞的保护。方法将24只豚鼠随机分为正常组、假手术组、I/RI组、PPTA组4组，每组6只。采用TUNEL法观察耳蜗细胞凋亡情况，计算凋亡指数（apoptotic index，AI），组间比较检测结果。结果正常组、假手术组和PPTA组耳蜗没有或仅个别部位有凋亡细胞，I/RI组凋亡细胞明显多于其它3组。结论细胞凋亡是耳蜗I/RI的一种损伤形式，PPTA可能通过减少细胞凋亡对I/RI耳蜗起保护作用。

盐酸椒苯酮胺对新西兰兔心电图QT间期的影响

旨在观察不同剂量盐酸椒苯酮胺(piperphentonamine hydrochloride,PPTA)对新西兰兔心电图QT间期(从QRS波开始到T波结束时的时限)的影响。将40只新西兰兔随机分为5组,每组8只,分别为溶剂对照组(5%葡萄糖)、PPTA低(2.5mg/kg)、中(10mg/kg)、高(25mg/kg)剂量组以及阳性对照组(9mg/kg索他洛尔),采用体表心电图技术,通过Pclab-530C生物医学信号采集处理系统记录各组新西兰兔注射相应药物后PPTA标准肢体Ⅱ导联心电图变化。结果表明,2.5mg/kg、10mg/kg PPTA在缓慢给药后不引发QT间期延长,25mg/kg PPTA在缓慢给药后15min内引起QT间期轻度延长(P<0.05);PPTA对QT间期的影响主要发生在给药后0~15min,45min后基本恢复正常。因此,低、中剂量盐酸椒苯酮胺(PPTA)不引发新西兰兔心电图QT间期延长,安全性较高,高剂量可能有引发QT间期延长风险,提示在临床用药时需要注意药物使用剂量,以防QT间期延长和心律失常的发生。

注射用盐酸椒苯酮胺配伍稳定性研究

目的考察注射用盐酸椒苯酮胺在不同制剂中的配伍稳定性。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定注射用盐酸椒苯酮胺在10%葡萄糖注射液(pH=4.4)、5%葡萄糖注射液(pH=4.8)、5%葡萄糖氯化钠注射液(pH=3.9)和0.9%氯化钠注射液(pH=5.1)中的溶液澄清度、颜色、澄明度,并测定2,6,12,24 h时含量变化。结果本品在酸性液体中稳定,加入10%葡萄糖、5%葡萄糖或5%葡萄糖氯化钠注射液中,24 h内稳定性良好。结论本品可加入葡萄糖注射液或5%葡萄糖氯化钠注射液中使用,不宜加入0.9%氯化钠注射液中使用。

注射用盐酸椒苯酮胺稳定性考察

目的:考察注射用盐酸椒苯酮胺稳定性。方法:依据《中国药典》要求,进行了注射用盐酸椒苯酮胺稳定性试验,包括:影响因素试验;加速试验;长期试验。结果:考察2年结果显示,三批样品的外观性状、熔点、溶液的颜色和澄清度、pH、干燥失重、含量均无显著变化,单个及总有关物质有所增加。结论:本品以棕色玻璃瓶包装,在常温阴凉处保存,有效期暂定2年。

盐酸椒苯酮胺对Beagle犬的长期毒性研究

目的:观察连续静脉滴注盐酸椒苯酮胺对Beagle犬产生的长期毒性作用,评价其安全性。方法:取Beagle犬30只,♀♂各半,分成5组,分别为盐酸椒苯酮胺6、12、24、48 mg/kg 4个剂量组和阴性对照组(5%葡萄糖,24 ml/kg),静脉滴注给药,每天1次,连续30 d。检测各组犬的一般生理指标、17项血液生化指标,观察多个部位组织切片的病理变化。结果:24、48 mg/kg盐酸椒苯酮胺组有部分犬在输液完毕后出现一过性平衡或运动失调、四肢无力,一段时间后逐渐恢复;48 mg/kg盐酸椒苯酮胺组犬给药后第15、30天,血浆中丙氨酸转氨酶(ALT)与给药前比较水平升高(P<0.05或P<0.01)。各剂量组犬其他生理指标及其余16项血浆生化指标均未观察到能表明被试药物可致毒性反应的异常改变。病理组织学检查中,24、48 mg/kg盐酸椒苯酮胺组部分犬可见注射部位肿胀,显微镜检查可见注射部位水肿和慢性炎细胞浸润。结论:盐酸椒苯酮胺对Beagle犬的无毒性反应剂量为12 mg/kg,安全剂量范围较大,该结论可作为其临床用药依据。

鼓阶微孔注入盐酸椒苯酮胺对豚鼠庆大霉素耳蜗损伤的保护作用

目的观察盐酸椒苯酮胺(peperphentonamine hydrochloride,PPTA)对豚鼠庆大霉素(gentamicin,GM)耳蜗损伤的保护作用及机制。方法将听力正常的45只健康豚鼠随机分为空白对照组、GM组和PPTA组,每组15只。空白对照组行鼓阶开窗微孔注入人工外淋巴液10μl/d,连用3天;GM组给GM 160mg·kg-1·d-1肌肉注射,连用3天;PPTA组行鼓阶开窗微孔技术注入PPTA 10μl/d和肌肉注射GM 160mg·kg-1·d-1注,连用3天。分别于用药前和用药3天后对三组动物行听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试;第二次ABR测试后处死豚鼠,取出耳蜗,检测各组豚鼠耳蜗组织中过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,并以扫描电镜和透射电镜观察耳蜗细胞形态学改变。结果空白对照组、GM组、PPTA组ABR反应阈实验前比较差异无统计学意义,用药三天后分别为12.75±3.80、47.75±11.08、23.47±9.21dB SPL,各组间比较差异有统计学意义(P<0.001);空白对照组、GM组、PPTA组SOD值比值分别为50.24±9.08、28.23±4.95、43.09±4.59U/mgprot,PPTA组SOD值显著高于GM组(P<0.001);空白对照组、GM组、PPTA组GSH值分别为3.03±0.33、1.51±0.13、2.50±0.16Ggsh/L,PPTA组GSH值显著高于GM组(P<0.001);扫描电镜观察PTTA组耳蜗各回外毛细胞肿胀、倒伏、缺失等较GM组轻,内毛细胞正常,而GM组内毛细胞亦有轻微损伤;透射电镜观察PPTA组耳蜗毛细胞肿胀、线粒体体聚集等改变明显轻于GM组。结论经鼓阶开窗微孔技术注入PPTA可通过清除GM产生的过量氧自由基从而发挥耳蜗保护作用。

盐酸椒苯酮胺稳定性考察

目的考察盐酸椒苯酮胺的稳定性。方法依据2010年版《中国药典(二部)》附录"药物稳定性试验指导原则"的有关技术要求,进行盐酸椒苯酮胺稳定性试验,包括影响因素试验、加速试验、长期试验。结果2年考察结果显示,3批样品的外观性状、熔点、溶液颜色和澄清度、pH、干燥失重、含量均无显著变化,单个及总有关物质含量有所增加。结论盐酸椒苯酮以塑料瓶包装,在常温阴凉处保存,有效期暂定2年。

盐酸椒苯酮胺致突变实验

目的探讨盐酸椒苯酮胺的致突变性。方法用Ames试验、昆明种小鼠骨髓微核试验及中国仓鼠肺细胞染色体畸变试验研究盐酸椒苯酮胺的致突变性。结果盐酸椒苯酮胺Ames试验,小鼠微核试验及中国仓鼠肺细胞染色体畸变三项试验结果均为阴性。结论盐酸椒苯酮胺无致突变作用。

盐酸椒苯酮胺对大鼠和Beagle犬的急性毒性实验研究

目的：观察盐酸椒苯酮胺（PPTA）对大鼠和Beagle犬的急性毒性反应,计算最大给药量并评价其安全性。方法：对SD大鼠分别ig和iv给药,单次剂量为50 mg/kg,间隔4~6 h,连续3次,总剂量为150 mg/kg,给药后连续14 d观察PPTA给药组（n=40）和溶剂对照组（n=20）大鼠毒性反应及体质量等。对Beagle犬单次ivgtt PPTA最大给药剂量200 mg/kg,给药后连续14 d观察PPTA给药组（n=4）和溶剂对照组（n=3）Beagle犬的一般生理指标、体质量、体温、心电指标、血压、血浆电解质、尿液、眼科和病理学指标等。结果：大鼠经ig给药后未见明显异常表现,但iv给药数分钟内出现一过性的行动不稳,连续观察14 d均未见异常情况;给药组大鼠体质量均增长正常。Beagle犬给药过程出现一过性结膜充血、恶心呕吐、流涎、眼睑轻微水肿和后肢无力,有1只出现膀胱出血致尿血的现象;给药后14 d内给药组犬体质量与体温变化情况与溶剂对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,其他各项指标均未观察毒性反应相关的异常改变。结论：大鼠ig和iv给予PPTA的半数致死量（LD50）值均大于150 mg/kg;Beagle犬单次ivgtt给予PPTA 200 mg/kg未导致犬死亡,给药后所出现的异常体征为该药的毒副反应,膀胱出血等可能是该药主要的毒性反应。

盐酸椒苯酮胺在中国健康人体连续给药的耐受性研究

目的评价盐酸椒苯酮胺(PPTA)在健康人体以负荷剂量及维持剂量连续静脉给药24 h的耐受性和安全性。方法随机、开放、单中心I期临床试验设计。11名健康受试者给予PPTA 0.1 mg·kg-1静脉推注20 min,再以0.9 mg·kg-1维持静脉滴注24 h,进行生命体征、动态心电图、体格、实验室、眼科等检查,记录不良事件,评价药物耐受性和安全性。结果所有受试者生命体征基本平稳,无QTc间期延长,未发生严重不良事件,无受试者因不良事件而退出试验。6例受试者发生与研究药物可能有关的不良事件13例次,其中9例次为椒苯酮胺药效学作用,且所有不良事件均自行缓解,未予治疗。结论注射用盐酸椒苯酮胺0.1mg·kg-1静脉推注20 min后,0.9 mg·kg-1静脉滴注24 h安全耐受。

单剂量静注新型钙离子增敏剂M6在大鼠血浆中的药代动力学分析

目的:探究新型钙离子增敏剂M6在大鼠血浆中的药代动力学特点,建立快速、简便的检测大鼠血浆中M6血药浓度的高效液相色谱法(HPLC)。方法:采用颈静脉抽血法,考察大鼠尾静脉注射M6后于1,3,5,10,15,30 min和1,2,4,6,8 h的血药浓度变化,采用HPLC测定血药浓度,流动相1%乙酸水溶液-乙腈(85∶15),检测波长280 nm,绘制血药浓度-时间曲线,通过PKSolver数据处理软件计算M6药代动力学参数。结果:M6检测的线性范围3.125~200 mg·L^(-1),最低定量限0.6 mg·L^(-1),日内、日间精确度和稳定性试验的RSD均<10%,方法回收率均>85%。M6在大鼠体内的主要药代动力学参数为达峰时间(tmax)1 min,最大血药浓度(Cmax)6.67 mg·L^(-1),半衰期(t_(1/2))21.36 min,平均滞留时间(MRT)30.83 min;药-时曲线出现了双峰现象。结论:M6的t_(1/2)较原型药物PPTA延长,具有代谢时间延长的特点,有望开发M6的新药物。建立的HPLC灵敏、快速、准确,可用于大鼠血浆中M6质量浓度的测定。