Pir-b基因慢病毒载体的构建和表达

本研究构建pir-b基因慢病毒载体并检测其在293T细胞中的表达。从小鼠的mRNA中钓取pir-b基因的开放阅读框,与测序载体连接,经过测序鉴定以后,构建含有pir-b基因的慢病毒穿梭质粒,与包装质粒一起共转染293T细胞,收获上清病毒浓缩纯化后转染293T细胞,用Western blot检测PIR-B蛋白的表达。同时以含有egfp基因的慢病毒作为转染效率的对照。结果表明:含有pir-b开放阅读框的慢病毒穿梭质粒构建成功,序列测定的结果与预期完全一致。含有pir-b的慢病毒载体包装成功。Western blot的结果证实外源PIB-B蛋白在293T细胞中正常表达。结论:本研究成功构建了含有pir-b基因的慢病毒载体,转染293T细胞以后正常表达PIR-B蛋白,这为以后深入研究pir-b在免疫调节中的作用奠定了坚实的基础。

PIR-B mAb对哮喘小鼠气道CD34^+祖细胞分化及嗜酸性粒细胞浸润的影响

目的研究PIR-B mAb对哮喘小鼠气道CD34^+祖细胞分化及嗜酸性粒细胞(Eos)浸润的影响。方法选取健康的C57BL/6J小鼠32只,按照随机数字表法分为4组:正常组、哮喘组、对照抗体组、PIR-B mAb治疗组,每组8只。除正常组外,其他3组采用注入致敏液和卵清清蛋白(OVA)雾化激发方式建模,同时对照抗体组注入IgG2b,PIR-B mAb治疗组注入PIR-B mAb,流式细胞仪对CD34^+祖细胞及Eos细胞进行计数并分析CD34^+祖细胞的分化情况和Eos募集情况;苏木素-伊红(HE)染色和过碘酸希夫(PAS)染色观察Eos在肺组织中的浸润程度;RT-PCR和Western bolt检测Eotaxin、CCR3 mRNA和蛋白的相对表达水平。结果哮喘组支气管肺泡灌洗液、外周血、骨髓中的CD34^+祖细胞比例和CD34^+祖细胞总数明显高于正常组(P<0.05),对照抗体组与哮喘组比较差异无统计学意义(P>0.05),PIR-B mAb治疗组明显低于哮喘组和对照抗体组(均P<0.05);哮喘组支气管肺泡灌洗液、外周血、骨髓中的Eos比例和Eos总数明显高于正常组(P<0.05),对照抗体组与哮喘组比较差异无统计学意义(P>0.05),PIR-B mAb治疗组明显低于哮喘组和对照抗体组(均P<0.05)。HE染色及PAS染色表明:与正常组相比较,哮喘组和对照抗体组的Eos在支气管和血管周围的浸润明显增加,哮喘组和对照抗体组的黏液分泌量明显增加;与哮喘组比较,PIR-B mAb治疗组Eos的浸润和黏液分泌呈明显降低,哮喘组中的Eotaxin、CCR3 mRNA和蛋白相对表达水平明显高于正常组(均P<0.05),对照抗体组与哮喘组比较差异无统计学意义(P>0.05),PIR-B mAb治疗组明显低于哮喘组和对照抗体组(均P<0.05);与正常组比较,哮喘组和对照抗体组Eos募集情况明显升高(P<0.05),PIR-B mAb治疗组以上指标较哮喘组和对照抗体组显著降低(P<0.05),对照抗体组和哮喘组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PIR-B mAb能够抑制哮喘小鼠Eotaxin、CCR3表达水平,降低CD34^+祖细胞分化和Eos的表达,减轻哮喘小鼠肺部组织Eos的浸润。

MODS小鼠病程不同阶段脾脏树突状细胞免疫活性变化特征

目的：本研究观察多脏器功能障碍综合征（MODS）病程发展中脾脏树突状细胞（DC）免疫活性变化的特点,探讨脾脏DC启动免疫反应和负向免疫调节对MODS病程的影响.方法：采用酵母多糖腹腔注射复制C57 BL/6小鼠MODS模型,观察伤后不同阶段动物死亡率;用流式细胞术分析脾脏DC数量变化并检测脾脏DC表面MHC-Ⅱ类分子、共刺激分子（CD86）和共抑制分子（PD-1、PD-L1）的表达水平：ELISA法检脾脏DC培养液中IL-10和IL-12含量变化.结果：致伤后动物死亡集中出现在伤后24 ～ 48 h和10 ～ 12 d两个阶段;脾脏DC数量在伤后6h和10～12 d呈双相增高;脾脏DC的MHC-Ⅱ和CD86表达水平在伤后6～12h升高,随后逐渐降低,12d时达低谷;PD-L1/PD-1在伤后早期表达开始增加,至伤后5d和12d达峰值;脾脏DC分泌IL-12含量在病程发展中呈降低趋势,12 d时达低谷.而DC分泌IL-10在伤后5d大幅增加,12d时达峰值.结论：酵母多糖致伤后,小鼠脾脏DC的免疫活性经历了由增强到耐受的演变过程,伤后早期脾脏树突状细胞免疫活化和晚期的免疫耐受与MODS病情密切相关.

Sasobit对沥青感温性能的影响分析

通过对Sasobit与沥青配伍性的研究,表明Sasobit与沥青之间的混合时间、混合温度以及混合方法对其性能稳定性影响不大,故采用在130℃下人工搅拌15min的方法进行Sasobit沥青的制备。利用不同剂量的Sasobit沥青在不同温度下的针入度、粘度和软化点等性能指标的测试结果,计算了Sasobit沥青的感温性能指标:针入度指数、粘温指数、针入度粘度指数和针入度软化点指数。由计算结果可知,在沥青中添加不同剂量的Sasobit会提高其在不同温度区域内的感温性能,且各个感温性能指标之间有很好的相关性,根据其感温性能的变化可以确定在沥青中添加3%Sasobit最为合适。

肝纤维化逆转病理PIR分型临床应用的评价

肝穿活组织检查方法是评价肝纤维化逆转的"金标准"。北京友谊医院肝病中心于2017年提出了评价慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗后肝纤维化逆转的病理新标准:PIR分型,也称为"北京标准"。该分型是继传统分期分级系统及全定量肝纤维化评估方法后,在肝穿病理评估理念上取得的新突破。现重点探讨了PIR分型的应用前景和现有的不足。