我国牛羊梨形虫病病原的收集与鉴定

目的建立标准化的梨形虫病病原收集与鉴定技术,用于我国牛羊梨形虫病的防治研究。方法自野外采集动物血液或媒介蜱,根据形态进行蜱种鉴定,实验性感染除脾动物,对我国不同地区、不同家畜的梨形虫病病原进行分离,并通过蜱传播试验确定媒介蜱的种类与传播方式;采用18S rRNA基因测序方法,对本实验室已分离的部分梨形虫进行进化关系研究。结果获得34个牛和羊的梨形虫不同地区分离株,并对病原进行了分类鉴定。结论采用血液注射或蜱传播试验可对梨形虫进行有效分离,通过传统分类学和病原进化关系研究,可对动物梨形虫进行正确的分类鉴定。

盾糙璃眼蜱传播的牛泰勒虫分离鉴定及生物学特性

自新疆伊宁地区黄牛体表采集的盾糙璃眼蜱饥饿或半饱血成虫,带回实验室感染除脾牛。经血涂片检查发现,于感染后第21天,病牛血液中出现一种以圆环形与卵圆形为主的泰勒虫。经形态学观察和18 S rRNA基因测序和进化关系分析证明,它们为环形泰勒虫。将此饱血成蜱经实验室饲喂条件下,孵化出的幼虫分别饲喂于牛与家兔两种不同的动物,结果在饱血若虫阶段所有的蜱均从两种动物体表脱落,不再叮咬,饥饿成蜱又更换另一宿主,证明其是二宿主蜱。

河北省新乐市羊梨形虫分子检测

为检测河北省新乐市羊梨形虫的感染情况,采集河北省新乐市羊血液样本31份,并提取基因组DNA;根据梨形虫18S rRNA基因序列设计5对特异性引物,以羊血液基因组DNA为模板,对梨形虫进行巢式PCR扩增。结果表明,在31份DNA样本中检测出4份吕氏泰勒虫(12.9%),而尤氏泰勒虫、中华泰勒虫和羊巴贝斯虫均未检测到阳性样本。

四川省阿坝州牦牛和藏绵羊梨形虫分子流行病学调查

为调查阿坝州牦牛和藏绵羊梨形虫感染率,采用巢式PCR,对采自阿坝州5个县的200份全血样本进行检测,扩增梨形虫18S rRNA基因部分序列并克隆测序,经比对后确定虫种。结果5个县的梨形虫总阳性率为49.0%(98/200),其中红原县47.5%(19/40)、壤塘县67.5%(27/40)、阿坝县8.3%(2/24)、金川县8.3%(4/48)、小金县95.8%(46/48);牦牛感染的虫种全部为中华泰勒虫,总感染率为26.9%(29/108)。其中红原为35%、阿坝为8.3%、壤塘为100%、金川为8.3%,;藏绵羊感染的虫种全部为吕氏泰勒虫,总感染率为75.0%(69/92)。其中红原为60.0%、壤塘感染率为45.8%,小金县95.8%。阿坝州牦牛和藏绵羊梨形虫感染率较高,感染虫种单一,分别为中华泰勒虫和吕氏泰勒虫,地方株之间的同源性明显高于种间同源性。

新疆边境地区蜱携带梨形虫种类的分子鉴定

为了调查新疆边境地区梨形虫在当地蜱中的携带情况,对采集于2019年4月份和5月份的新疆边境地区共25个县(市)的蜱进行形态学鉴定,提取DNA,利用梨形虫套式引物进行扩增并测序,并采用IQ-Tree软件的ML法构建不同地理株的进化关系。结果显示,采集到的1516只蜱包括4个属9个种,分别为森林革蜱(Dermacentor silvarum)、草原革蜱(D.nuttalli)、胫距革蜱(D.pavlovskyi)、边缘革蜱(D.marginatus)、亚洲璃眼蜱(Hyalomma asiaticum)、麻点璃眼蜱(H.rufipes)、小亚璃眼蜱(H.anatolicum)、血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)和刻点血蜱(Haemaphysalis punctate);对上述蜱种携带梨形虫种类的分子检测结果显示,共检出3种泰勒虫和6种巴贝斯虫,分别为绵羊泰勒虫(Theileria ovis)、马泰勒虫(T.equi)、泰勒虫未定种(Theileria sp.)、驽巴贝斯虫(Babesia caballi)、粗糙巴贝斯虫(B.crassa)、隐藏巴贝斯虫(B.occultans)、犬巴贝斯虫(B.canis canis)、莫氏巴贝斯虫(B.motasi)及巴贝斯虫未定种(Babesia sp.)。结果表明,蜱中梨形虫的平均携带率为27.77%,且新疆边境不同地区的蜱梨形虫的携带率不同。研究结果为梨形虫病的进一步防控以及相关措施的制定提供了依据。

新疆小海子垦区媒介蜱及其携带梨形虫种类鉴定

为探究新疆小海子垦区及周边地区媒介蜱及所携带梨形虫种类,2020年5月~7月通过形态学采集到524枚硬蜱;用梨形虫18S rRNA特异性引物对硬蜱样本进行PCR检测,并对阳性样本18S rRNA基因进行遗传进化分析。结果表明,采集的硬蜱包括小亚璃眼蜱(Hyalomma anatoricum)293只、亚洲璃眼蜱(H.asiaticum)100只、图兰扇头蜱(Rhipicephalus turanicus)79只、麻点璃眼蜱(H.rufipes)47只、血红扇头蜱(R.sanguineus)5只。PCR检测发现硬蜱梨形虫总感染率为13.17%,并确定媒介蜱为小亚璃眼蜱和图兰扇头蜱,其中小亚璃眼蜱携带环形泰勒虫(Theileria annulata)、隐藏巴贝斯虫(Babesia occultans),图兰扇头蜱携带绵羊泰勒虫(T.ovis),且环形泰勒虫为优势种。

一种牛源扇头蜱及其携带梨形虫种类鉴定

为了鉴定从汉中市牛体表采集到的蜱种类及其携带病原梨形虫(Piroplasma)的种类,在形态学初步观察的基础上,用PCR技术基于线粒体16S rDNA对蜱种类进行了分子鉴定,并基于梨形虫18S rRNA基因分别检测蜱体内携带巴贝斯虫属(Babesia)、泰勒虫属(Theileria)等病原情况。结果显示,所采集到的67只蜱全为微小扇头蜱(Rhipicephalus microplus),其中检出携带梨形虫的蜱有35只,阳性率为52.2%。其携带的梨形虫主要有牛巴贝斯虫(B.bovis)、双芽巴贝斯虫(B.bigemina)和东方泰勒虫(T.orientails)等3种,阳性率分别为1.5%、3.0%和47.7%。结果表明,汉中市牛体表寄生的硬蜱优势种为微小扇头蜱,该类蜱携带牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、东方泰勒虫等梨形虫,提示当地应该注意蜱媒梨形虫病的防控。

四川省甘孜州牦牛梨形虫感染情况的调查

试验旨在调查甘孜藏族自治州(甘孜州)全部18个县(市)牦牛梨形虫的感染情况。2018年6月至11月采集甘孜州18个县(市)临床健康牦牛全血1381份,采用靶向18S rRNA的巢式PCR进行梨形虫核酸检测,并挑选梨形虫核酸检测阳性样本PCR产物共计124份测序鉴定虫种。结果显示,1381份牦牛样本中梨形虫核酸阳性样本438份,平均阳性率为31.72%,其中半农半牧业县1093份牦牛样本中梨形虫核酸阳性样本385份,平均阳性率为35.22%,纯牧业县288份牦牛样本中梨形虫核酸阳性样本53份,平均阳性率为18.40%;124份牦牛梨形虫核酸阳性样本中鉴定出感染的虫种有中华泰勒虫76份、吕氏泰勒虫25份、东方泰勒虫3份、绵羊泰勒虫2份、双芽巴贝斯虫1份和水牛泰勒虫1份,其中中华泰勒虫感染率为61.29%,吕氏泰勒虫感染率为20.16%。本试验结果表明,甘孜州牦牛梨形虫感染率较高,不同地区之间存在差异,优势虫种为中华泰勒虫和吕氏泰勒虫,为甘孜州牦牛梨形虫病防控提供了重要参考。

新疆部分地区牛梨形虫和无浆体感染情况调查分析

为了解新疆吐鲁番与阿勒泰地区牛梨形虫及牛无浆体的感染率和种类,采用聚合酶链反应(PCR)技术对两地区随机采集的120份牛血样品进行了泰勒虫、巴贝斯虫及无浆体的病原检测,对感染率进行统计学分析,并对其系统发育进行分析。结果显示,牛环形泰勒虫、牛双芽巴贝斯虫及牛无浆体感染率分别为20.8%(25/120)、14.2%(17/120)和11.7%(14/120),其中28头牛感染2种~3种病原,呈混合感染。调查结果可为上述两地区泰勒虫病、巴贝斯虫病及无浆体虫病防控提供参考。

四川省甘孜州藏绵羊梨形虫感染情况的调查

梨形虫病是严重危害牛羊养殖业的寄生虫病之一,本试验的目的是对四川省甘孜州藏绵羊主产区开展梨形虫感染情况调查。2018年6月—2019年5月,采集了甘孜州泸定、丹巴等9县主要藏绵羊养殖区临床健康藏绵羊全血352份,采用靶向18S rRNA的巢氏PCR进行梨形虫核酸检测,挑选阳性样本的PCR产物测序用于虫种的鉴定。结果表明,352份藏绵羊全血样本中梨形虫核酸阳性样本147份,平均阳性率为41.76%(147/352),其中半农半牧业县平均阳性率为48.25%(124/257),纯牧业县平均阳性率为24.21%(23/95);藏绵羊感染的虫种有吕氏泰勒虫(46/68)、绵羊泰勒虫(14/68)和奥氏巴贝斯虫(3/68)。本试验结果表明,甘孜州藏绵羊梨形虫感染率较高,优势虫种为吕氏泰勒虫,为甘孜州藏绵羊梨形虫病防控提供了重要参考。

广西部分地区牛和羊梨形虫流行情况调查及鉴定

为了解广西牛、羊群感染梨形虫情况,以及种类分布,从广西南宁、柳州、百色、河池、贺州等地区牛、羊养殖场采集抗凝血638份,抽提血液DNA组,运用套式PCR方法对梨形虫的18S rRNA进行扩增,并抽取一部分阳性样品进行测序,构建系统发育树。结果显示,5个地区梨形虫平均感染为24.76%,其中牛平均感染率为34.30%,羊平均感染为20.19%。南宁、河池、百色等地区牛平均感染率分别为40.00%、43.24%和23.86%;南宁、柳州、河池、百色、贺州等地区羊平均感染率为0、55.34%、11.48%、4.24%和23.40%。序列对比后涉及的种类有双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、东方泰勒虫、吕氏泰勒虫,其中东方泰勒虫、吕氏泰勒虫是优势种。获得的序列与系统发育树中所有参考的种类进化树均在同一个分支上。结果表明,广西5个地区牛、羊梨形虫感染率较高,涉及5个种类,在日常监测和防治牛、羊寄生虫病中应引起足够重视。

贵州省施秉县媒介蜱携带双芽巴贝斯虫的调查研究

目的了解贵州省施秉县蜱的双芽巴贝斯虫感染情况。方法于2021-2022年在贵州省施秉县采集散养黄牛体表寄生蜱,经形态学分类后辅以16S rDNA及细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COX1)基因检测鉴定蜱种类;用梨形虫18S rDNA对样本进行初筛,后用双芽巴贝斯虫顶端膜抗原1(AMA-1)基因进行PCR验证及序列测定,所测序列通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)的BLAST进行比对,采用邻接法构建进化树,掌握施秉县蜱携带双芽巴贝斯虫的遗传进化特征。结果共采集蜱样本615只,分子生物学鉴定有2属4种,分别为微小扇头蜱、镰形扇头蜱、长角血蜱和北岗血蜱;从微小扇头蜱体内检测到双芽巴贝斯虫核酸片段,结果表明,AMA-1基因序列与从菲律宾的牛血及苏丹的小亚璃眼蜱中检出的双芽巴贝斯虫有较近的亲缘关系,18S rDNA基因序列与印度的双芽巴贝斯虫亲缘关系最近。结论施秉县散养家畜体表寄生蜱体内携带双芽巴贝斯虫的核酸片段,提示施秉县媒介蜱可能存在巴贝斯虫感染。研究结果可为该地区开展蜱传原虫病防治工作提供参考数据。

塔里木马鹿体表寄生的软蜱种类及其携带病原的PCR鉴定

为了确定塔里木马鹿体表寄生软蜱的种类及其携带部分病原情况,从若羌县某塔里木马鹿场采集塔里木马鹿体表寄生的软蜱48只,通过形态学和分子生物学的方法对所采集的软蜱进行种类鉴定;同时用PCR方法检测蜱体中梨形虫、牛无浆体、嗜吞噬细胞无浆体和绵羊无浆体感染情况。结果显示,经形态学和分子生物学鉴定,48份软蜱样本均为拉合尔钝缘蜱,其线粒体SSU rDNA和COXⅠ基因序列与来自新疆的拉合尔钝缘蜱的同源性均为100%。经PCR检测软蜱中梨形虫和无浆体感染时,发现48份软蜱DNA样本中有3份呈绵羊无浆体核酸阳性,其感染率为6.3%(3/48),未检测出梨形虫、牛无浆体和嗜吞噬细胞无浆体。调查结果表明,塔里木马鹿也是拉合尔钝缘蜱的宿主,这丰富了我国蜱及蜱传病研究的基础数据。

云南省腾冲市牛羊感染梨形虫的分子流行病学调查

为了解腾冲市牛、羊感染梨形虫的流行情况,本研究选择腾冲市11个乡镇为采样点,采集牛、羊血液样本,采用分子生物学方法,扩增包括泰勒虫属和巴贝斯虫属在内的梨形虫科18S rRNA基因约1600 bp片段,阳性产物进行测序,根据序列同源性比对和遗传进化分析,进行虫种鉴定。共采集758头牛、羊的血样,检出阳性207头,总阳性率27.31%。其中牛、羊阳性率分别为45.02%(149/331)、13.58%(58/427)。11个乡镇的牛均有检出,6个乡镇的羊有阳性。检出虫种包括巴贝斯虫(Babesia)和泰勒虫(Theileria)两属共13种,均为蜱传血液原虫,泰勒虫占82.13%(170/207),巴贝斯虫占17.87%(37/207)。巴贝斯虫种类包括:狍巴贝斯虫(B.capreoli)、猎户巴贝斯虫(B.venatorum)、双芽巴贝斯虫(B.bigemina)、牛巴贝斯虫(B.bovis)、微小巴贝斯虫(B.microti)等5种;泰勒虫种类包括:吕氏泰勒虫(T.luwenshuni)、环形泰勒虫(T.annulata)、水牛泰勒虫(T.buffeli)、东方泰勒虫(T.orientalis)、瑟氏泰勒虫(T.sergenti)、绵羊泰勒虫(T.ovis)、附膜泰勒虫(T.velifera)和一种新的未命名泰勒虫共8种。牛感染6种泰勒虫和4种巴贝斯虫,羊感染3种泰勒虫和2种巴贝斯虫。该结果表明腾冲市养殖的牛羊存在梨形虫病的广泛流行,且虫种丰富,具有较高的多样性特征,需加强防范。

四川省理塘县牦牛感染泰勒虫的分子流行病学调查及虫种鉴定

为调查四川省理塘县牦牛泰勒虫的感染情况及流行规律,2019年5—11月和2020年4—10月自理塘县采集临床健康牦牛全血共345份,采用以18S rRNA为靶基因的巢式PCR方法进行泰勒虫检测,分析理塘县牦牛泰勒虫感染的季节规律、年龄段、体重变化、性别特点,对全部泰勒虫核酸检测阳性样本共计65份进行虫种鉴定。结果显示:345份牦牛样本中检测出泰勒虫核酸阳性样本65份,平均阳性率为18.84%;5、6月牦牛泰勒虫阳性率高于其他月份;2~5岁组牦牛泰勒虫阳性率最高,显著高于5岁以上组牦牛(P<0.05),与0~2岁组牦牛差异不显著(P>0.05);感染泰勒虫的牦牛体重普遍偏轻;公牦牛感染率略高,差异不明显;65份泰勒虫核酸检测阳性样本成功测序58份,鉴定出感染的虫种有中华泰勒虫57份、吕氏泰勒虫1份,其中中华泰勒虫占比98.28%,吕氏泰勒虫占比1.72%。提示:首次对理塘县牦牛感染泰勒虫的流行规律进行调查,理塘县牦牛泰勒虫感染率较高,不同季节、年龄段之间存在差异,优势虫种为中华泰勒虫,为理塘县牦牛梨形虫病的防控提供了重要参考。