鱼类类立克次氏体PCR检测方法的建立及初步应用

根据Gen Bank中类立克次氏体基因的保守序列,设计一对针对鱼类类立克次氏体PCR检测的特异性通用引物,通过对PCR扩增条件的优化,建立快速检测鱼类类立克次氏体的PCR方法,并用该方法对类立克次氏体阳性罗非鱼(Oreochromis nilotica)进行PCR扩增,结果得到与实验设计相符的390 bp的特异性扩增条带,而对健康罗非鱼、乌鳢(Ophiocephalus argus)、海鲈(Dicentrarchus labrax)、中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)及其他对照组的扩增结果为阴性。测序比对结果证实,该PCR方法检测结果准确,最低可检测出约1 pg的类立克次氏体质粒DNA;利用建立的PCR方法,对来自广东、云南、海南、天津、江苏、安徽、湖北等地的252份临床样品进行检测,共检出阳性样品30份,提示该PCR方法可用于类立克次氏体的临床快速检测。

鱼立克次氏体的研究进展

立克次氏体是鱼类及其他水生生物的重要病原之一,有较高的感染率和死亡率。目前主要采用Fryer法和依照《贝格恩细菌分类手册(第二版)》标准的方法对立克次氏体进行分类,细胞培养法、组织切片技术、PCR、核酸探针及ELISA等方法是广泛应用的检测手段,研究成果表明此种病害主要通过水平和垂直方式进行传播,而抗立克次氏体疫苗的研制也进入了商品化生产。本研究对该领域的研究成果作一综述,旨为此种病害的研究提供借鉴及参考。