鸡PIT-1基因57 bp插入/缺失多态与生长和屠体性状的相关研究

垂体特意性转录因子(P itu itary-spec ific transcription factor 1,PIT-1)是重要的组织特异性转录因子,能够调控生长激素(GH)、促甲状腺素β亚单位(TSHβ)和催乳素(PRL)基因的表达,从而在生长发育中发挥重要调节作用。本实验选取鸡PIT-1基因第2内含子的57 bp缺失/插入位点为分子标记,利用华南农业大学“杏花×隐性白洛克”全同胞鸡参考家系材料,研究了该位点与鸡生长和屠体性状的相关性。结果表明,该位点与鸡的第1-7周龄体重相关极显著(P<0.01),与第8周龄体重相关显著(P<0.05),与胸角宽、全净膛、半净膛、翅膀重、胫爪重、小肠长度相关极显著(P<0.01),与胸肉重、腿肉重相关显著(P<0.05);其中A基因(57 bp插入)有利于体重增加和肌肉生长。

PIT-1基因在人、鼠及猪中的研究现状

本文对PIT 1基因在鼠、人及猪中作为生长发育性状候选基因的研究现状作一综述 ,主要包括PIT 1基因与鼠矮小性状、人类综合性垂体激素缺陷症及猪的生长和胴体性状之间的关系 ,并对PIT 1基因在小型猪中的研究前景作一展望。

固原本地黄牛及其利杂群体Pit-1基因多态性与育肥性状的关系

为了分析固原本地黄牛及其利木赞牛杂交群体(简称利杂群体)Pit-1基因的多态性与育肥性状的关系,为固原本地黄牛下一步的杂交改良提供理论基础,利用PCR-RFLP技术研究了固原本地黄牛及其利杂群体共178个个体的Pit-1基因多态性,并分析了其与育肥个体育肥性状的相关性。结果表明,451 bp的PCR产物被限制性内切酶HinfⅠ消化后表现出多态性,固原本地黄牛及其利杂群体在该位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态,等位基因A/B的频率分别为0.3039/0.6961和0.1614/0.8386。与部分育肥性状的相关分析表明,在育肥的初期阶段,BB型和AB型个体的精料料肉比均显著低于AA型个体(P<0.05);7月龄育肥牛BB型个体的胸深显著低于AA型,而胸宽显著高于AA型(P<0.05);育肥牛6~12月龄体长增长量也表现出BB型个体优于AB型的趋势(P<0.05)。初步认为,BB基因型与优良的育肥性能显著相关,对B等位基因的选择有利于优良性状的改良。

山羊Myf-5、Pit-1基因多态性与生产性状的关联性分析

用PCR-SSCP和测序技术对河西绒山羊、辽宁绒山羊和内蒙古绒山羊3个品种共394个个体的生肌决定因子5(Myf-5)和垂体转录释放因子-1基因(Pit-1)进行遗传多态性分析,并研究基因型对体质量和体尺性状的影响。结果表明:Myf-5基因第1外星子在3个山羊品种中未发现多态性。在Pit-1基因第3外星子中检测到1个SNP(A/G),并存在AA和AB 2种基因型,A等位基因为优势等位基因。最小二乘分析结果表明,AA基因型有较高的产绒量和体质量且达到显著水平(P<0.05),而对于体尺性状,基因型间未达到显著水平(P>0.05),但AB基因型个体的表型值明显低于AA基因型,2种基因型在这3个体尺指标的大小排列顺序均为AA>AB。推测Pit-1基因对山羊生长性能存在一定影响,提示AA基因型可作为分子标记用于预测山羊生产性状。

香猪PIT-1基因内含子多态性的研究

采用PCR和DNA测序方法,对香猪及对照猪种(上海白猪、大约克夏猪)的PIT-1基因进行了单核苷酸多态性(SNP)分析,并采用RT-PCR方法对3个猪种PIT-1基因的表达水平进行了半定量分析。结果显示:香猪在DNA序列的963位(位于第4内含子)和1429位(位于第5内含子)分别发生G→A突变,而对照猪种在这2个位置未发生突变;香猪PIT-1基因表达水平显著低于上海白猪和大约克夏猪(P<0.05)。结论:香猪第4和第5内含子的两处突变可能会造成PIT-1基因表达量下降,最终可能导致香猪的生长受到影响。

垂体特异转录因子pit-1在垂体瘤中的表达及意义的实验研究

目的检测垂体特异转录因子pit-1在垂体腺瘤中的表达,研究Pit-1与激素水平、肿瘤侵袭性的关系,以探讨Pit-1在垂体瘤发病机制中的作用。方法根据术前激素水平、临床表现及术后病理诊断确定腺瘤类型,依影像学表现、术中所见及硬膜病检结果判断对肿瘤侵袭性分级,用免疫组化和RT-PCR分别测定Pit-1蛋白和pit-1mRNA的表达。结果Pit-1在GH腺瘤、PRL腺瘤、GH/PRL混合腺瘤中均有表达,与对照组相比,中、高度表达者占此3种腺瘤的78.8%(26/33),无功能腺瘤及ACTH腺瘤中无Pit-1蛋白的表达。pit-1mRNA在全部的GH腺瘤、PRL腺瘤、GH/PRL混合腺瘤和50%(5/10)的无功能腺瘤中有表达,在ACTH腺瘤组中无表达。GH、PRL、GH/PRL混合腺瘤组间pit-1mRNA的表达量差异无显著性,此3组均显著高于无功能腺瘤组(P<0.05)。GH、PRL腺瘤组中pit-1mRNA的表达量与其各自术前的激素水平呈显著正相关。在表达pit-1mRNA的腺瘤中,侵袭性组高于非侵袭性组。结论Pit-1的表达与垂体腺瘤的表型、功能有关,与某些激素(GH、PRL)水平、肿瘤的侵袭性呈正相关,在某些类型(GH、PRL、GH/PRL)的垂体瘤发病机制中起重要作用。

牦牛PIT-1基因第5、6外显子部分序列的克隆测序

利用PCR方法扩增了麦洼牦牛PIT-1基因第5、6外显子的部分序列,扩增片段长度为1 285 bp,克隆到PND-18载体中进行测序,结果牦牛与普通牛的PIT-1基因有97%的同源性,共有28处不同,其中在内含子5的347处有18个碱基的缺失,565处有4个碱基的插入；外显子6有一个碱基突变,并导致氨基酸由普通牛的Thr变为牦牛的Arg。对61头麦洼牦牛和30头九龙牦牛PIT-1基因部分序列进行PCR-RFLP分析,均未检测到多态性。

猪Pit-1基因第三内含子序列的克隆测序

根据不同物种间同一基因核苷酸序列的保守性及相似性的特点 ,在人和鼠的Pit 1基因第三外显子上设计上游引物 ,而将下游引物设计在猪Pit 1基因第四外显子上。利用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,扩增出猪Pit 1基因第三内含子序列 ,并经由酶切及序列同源性比对确认该序列即为猪Pit 1基因第三内含子序列。

六盘山肉牛杂交改良群体Pit-1基因多态性分析

本试验旨在对宁夏六盘山区肉牛杂交改良群体垂体特异性转录因子1(Pit-1)基因的多态性进行研究,为其杂交改良提供理论基础。采用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP),对该群体101个个体Pit-1基因多态性进行检测。结果表明,扩增出的451 bp片段为目的基因片段,其PCR产物经限制性内切酶HinfⅠ消化后表现出多态性,共检测到AA、BB和AB 3种基因型。其中AA基因型频率6.93%(7个);AB基因型频率34.65%(35个);BB型基因型频率58.42%(59个),等位基因A频率24.26%;等位基因B频率75.74%。因此,宁夏六盘山地区的肉牛杂交改良群体Pit-1基因具有多态性。

IGF-1和Pit-1基因多态性与淮猪新品系生长性状的相关性分析

以淮猪新品系Ⅱ系一世代（190头）、二世代（244头）为试验材料,采用PCR-RFLP方法分别检测IGF-1基因的HhaⅠ酶切位点、Pit-1基因的RsaⅠ酶切位点的多态性,并与生长性状进行相关性分析。结果表明：30~90kg平均日增重、达90kg校正日龄在一世代、二世代、两个世代合并中,IGF-1基因的AA型个体均有优于AB、BB型个体的趋势,但差异都不显著（P＆gt;0.05）;Pit-1基因的DD型个体均有优于CD、CC型个体的趋势,但差异都不显著（P＆gt;0.05）。虽然IGF-1基因、Pit-1基因的不同基因型个体在一世代、二世代的达90kg校正背膘厚的趋势不一致,但是在两个世代合并中以IGF-1基因的AA型个体、Pit-1基因的DD型个体最薄,但差异不显著（P＆gt;0.05）。若将IGF-1基因、Pit-1基因作为生长性状的遗传标记用于淮猪新品系的选育,需要在淮猪新品系Ⅱ系后续世代中扩大样本含量并进行进一步的验证。

中药降乳散对大鼠催乳素瘤表达Pit-1的作用

目的研究中药降乳散对大鼠催乳素(PRL)瘤组织表达Pit-1的作用。方法用皮下植入雌激素的方法制备大鼠PRL瘤模型,将成功诱发出PRL瘤的大鼠随机分2组,分别给予安慰剂和中药降乳散灌胃,用药4周后处死动物,垂体称重,用放免法测定血清PRL水平。用反转录-PCR方法分析Pit-1在大鼠PRL瘤组织中的表达量。结果降乳散组大鼠血清PRL水平和垂体重量均明显低于安慰剂组(P<0.001),Pit-1 mRNA水平在降乳散组较安慰剂组明显降低(P<0.001)。结论降低Pit-1的表达水平可能是中药降乳散抗PRL瘤的重要机制之一。

多巴胺激动药对大鼠垂体组织表达Pit-1作用的研究

目的研究多巴胺激动药对大鼠垂体组织表达Pit-1的作用。方法成年雄性Wistar大鼠,随机分为3组,催乳素瘤(PRL)组、对照组和诺果宁组,各组按照实验程序操作。8周后处死动物,测定大鼠血清PRL水平;用免疫组化方法显示垂体组织PRL蛋白的表达和分布;用RT-PCR方法检测Pit-1mRNA在两组垂体组织中的表达,以β-actin作为内参照,借助于计算机凝胶成像系统分析表达量。结果诺果宁组大鼠血清PRL水平和垂体重量均明显低于PRL瘤组(P<0.01),Pit-1mRNA水平在诺果宁组较PRL瘤组明显降低(P<0.01)。结论降低Pit-1的表达水平可能是诺果宁抗PRL瘤的重要机制之一。

PiT-1在高磷血症导致慢性肾衰竭大鼠血管钙化中的表达

目的观察胸主动脉组织 PiT-1 在高磷血症导致慢性肾衰竭大鼠血管钙化中的表达情况,并探讨其可能机制。方法36 只Wistar 雄性大鼠首先分为假手术组(9 只)和5/6 肾切除组(27 只),普通饮食喂养4 周,建立慢性肾衰竭大鼠模型。之后慢性肾衰竭大鼠给予高磷饮食喂养 1 0 周,同时随机分为①模型组(n=9,NX-HP);②PFA 阻断组(n=7,NX-HP+PFA):高磷饮食同时隔天腹腔注射PFA0.15g/kg;③生理盐水对照组(n=6,NX-HP+NS):高磷饮食同时隔天腹腔注射与PFA 等量的生理盐水。10 周后全部大鼠处死,摘取胸主动脉全段,上段用于组织钙含量检测,中段-80℃冻存行RealtimePCR 和Western 检测PiT-1 和血管钙化标记物Cbf α-1 的表达,下段用10% 甲醛固定后石蜡包埋行VonKossa 染色。同时经腹主动脉留全血检测Pi、Ca,及1,25(OH)2D3。结果慢性肾衰竭大鼠高磷饮食喂养10 周三组血肌酐、血磷、血钙和1,25(OH)2D3水平无差异;PFA阻断组大鼠胸主动脉组织PiT-1 的蛋白及mRNA 表达与模型组和生理盐水对照组比较均明显降低(P <0.001),Cbf α-1 蛋白及mRNA 的表达明显下调(P <0.001),血管钙化程度减轻。结论在慢性肾衰竭高磷环境下,大鼠胸主动脉组织的PiT-1 介导了磷的转运,诱导了Cbf α -1 的表达,促进了血管钙化的发生。

猪PIT-1基因多态性与生长性状的关联分析

目的:研究猪PIT-1基因多态性及其对生长性状的遗传效应,旨在寻找改良猪生长性能的分子标记。方法:采用PCR-RFLP方法检测猪PIT-1基因的单核苷酸多态性(SNP),并分析基因多态性与生长性状的关联性。结果:猪PIT-1基因的Rsa I酶切位点存在多态性。其中,杜洛克猪未检测到AA型,BB基因型频率高于AB型,等位基因B频率高于等位基因A,SNP处于低度多态(PIC<0.25);淮猪新品系未检测到BB型,AA基因型频率高于AB型,等位基因A频率高于等位基因B,SNP处于低度多态(PIC<0.25);杜洛克猪×淮猪新品系未检测到BB型,AB基因型频率高于AA型,等位基因A频率高于等位基因B,SNP处于中度多态(0.25<PIC<0.5)。关联分析表明,PIT-1基因型对猪平均日增重和饲料转化率的遗传效应都未达到显著水平(P>0.05)。结论:杜洛克猪、淮猪新品系、杜洛克猪×淮猪新品系PIT-1基因Rsa I酶位点都存在多态性,但PIT-1基因对猪生长性状没有显著影响。

鹅PIT-1基因启动子区转录调控的研究

为研究垂体特异性转录因子(Pituitary transcription factor 1,PIT-1)启动子的转录调控机制,寻找该基因转录调控的顺式作用元件、反式作用因子和基本转录单位。利用前期染色体步移技术扩增得到鹅PIT-1基因的启动子区序列,经PCR扩增,定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,把目的片段连接到荧光素酶报告基因载体(pGL-Basic),制备了一系列启动子缺失体(-1 485/-1bp、-1 293/-1bp、-1 014/-1bp、-775/-1bp、-561/-1bp、-353/-1bp和-206/-1bp),并通过限性内切酶酶切、PCR及测序进行鉴定,构建了含有正确目的基因的报告基因重组体,然后瞬时转染GH3细胞,利用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测。本试验所克隆的PIT-1基因启动子区具有明显的启动子活性,其中-561/-1bp的启动活性最强,该区域存在有PIT-1、POU3F2、myogenin和GR等多个转录因子结合位点。利用系列缺失法成功构建了荧光素酶报告基因真核表达载体,并且验证了克隆的启动子具有启动活性,找到了正负调控区域及核心启动子区,为进一步研究其转录调控机制奠定了基础。

Pit-1/Hinf Ⅰ基因PCR-RFLP和鲁西黄牛与利木赞杂交牛生长性状的关联性分析

为了提高鲁西黄牛生长发育水平及产肉性能。利用PCR-RFLP技术研究111头利鲁杂交牛Pit-1基因多态性与体尺生长性状指标之间的相关性。结果表明,群体的Pit-1-HinfⅠ基因座的451 bp的PCR产物被限制性内切酶HinfⅠ酶切后表现多态性,它们的等位基因A、B频率分别为0.32,0.68,不符合Hardy-Weinberg平衡状态。群体Pit-1基因座不同基因型与体尺生长性状指标相关分析的结果表明,群体内AA基因型个体的尻高显著高于群体AB和BB型个体(P<0.01),可作为利鲁杂交牛尻高的候选基因之一;群体内AB基因型个体的髋宽显著高于群体AA和BB型个体(P<0.05);但在头长、额宽、胸围、胸深、胸宽、体斜长、尻长、腰角宽、坐骨结节宽、管围、体高、十字部高、臀端高等指标上均无显著差异(P>0.05)。

4个品种绵羊Pit-1基因第5内含子和第6外显子多态性分析

采用PCR-SSCP技术研究绵羊生长发育候选基因Pit-1基因第5内含子和第6外显子序列在乌珠穆沁羊、杜泊羊、无角陶赛特羊和萨福克羊中的单核苷酸多态性。结果表明:Pit-1基因第5内含子和第6外显子序列并不存在多态性,推断该位点与这4种羊的生长发育差异无关。

生长激素缺乏症患者Pit-1基因突变分析

检测生长激素缺乏症（GHD）患者的Pit－1基因突变，研究GHD的发病机制。方法利用银染单链构象多态性法（SSCP）和直接测序法检测GHD患者Pit－1基因突变。结果GHD患者中未发现Pit－1基因突变。结论Pit－1基因突变是导致GHD的稀有病因。

Pit-1基因突变与生长激素缺乏症

Ｐｉｔ－１蛋白是ＰＯＵ蛋白家族成员，重要的结构域有：Ｎ端转录激活区（负责激活靶基因的转录）、ＰＯＵ特异区和ＰＯＵ同源区（后两个区域负责Ｐｉｔ－１蛋白与靶基因的特异结合）。Ｐｉｔ－１蛋白对于垂体前叶的发育及ＧＨ、ＰＲＬ、ＴＳＨ的合成具有极为重要的作用。如果这些区域发生突变，会严重地影响垂体前叶ＧＨ的合成，从而导致ＧＨＤ，部分患者还可能同时合并垂体前叶萎缩。

雌激素和多巴胺对大鼠垂体组织表达Pit-1的影响

目的 :分析雌激素和多巴胺对大鼠垂体组织表达Pit 1的影响 ,探讨雌激素诱发大鼠泌乳素瘤的机制。方法 :雌性Wistar大鼠摘除卵巢后随机分三组。E组 (n =5 ) :皮下植入含有乙菧酚 (DES)的硅胶管 ;以空白硅胶管做对照 (C组n =5 ) ;D组 (n =5 ) :在植入DES硅胶管的同时用多巴胺 2型受体激动剂 (诺果宁 )灌胃。 8周后 ,处死动物 ,取出垂体称重 ,做组织学及免疫组织化学观察 ,用放免法测定血清泌乳素水平 ,用反转录 PCR方法分析垂体组织中Pit 1mRNA的表达水平。结果 :E组Pit 1mRNA水平分别高于C组和D组 (P <0 0 0 1和P <0 0 5 ) ,D、C两组Pit 1mRNA水平无统计学差别。大鼠血清PRL值与垂体Pit 1mRNA水平呈明显正相关 (γ =0 90 4 5 ,P <0 0 1)。结论 :雌激素刺激Pit 1基因的表达 ,多巴胺 2型受体激动剂则可逆转这种刺激作用。