长链非编码RNA尿路上皮癌相关1基因与脓毒症患者炎症因子严重程度及预后的关系

目的探索长链非编码RNA尿路上皮癌相关1(lncRNA UCA1)基因与脓毒症患者炎症因子、严重程度及28天死亡关系。方法收集2022年1月至2023年12月期间中国人民解放军联勤保障部队第九六○医院收治的174例脓毒症患者临床资料。按照与脓毒症患者性别相同,年龄相差1岁之内1∶1配对收集同期健康体检者作为对照组。通过实时荧光定量(RT-qPCR)法检测外周血单核细胞中lncRNA UCA1水平。酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-17、细胞间黏附分子1(ICAM1)和血管细胞黏附分子1(VCAM1)水平。使用COX风险比例回归模型分析影响脓毒症患者28天病死率相关危险因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估独立危险因素预测脓毒症患者28天死亡的效能。结果与对照组比较,脓毒症患者lncRNA UCA1水平更高(Z=76.235,P<0.001)。脓毒症患者lncRNA UCA1与TNF-α(r=0.384)、IL-6(r=0.308)、IL-17(r=0.472)、ICAM1(r=0.361)和VCAM1(r=0.492)水平、APACHEⅡ(r=0.393)和SOFA评分(r=0.427)均呈正相关(P均<0.001),而对照组中lncRNA UCA1与上述参数均无相关性(P均>0.05)。LncRNA UCA1水平升高(HR=2.186,P=0.007)、年龄增加(HR=1.245,P=0.011)、真菌感染(HR=19.259,P=0.010),C-反应蛋白(CRP)升高(HR=1.334,P=0.036)及APACHEⅡ评分增加(HR=1.245,P=0.017)是脓毒症患者28天死亡的独立危险因素。ROC曲线分析可见lncRNA UCA1(AUC=0.757)、APACHEⅡ评分(AUC=0.865)、CRP(AUC=0.731)及年龄(AUC=0.616)均可预测脓毒症患者28天死亡情况。结论脓毒症患者lncRNA UCA1水平升高,IncRNA UCA1与多种促炎细胞因子、疾病严重程度和不良预后相关。

利用家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac表达系统在BmN细胞中可溶性表达PRG-1蛋白(英文)

杆状病毒Bac-to-Bac表达系统由于操作简便等优点,被广泛应用于外源蛋白的表达。利用新构建的家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac系统可溶性表达一个大分子质量的融合蛋白———piwi相关基因编码蛋白PRG-1。为了提高目的蛋白的表达量,对重组病毒感染剂量及产物收获时间进行优化,并利用GST亲和层析纯化融合蛋白。结果表明在家蚕卵巢培养细胞BmN中表达的重组GST-PRG-1是可溶性蛋白;最佳的感染条件是病毒粒子对BmN细胞的感染复数(MOI)=1,并在感染后96 h收获细胞。试验结果表明,新构建的家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac表达系统可用于大分子蛋白的可溶性表达。

LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT在糖尿病肾病患者中的表达及与肾功能的相关性研究

目的探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性。方法选取于2021年11月—2023年12月在武汉大学人民医院肾内科收治的DN患者106例为DN组,并根据24 h尿蛋白定量(24 h Upro)水平分为正常蛋白尿亚组43例(<30 mg)、微量蛋白尿亚组39例(30~<300 mg)、大量蛋白尿亚组24例(≥300 mg),另选取同期医院单纯糖尿病患者106例作对照组,检测患者血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平;Pearson法分析LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT与肾功能指标的相关性;Logistic分析影响DN患者肾功能损伤的因素。结果DN组血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平低于对照组(t=11.471、10.257,P均<0.001)。血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT比较,正常尿蛋白亚组>微量尿蛋白亚组>大量尿蛋白亚组(F=58.720、117.722,P均<0.001),BUN、SCr、UA水平比较,正常尿蛋白亚组<微量尿蛋白亚组<大量尿蛋白亚组,差异均有统计学意义(F=122.493、595.589、53.178,P均<0.001);LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT分别与BUN、SCr、UA呈负相关(r=-0.487、-0.498、-0.521,-0.527、-0.515、-0.534,P均<0.001);Logistic回归分析显示,糖尿病病程长及高BUN、SCr、UA水平是影响DN患者肾功能损伤的危险因素[OR(95%CI)=1.672(1.128~2.479)、2.839(1.534~5.253)、2.754(1.512~5.017)、2.693(1.464~4.954)],高LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT是保护因素[OR(95%CI)=0.875(0.798~0.959)、0.898(0.832~0.969)]。结论血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平与DN患者肾功能有关,可能是评估DN患者肾功能的潜在指标。

肿瘤转移相关基因MTA1与肿瘤关系的研究进展

转移是恶性肿瘤致死的主要原因之一,它是一系列有序事件的复杂演进过程,受着多种基因正负作用的调控。因此了解肿瘤转移所涉及的基因和基因产物是目前国内外一项重要的研究课题,并取得了一定进展。本文就目前已经成功分离出的肿瘤转移相关基因MTA1(metastasis-associated 1,MIA1)的结构与功能、MTA 1基因家族及其与肿瘤的关系等方面研究进展进行综述。

LncRNA TPTEP1/miR-137/KLF15轴在肥胖相关性肾病中的作用机制研究

目的:探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)人肌力蛋白磷酸酶同源假基因1(TPTEP1)/微小核糖核酸-137(miR-137)/Kruppel样因子15(KLF15)轴在肥胖相关性肾病(ORKD)中的作用机制。方法:选择赣南医科大学第一附属医院2022年2月至2024年1月20例ORKD住院者为ORKD组,同期住院的非ORKD患者20例为对照组,采集血液进行生化检验,通过免疫组化及电镜检查肾活检标本病理变化,利用生物信息学工具对比分析ORKD组织与正常肾组织中KLF15信使核糖核酸(mRNA)的表达水平,酶联免疫吸附试验分析血清脂联素、瘦素水平。结果:ORKD组患者的血肌酐(Scr)、尿酸(UA)、24 h尿蛋白定量(24h-UTP)水平高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);ORKD组肾组织KLF15表达水平、血清脂联素水平相比于对照组明显降低,瘦素水平明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);高通量测序筛查LncRNA发现,ORKD组ENSG00000100181.15表达差异大,miR-137可能是LncRNA TPTEP1的靶基因,LncRNA TPTEP1在机体多种组织中均有表达,其中包括肾脏及脂肪组织。结论:ORKD的肾组织中KLF15和脂联素的异常可能与疾病的发展有关,LncRNA TPTEP1/miR-137/KLF15轴在ORKD发展过程中发挥着重要的作用。

肺癌组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白水平检测及其临床价值探讨

背景与目的:肺癌发病机制具有多样性,但一经确认,往往已错过最佳治疗时机,本文通过探讨肺癌组织和外周血中抑癌基因(p53)、蛋白基因产物(PGP9.5)、转录因子(SOX2)、肿瘤相关基因编码蛋白(GAGE7)、解旋酶(GBU4-5)和黑色素瘤抗原(MAGE A1)蛋白水平的相关性,同时分析其在肺癌诊疗中的应用价值。方法:回顾并分析2018年5月—2020年5月在复旦大学附属肿瘤医院确诊的100例肺癌患者的病历资料,临床TNM分期Ⅰ期25例,Ⅱ期45例,Ⅲa期30例;非小细胞肺癌80例,小细胞肺癌20例;取手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测上述6种蛋白的水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)法检测其基因表达,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测外周血中6种蛋白的抗体阳性情况。结果:肿瘤组织中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平均明显高于癌旁组织(P<0.05);将其与肿瘤的临床病理学特征进行相关分析发现,肿瘤组织和外周血中的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平与肿瘤TNM分期和分化级别有关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理学类型无关(P>0.05)。肿瘤组织中6种蛋白的表达水平与外周血清表达具有较好的一致性(P>0.05)。结论:肺癌肿瘤组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白表达阳性与肿瘤TNM分期及分化级别密切相关。

纤维蛋白原相关蛋白1-淋巴细胞活化基因3与长链非编码RNA-T细胞免疫球蛋白黏蛋白3共调控增强CD8^(+)T细胞抑制肝细胞癌肿瘤生长

目的体外研究协同抑制纤维蛋白原相关蛋白1(FGL1)-淋巴细胞活化基因3(LAG-3)与长链非编码RNA(lncRNA)-T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim3)双免疫逃逸通路,联合增强T淋巴细胞活性,显著抑制HCC肿瘤细胞恶性增殖和肿瘤生长的效用及机制。方法构建敲除、稳定转染的5组人肝癌细胞株HepG2、HepG2-FGL1-KO、HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)、HepG2-LAG-3-KO、HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-),并以此构建5组细胞株移植瘤免疫系统人源化小鼠成瘤模型。通过质量细胞计数法测定淋巴细胞CD8+T亚群表达水平,并测定肿瘤生长大小体积变化。采用t和χ^(2)检验。结果实验期间,5组中位肿瘤生长速率分别为149、136、81、75、68 mm^(3)/d。5组中位肿瘤体积分别为1.18、0.91、0.37、0.45、0.29 g。与HepG2组比较HepG2-FGL1-KO组和HepG2-LAG-3-KO组动物瘤体积显著小于HepG2组(t=7.582,P<0.05),HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)和HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-)组动物肿瘤体积又显著小于单独敲除组(t=3.953,P<0.05)。同时,5组中位CD8+T细胞亚群表达量分别为2.1×107、2.9×107、3.8×107、7.7×107、13.2×107。HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)和HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-)组CD8+T细胞亚群表达活性显著高于FGL1和LAG-3单抑制组(t=2.988,P<0.05),而两个单抑制组的CD8+T细胞亚群表达活性又显著高于HepG2对照组(t=6.416,P<0.05)。结论单一免疫检查点的抑制对于遏制肿瘤逃避免疫杀伤存在局限性,多个免疫检查点因子信号通路联合抑制相较于单一通路的单控,将显著调控细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的激活和对肿瘤细胞的敏感性毒性表达。

食管癌相关基因1编码蛋白的相互作用蛋白筛选

目的 筛选与食管癌相关基因 1(ECRG 1)编码蛋白相互作用的蛋白 ,为其功能研究奠定基础。方法 将编码ECRG 1羧基端 378个氨基酸的DNA序列插入到pGBKT7 DNA BD载体 ,与编码Gal4DNA结合结构域的DNA序列拼接做融合基因 ,将此重组质粒与已克隆到pACT2载体上的人肝脏cDNA文库 (与编码Gal4激活结构域的DNA序列融合 )共转化酵母细胞AH10 9。ECRG 1与相应的人肝脏cDNA片段编码的蛋白发生相互作用后 ,可激活报告基因的表达。排除假阳性后 ,阳性克隆中的文库cDNA进行测序分析。同源性检索搜寻GenBank中与之相同或相似的序列。结果 共转化得到约 3× 10 6个转化子 ,2 3个克隆有报告基因的表达。排除假阳性后 ,得到 2个阳性克隆 ,它们分别编码Miz 1(myc interactingznfingerprotein 1)和FLNA(actin bindingprotein 2 80 )。结论 ECRG 1基因编码蛋白在酵母中可特异性的结合Miz 1和FLNA ,提示ECRG 1可能通过与MIZ 1、FLNA相互作用参与调控细胞周期的运行。

lncRNA HCG18调控miR-324-5p/GLI1轴在急性髓系白血病细胞增殖和侵袭中的作用机制

目的长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调对急性髓系白血病(AML)的作用机制尚不清楚。探讨lncRNA HCG18控微小RNA-324-5p(miR-324-5p)/胶质瘤相关基因同源蛋白1(GLI1)轴对AML细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法选择2017年1月-2021年3月在本院血液科住院治疗的AML患者35例作为研究对象(AML组),另选取同期在本院治疗并进行骨髓穿刺检查的非血液系统肿瘤性疾病患者30例作为对照组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有入选人员骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18与miR-324-5p的表达。体外培养AML细胞HL-60,将细胞分为对照组、si-NC组、lncRNA HCG18 siRNA组、miR-NC组、miR-324-5p mimics组、miR-324-5p mimics+GLI1 NC组、miR-324-5p mimics+GLI1组、lncRNA HCG18 siRNA+NC inhibitor组、lncRNA HCG18 siRNA+miR-324-5p inhibitor组,分别检测检测HL-60细胞中lncRNA HCG18、miR-324-5p表达、HL-60细胞增殖、迁移与侵袭及GLI1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。双荧光素酶报告系统分析miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1的靶向关系。结果与对照组比较,AML组患者骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18表达水平(2.85±0.32)较对照组(1.03±0.11)显著升高(P<0.01),而miR-324-5p表达水平(0.47±0.05)较对照组(1.05±0.09)显著降低(P<0.01);沉默lncRNA HCG18表达或过表达miR-324-5p后HL-60细胞增殖、细胞迁移与侵袭数、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1均有靶向关系;抑制miR-324-5p表达可逆转沉默lncRNA HCG18表达对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用;GLI1过表达可逆转过表达miR-324-5p对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。结论lncRNA HCG18在AML细胞中高表达,抑制lncRNA HCG18表达可通过调控miR-324-5p/GLI1轴抑制AML细胞增殖、迁移与侵袭。

lncRNA UBC1和BMP2在胃癌组织中的表达及意义

目的:探究胃癌组织中长链非编码RNA-尿路上皮癌相关基因1(lncRNA UBC1)、骨形态发生蛋白2(BMP2)表达水平及其与临床病理特征、预后的关系。方法:选取2013年1月—2015年1月收治的胃癌患者79例作为研究对象,于术中收集胃癌组织及癌旁正常组织(距病灶>5 cm)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法进行lncRNA UBC1、BMP2 mRNA表达水平检测,采用免疫组织化学染色法进行BMP2蛋白水平检测;采用Kaplan-Meier法分析不同lncRNA UBC1、BMP2蛋白水平患者生存情况;采用Cox回归模型分析胃癌患者预后不良的影响因素。结果:胃癌组织中lncRNA UBC1、BMP2 mRNA表达水平及BMP2蛋白高表达率均明显高于癌旁组织(P<0.05)。T_(3)~T_(4)、Ⅲ~Ⅳ期、淋巴转移患者胃癌组织中lncRNA UBC1、BMP2蛋白高表达率明显高于T_(1)~T_(2)、Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴转移患者(P<0.05),且低分化胃癌组织中lncRNA UBC1、BMP2蛋白高表达率明显高于中、高分化胃癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA UBC1、BMP2蛋白高表达患者5年累积生存率均明显低于lncRNA UBC1、BMP2蛋白低表达患者(P<0.05)。浸润深度(T_(3)~T_(4))、TNM分期(Ⅲ~Ⅳ期)、淋巴转移、lncRNA UBC1高表达、BMP2 mRNA高表达是胃癌患者不良预后发生的危险因素(P<0.05)。结论:胃癌组织中lncRNA UBC1、BMP2表达水平均明显升高,与分化程度、浸润深度、临床分期、淋巴转移等临床病理特征和患者预后不良发生密切相关。

非肌层浸润性膀胱癌TURBT治疗患者血清UBC1和DJ-1表达水平及其对预后预测价值研究

目的研究非肌层浸润性膀胱癌(non-muscle invasive bladder cancer,NMIBC)患者血清长链非编码RNA尿路上皮癌相关基因1[(LncRNA)upregulated in bladder cancer 1,UBC1]、帕金森病相关蛋白-1(DJ-1)的表达情况,分析两者对NMIBC患者预后的影响。方法选择2018年2月~2019年2月于河南科技大学第一附属医院接受经尿道膀胱肿瘤电切(TURBT)治疗的120例NMIBC患者为研究对象(NMIBC组),以同期健康体检的60例健康人群为对照组。应用实时荧光定量PCR检测各组血清UBC1水平。应用酶联免疫吸附实验检测各组血清DJ-1水平。比较不同临床病理特征NMIBC患者血清UBC1和DJ-1表达差异。Kaplan-Meier生存曲线分析血清UBC1和DJ-1表达对NMIBC患者无进展生存预后的影响。单因素及多因素COX回归分析影响NMIBC患者无进展生存预后的因素。结果相比于对照组,NMIBC组血清UBC1(4.19±0.48 vs 1.27±0.29)和DJ-1(8.62±3.60 ng/ml vs 4.31±1.07 ng/ml)水平升高,差异具有统计学意义(t=43.300,12.117,均P<0.05)。肿瘤T1期、高级别NMIBC患者血清中UBC1(5.21±0.56,5.11±0.53),DJ-1(11.28±3.98 ng/ml,10.50±3.87 ng/ml)表达分别高于Ta/Tis期、低级别患者(3.79±0.43,3.64±0.44;7.34±3.04ng/ml,7.49±3.23 ng/ml),差异具有统计学意义(t=15.314,5.966;16.393,4.584,均P<0.05)。UBC1高表达组和低表达组患者的平均无进展生存时间分别为28.17±3.68个月和33.59±3.32个月。UBC1高表达组患者累积无进展生存时间低于UBC1低表达组患者,差异具有统计学意义(Log-Rank testχ^(2)=6.681,P<0.05)。DJ-1高表达组和低表达组平均无进展生存时间分别为27.34±3.29个月和34.27±3.54个月。DJ-1高表达组患者累积无进展生存时间低于DJ-1低表达组患者,差异具有统计学意义(Log-Rank testχ^(2)=11.262,P<0.05)。肿瘤分期T1期(HR=1.613,95%CI=1.223~2.126)、肿瘤分级高级别(HR=1.917,95%CI=1.314~2.799),UBC1高表达(HR=1.937,95%CI=1.229~2.745)和DJ-1高表达(HR=1.738,95%CI=1.246~2.426)是影响NMIBC患者无进展生存预后的独立危险因素。结论NMIBC患者血清UBC1和DJ-1表达升高,两者表达与肿瘤分期及肿瘤分级有关,是影响NMIBC患者无进展生存预后的独立因素。

DCE-MRI、DWI联合血清c-Met、MACC1对宫颈癌盆腔淋巴结转移的诊断价值

目的探讨磁共振动态增强扫描成像(DCE-MRI)、磁共振弥散加权成像(DWI)联合血清人原癌基因编码蛋白(c-Met)、结肠癌转移相关基因1(MACC1)对宫颈癌盆腔淋巴结转移的诊断价值。方法回顾性分析2021年1月至2022年12月在新乡市中心医院诊治的100例宫颈癌患者的临床资料,按照是否出现盆腔淋巴结转移将患者分为转移组31例和未转移组69例,所有患者均做DCE-MRI、DWI检查和血清c-Met、MACC1检测。比较两组患者的DCE-MRI定量参数[血管外细胞外间隙容积分数(Ve)、容量转移常数(K_(trans))与速率常数(K_(ep))]、平均表观扩散系数(ADC)值及血清c-Met、MACC1水平,计算并比较DCE-MRI、DWI与血清c-Met、MACC1单独及联合诊断宫颈癌盆腔淋巴结转移的准确度、特异度、灵敏度。结果两组患者的Ve比较差异无统计学意义(P>0.05);转移组患者的K_(trans)、K_(ep)分别为(0.30±0.07)/min、(0.47±0.06)/min,明显高于未转移组的(0.22±0.05)/min、(0.43±0.07)/min,平均ADC值为0.82±0.15,明显低于未转移组的1.33±0.24,差异均有统计学意义(P<0.05);转移组患者的c-Met、MACC1水平分别为(127.53±27.48)μg/L、(9.24±3.01)ng/mL,明显高于未转移组的(81.25±18.75)μg/L、(5.21±1.37)ng/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);DCE-MRI、DWI与血清c-Met、MACC1四者联合诊断宫颈癌盆腔淋巴结转移的准确度、特异度、灵敏度均明显高于四者单独诊断,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论DCE-MRI、DWI联合血清c-Met、MACC1对宫颈癌盆腔淋巴结转移的诊断价值较高。

自噬与心肌病相关性的研究进展

自噬这个词来源于希腊语,原意为“吃自己”和“精确的细胞作用”。自噬从最初发现到如今经历了近50年,研究发现自噬可以被许多刺激所激活,包括饥饿、毒素、氧化应激和感染。在正常情况下,心肌细胞自噬维持在较低的情况,但在应激反应的高度激活下,自噬活动增强并在调节心脏稳态和功能中起重要作用。该文对自噬与心肌病相关性的研究进展进行综述。

lncRNA TUG1对人牙髓干细胞成骨/成牙本质分化的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)牛磺酸上调基因1(taurine upregulated 1,TUG1)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖及成骨/牙本质向分化的影响。方法分离培养hDPSCs,流式细胞术检测细胞表面抗原CD44、CD45、CD73、CD90、CD133、STRO-1,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和茜素红染色鉴定其分化能力。hDPSCs成骨诱导0、7、14 d收集RNA,qRT-PCR检测TUG1的表达水平。构建携带sh-TUG1的慢病毒载体pSLenti-U6-shRNA(TUG1)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE,并通过感染hDPSCs及嘌呤霉素筛选建立稳定沉默TUG1的hDPSCs细胞系,CCK-8检测hDPSCs增殖能力,ALP和茜素红染色及定量检测hDPSCs的早期ALP活性和晚期矿化结节的形成,qRT-PCR和Western blot检测成牙本质及成骨分化相关的基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白-1(dentine matrix protein 1,DMP-1)、Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因及蛋白表达变化。结果成功分离、培养和鉴定hDPSCs,hDPSCs成骨向分化过程中TUG1的表达明显增加(P<0.05)。沉默TUG1后hDPSCs的增殖能力下降(P<0.05),ALP活性降低,矿化结节形成减少;成牙本质分化基因DSPP、DMP-1以及成骨分化基因Runx2、OCN、OPN表达也显著降低(P<0.05)。结论沉默TUG1可抑制hDPSCs的增殖及成骨/成牙本质分化。

血清lncRNA MIAT、HMGB1水平变化与急性心源性脑梗死病情及预后的关系

目的 观察急性心源性脑梗死患者血清长链非编码RNA心肌梗死相关转录基因(lncRNA MIAT)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平变化,并探讨其与病情严重程度及预后的关系。方法 选择急性心源性脑梗死患者122例作为观察组(其中预后不良32例、预后良好90例),同期体检健康志愿者118例作为对照组。采用ELISA法检测血清HMGB1水平,实时荧光定量PCR法检测血清lncRNA MIAT水平;采用Spearman相关性分析急性心源性脑梗死患者血清lncRNA MIAT、HMGB1水平与梗死面积、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的关系;采用多元逐步回归分析急性心源性脑梗死患者预后不良的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA MIAT、HMGB1水平单独及联合检测对急性心源性脑梗死患者预后不良的预测价值。结果 观察组血清lncRNA MIAT、HMGB1水平均高于对照组(P均<0.05)。大面积梗死、NIHSS评分为≥16分的患者血清lncRNA MIAT、HMGB1分别低于小/中面积梗死、NIHSS评分<16分者,预后不良患者的血清lncRNA MIAT、HMGB1水平高于预后良好者(P均<0.05)。急性心源性脑梗死患者血清lncRNA MIAT、HMGB1水平与梗死面积、NIHSS评分均呈正相关关系(P均<0.05)。多元逐步回归分析结果显示,血清lncRNA MIAT、HMGB1水平升高及大面积梗死均是急性心源性脑梗死患者预后不良的独立危险因素(P均<0.05)。血清lncRNA MIAT、HMGB1单独及联合预测急性心源性脑梗死患者预后不良的曲线下面积分别为0.847、0.779、0.937,联合预测的曲线下面积高于二者单独预测(P均<0.05)。结论 急性心源性脑梗死患者血清lncRNA MIAT、HMGB1水平均升高,且与患者的病情严重程度有关,二者联合检测有助于预测患者的预后。

尿路上皮癌相关基因1对磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶信号通路和葡萄糖摄取的影响

目的：观察长链非编码RNA（lncRNA）尿路上皮癌相关基因1（UCA-1）对人肾上皮293T细胞的磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（PI3K-Akt）信号通路及糖代谢的影响，并探索其中可能的分子机制。方法将293T细胞分为5组，即空白对照组、空质粒的阴性对照组、无义乱序RNA的阴性对照组（si-scr组）、过表达UCA-1组（UCA-1组）及沉默UCA-1组（si-UCA-1组）。通过转染UCA-1过表达质粒或UCA-1特异性小干扰RNA（siRNA）来干预293T细胞中的UCA-1水平。Western blotting法检测PI3K-Akt信号通路关键蛋白的表达变化，实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和荧光素酶报告系统检测UCA-1对第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）的RNA水平和转录活性的影响，并通过2-脱氧-3H-D-葡萄糖掺入法检测细胞的葡萄糖摄取能力。两组之间比较用t检验，多组之间比较采用单因素方差分析。结果（1）与对照组比较，UCA-1组PTEN的mRNA水平明显下降（1.07±0.05比0.24±0.05，t=14.257，P〈0.01），而转染UCA-1特异性siRNA细胞中PTEN的mRNA水平明显上升（si-scr组比si-UCA-1组,1.02±0.03比12.47±0.17, t=15.816, P〈0.01）。（2）阴性对照组与UCA-1组比较，转染UCA-1过表达质粒PTEN的启动子转录活性降低：1.07±0.05比0.23±0.03（t=15.192, P〈0.01），而转染UCA-1特异性siRNA后PTEN的启动子转录活性升高[si-scr组与si-UCA-1比较,1.02±0.03比12.53±0.43（t=14.527, P〈0.01）]。（3）过表达UCA-1组细胞的葡萄糖摄取能力升高至对照组的（3.78±0.39）倍（t=6.711，P〈0.05），同时转染PTEN过表达质粒可逆转这种作用（P〉0.05）。结论 UCA-1可通过抑制PTEN激活293T细胞PI3K-Akt信号通路，并促进其葡萄糖摄取能力。

长链非编码RNA核富集转录体1调节不均一核糖核蛋白A2蛋白对人肝细胞癌进展的研究

目的 通过RNA免疫共沉淀寻找长链非编码RNA（lncRNA）核富集转录体1（NEAT1）相关的RNA结合蛋白,验证这些RNA结合蛋白参与NEAT1调节肝癌相关基因核内不均一核糖核蛋白A2（hnRNPA2）表达的分子机制,观察NEAT1调节hnRNP A2的表达对人肝细胞癌的进展的影响.方法 查询Starbase 2.0数据,寻找与NEAT1相互作用密切的RNA结合蛋白,通过RNA免疫共沉淀明确能同时与NEAT1和NEAT1所调控基因mRNA相互作用的RNA结合蛋白,RNA pull-down明确RNA结合蛋白与NEAT1作用靶点片段,使用转染试剂Lipofectamine 2000和siRNA NEAT1（终质量浓度100 nmol/L）敲低HepG2细胞NEAT1表达,Western blot、免疫组织化学检测NEAT1对hnRNP A2蛋白的调节,使用逆转录病毒STP-重组逆转录病毒载体作为载体建立hnRNP A2过表达模型并应用于NEAT1低表达的HepG2细胞模型中,细胞计数试剂盒（CCK-8）增殖实验（10 μl/2 000个细胞）和Transwell小室研究NEAT1低表达的HepG2细胞（2×10^5个/孔）过表达hnRNP A2后与对照组的增殖、侵袭功能.HepG2经NEAT1敲低后2×10^6/0.2 ml腋下注射建立裸鼠皮下成瘤模型,与对照组（si-NC）比较肿瘤体积,hnRNP A2表达.结果 U2AF65能够与NEAT1和hnRNP A2 mRNA相互作用（富集度分别为IgG的82.659倍和53.527倍）,NEAT1敲低降低了hnRNP A2 mRNA转录和蛋白表达（P＜0.01）,这种调控作用可能与NEAT1-U2AF65复合物相关,hnRNPA2过表达可以促进NEAT1敲低的HepG2细胞增殖和侵袭功能（P＜0.01）.结论 NEAT1通过调节hnRNP A2蛋白影响了肝细胞癌细胞的增殖和侵袭能力.