pl6及Ki-67蛋白在宫颈上皮内瘤变中的临床检测意义

目的：探讨宫颈上皮内瘤变（cIN）中p16及Ki一67蛋白的临床表达及意义。方法：收集本院经活检或手术切除的子宫颈组织标本97例，其中宫颈正常或非特异性炎性病变17例；cINI～Ⅲ55例，宫颈鳞状细胞癌25例。对全部组织标本的p16及Ki一67蛋白阳性表达情况进行检测。结果：cINⅡ、cINⅢ及宫颈癌之间的p16及Ki一67阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。而cINI、cINⅡ、cINⅢ及宫颈癌患者的阳性表达率显著高于宫颈正常或非特异性炎性病变患者（P〈O．05），且p16及Ki一67阳性表达情况呈逐渐上升趋势。结论：p16蛋白能有效的对宫颈良陛病变、cIN及宫颈癌进行鉴别诊断，并能够通过p16的染色情况对cINI和cINⅡ～Ⅲ进行鉴别，能够有效对cIN的分级情况进行判断。宫颈高度病变可以根据Ki一67蛋白的阳性表达情况与宫颈癌进行鉴别，但在与宫颈低度病变的鉴别中，还需要联合p16蛋白的阳性表达情况进行区分。

非小细胞肺癌pl6/CDKN2基因失活的研究

目的：分析中国人非小细胞肺癌中ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因失活的情况，探讨该基因在肺癌发生中的作用。方法：选取与ｐ１６基因紧密连锁的Ｄ９Ｓ１７４８位点，对１７例临床切除的原发性肺癌标本进行微卫星不稳定性分析，用甲基化特异性ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＣＲ， ＭＳＰ）检测 ｐｌ６基因启动子区 ＣｐＧ岛甲基化状况，用免疫组织化学法检测Ｐ１６蛋白表达情况。结果：微卫星不稳定性分析结果表明，在１３例Ｄ９Ｓ１７４８位点存在多态性的肿瘤ＤＮＡ中有 ９例（６９ ．２％）发生了杂合性缺失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ， ＬＯＨ）。 ＭＳＰ的结果显示，有 ７０． ６％（１２／１７）的肿瘤组织存在ｐ１６启动子区的异常高甲基化。在本研究中，８２．４％（１４／１７）的肿瘤组织可以检测出一种或两种ｐ１６基因的异常改变。对此１７例肿瘤标本进行的免疫组织化学分析显示，有 １３例 Ｐ１６蛋白表达阴性，其中 ９２ ３％（１２／１３）存在一种或两种ｐ１６基因的异常改变。免疫组化结果与ｐ１６基因分子遗传学改变情况基本吻合。结论：作为一种抑癌基因，ｐ１６在多种肿瘤组织中都有异常改变。我们的研究表明，ｐ１６基因失表达是非小细胞肺癌?

GFP-pl6融合基因表达载体的构建

本文报道了以ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）基因为报告基因，ｐｌ６基因为目的基因，将ｐｌ６基因分别插入ＧＦＰ基因的上游和下游，构建成ＧＦＰ－ｐｌ６融合基因表达载体ｐＣｐｌ６Ｇ和ｐＣＧｐ１６，并通过酶切、电泳技术对重组体进行了鉴定。

PL6-10型高频疲劳试验机及其故障分析

一、前言高频疲劳试验机是我国近廿年来随着航空工业和空间技术迅速发展的需要而发展起来的一种材料试验机。它主要用来研究和发展新型材料,测定材料的力学性能。同时,也为承受高速和各种不同类型的动载荷构件做摸拟试验,以提供切合实际而可靠的数据。因此,高频疲劳试验机现已成为我国在开发材料研究领域中重要的测试设备之一。国产PL6-10型高频疲劳试验机是采用电磁激振器激励机械振动系统而工作的。

宫颈病变筛查中p16/mcm2、HPV检测的临床价值

目的:检测宫颈病变中宫颈脱落细胞p16/微小染色体维持蛋白(mcm2)的表达,探讨p16/mcm2与人乳头瘤病毒(HPV)检测在宫颈病变筛查的临床价值。方法:选取2023年5-10月在徐州市肿瘤医院妇科门诊或病房行宫颈癌筛查并符合入组标准的1045例女性,均行p16/mcm2免疫细胞化学双染检测及HPV检测,对p16/mcm2双染确诊为不明意义的非典型鳞状上皮细胞(ASC-US)及以上病变或HPV16/18阳性者行阴道镜检查、活检宫颈组织送病理检查。结果:p16/mcm2阳性率在HPV阴性组、低危HPV组、其他12种HPV阳性组和HPV16/18阳性组依次递增(P=0.000);p16/mcm2阳性表达在其他12种HPV阳性组和HPV16/18阳性组均高于HPV阴性组[OR=4.28(95%CI 2.02~9.04)、OR=76.64(95%CI 36.05~162.93)],在HPV16/18阳性组均高于其他12种HPV阳性组,且随宫颈病变程度加重p16/mcm2阳性表达增高(均P<0.05)。p16/mcm2检测筛查子宫颈上皮内瘤病变CIN1级、CIN2级和CIN3级的灵敏度和阳性预测值(85.0%、89.1%、94.3%,94.1%、97.0%、97.0%)均高于HPV。结论:p16/mcm2双染和HPV存在相关性,两者均可用于宫颈病变筛查;与HPV检测相比,p16/mcm2双染有较高灵敏度和阳性预测,p16/mcm2双染联合HPV检测有望成为有较好应用前景的宫颈癌筛查方案。

阴道镜检查联合HPV L1壳蛋白、p16蛋白检测筛查宫颈上皮内瘤变效果

目的:探讨宫颈病变筛查中阴道镜检查、人乳头瘤病毒L1(HPV L1)壳蛋白检测、多肿瘤抑制基因(MTS1,p16蛋白)检测和联合诊断在宫颈上皮内瘤变(CIN)的临床应用效果。方法:收集2022年6月-2023年6月本院妇科门诊因疑存宫颈病变进行宫颈癌筛查的女性201例,均行HPV L1壳蛋白、p16蛋白检测和阴道镜检查,以阴道镜下宫颈组织活检病理结果为诊断依据,对HPV L1壳蛋白、p16蛋白检测、阴道镜检查及3项联合诊断的效果进行分析。结果:宫颈病理诊断无病变121例,病变80例(CIN1级54例、CIN2级25例、CIN3级1例)。阴道镜CIN检出率为53.7%,灵敏度81.3%,特异度64.5%,准确度为71.1%;HPV L1壳蛋白检测CIN检出率为55.2%,灵敏度73.8%,特异度为57.0%,精确度为63.7%。p16蛋白检测CIN检出率为53.7%,灵敏度83.8%,特异度66.1%,精确度73.1%。3项联合检测CIN检出率为64.2%,灵敏度97.5%,特异度57.9%,精确度74.6%。筛查灵敏度阴道镜、HPV L1壳蛋白、p16蛋白检测无差异(χ^(2)=2.667,P>0.05),但3项联合诊断的灵敏度高于各单独指标检测(χ^(2)=11.123、18.331、8.901,P<0.05),特异度3项联合诊断与单独指标无差异(χ^(2)=3.233,P>0.05)。结论:阴道镜检查联合HPV L1壳蛋白,p16蛋白检测筛查CIN的灵敏度可显著提高,可为临床提供有价值的诊断证据。

高危HPV病毒阳性宫颈上皮细胞P16、Ki-67的表达

目的研究人乳头瘤病毒(HPV)高危型HPV-DNA阳性宫颈上皮细胞不典型增生和低级别宫颈上皮内瘤变(Lowgrade Squamous Intraepithelial Lesion,LSIL)患者pl6、Ki-67表达情况。方法用Hybrid CaptureⅡ(HC2)或FQ-PCR体外扩增技术检测宫颈上皮细胞高危型HPV﹣DNA,同时行液基细胞学检查。对97例高危型HPV-DNA阳性且液基细胞学诊断为不典型增生(ASCUS)或CINⅠ或CINⅡ的患者,行阴道镜检查取可疑宫颈组织标本多点活检并En Vision两步法进行免疫组化标记pl6、Ki-67。结果 97例宫颈上皮细胞高危HPV-DNA阳性患者中,宫颈组织CINⅡ级38例,CINⅠ级35例,炎症和(或)ASCUS 24例。P16标记结果 :3例+++,30例++,39例+,P16阳性表达率为74.2%;Ki-67标记结果 :3例+++,30例++,30例+,Ki-67阳性表达率为64.9%。炎症和(或)ASCUS、CINⅠ、CINⅡ三者比较,P16和Ki-67的阳性率和阳性程度具有极显著性差异(P<0.01)。结论高危HPV病毒阳性宫颈上皮细胞随着病情严重程度增加pl6、Ki-67的阳性率和阳性程度均升高,pl6、Ki-67的检测对CIN的准确分级有利。

宫颈液基细胞中p16INK4a和cyclin E蛋白表达及其对CIN Ⅰ患者预后的评估价值

目的:探讨宫颈液基细胞中p16INK4a和cyclin E蛋白表达及其对CINI患者预后的评估价值。方法:收集我院病理科2005-10/2008-10液基细胞学诊断CIN Ⅰ级患者86例,均经病理组织学证实为CIN Ⅰ级。采用免疫细胞化学染色检测p16INK4a及cyclin E蛋白,同时随访1年,观察其表达与患者病情转归的相关性。结果:86例CIN Ⅰ级患者宫颈液基细胞中p16INK4a阳性表达59例(68.6%),cyclin E阳性表达70例(81.4%)。随访1年,54例CINI病变治愈,21例CIN Ⅰ病变未愈,11例进展为CIN Ⅱ及CIN Ⅲ(恶化)。59例pl6INK4A阳性表达病例中28例治愈,20例未愈,11例恶化;而27例pl6INK4A表达阴性者中26例治愈,1例仍未愈,均无恶化。两者比较有统计学差异(P<0.01)。70例cyclin E阳性表达病例中29例治愈,26例未愈,15例恶化;而16例cyclin E表达阴性者均治愈。两者比较有统计学差异(P<0.01)。结论:p16INK4a及cyclin E蛋白联合检测对判断宫颈CIN Ⅰ患者预后可能具有重要的临床价值。

EBV与癌基因P53、P21、P16在食道癌中表达与意义

目的 探讨EBV感染与癌基因P5 3、P2 1、P16在食道癌中的表达与意义。方法 对 6 0例食道癌病例 ,用原位杂交法检测EBV的表达 ,用免疫组化法检测P5 3、P2 1、P16的表达。结果 EBV阳性表达率为 72 % ,P5 3阳性表达率为 83% ,P2 1阳性表达率为 6 5 % ,P16阳性表达率为 30 %。在EBV阳性病例中P5 3、P2 1、P16的阳性病例分别为 2 7、2 8、5例。结论 EBV感染对食道癌的发生有一定的作用 ;P2 1、P16的表达与EBV感染有关 ;P5 3、P2 1。

p16基因研究现状与妇科肿瘤

p16基因是抑癌基因 ,在妇科肿瘤及多种肿瘤和细胞系中频繁杂合缺失、纯合缺失、突变及甲基化等 ,导致恶性肿瘤的发生。本文概括了 p16基因自发现以来的研究进展及其在妇科肿瘤中的表达 ,特别对 DNA甲基化研究及对人类恶性肿瘤的早期诊断 .

p16^(INK4a)与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

p16INK4a基因是一种抑癌基因,在CyclinD-CDK4/6-pRb-E2F通路中发挥重要负反馈调节作用,大部分恶性肿瘤中均发现该基因表达缺失。p16INK4a低表达是卵巢癌不利的预后指数,可作为卵巢癌独立的预后因子;p16INK4a在宫颈癌中呈过表达,有助于宫颈癌的筛查;p16INK4a在子宫内膜癌发生发展中起着重要作用,与子宫内膜癌转移灶发生率的增加密切相关;而在外阴癌HPV感染型中,常有p16INK4a过表达,是可靠的HPV阳性外阴癌的标记物。

骨肉瘤中Rb、p16、CDK_4、cyclinD_1蛋白的表达及其意义

目的：探讨骨肉瘤中Ｒｂ、ｐ１６、ＣＤＫ_４、ｃｙｃｌｉｎＤ_１的蛋白表达、相互关系及其意义。方法：应用免疫组化方法对４０例骨肉瘤组织中ＲＢ、ｐ１６、ＣＤＫ_４、ｃｙｃｌｉｎＤ１的蛋白表达状况进行检测。结果：４０例骨肉瘤Ｒｂ、ｐ１６蛋白表达缺失分别为７２.５％（２９／４０）和２２.５％（９／４０）；１１例ｐＲｂ阳性的骨肉瘤中８例ｐ１６阴性，２９例ｐＲｂ阴性的骨肉瘤中２８例ｐｌ６阳性；５２.５％（２１／４０）的骨肉瘤中存在ＣＤＫ_４的过表达，１１例ｐＲｂ阳性的骨肉瘤８例ＣＤＫ_４蛋白呈过表达，３削弱阳性 ；３例 ｐＲｂ、ｐ１６均阳性的骨肉瘤 ＣＤＫ４导过表达；骨肉瘤中 ｐＲｂ， ｐ１６， ＣＤＫ_４的总异常率达１００％；４０例骨肉瘤中未检出ｃｙｃｌｉｎＤ_１蛋白的过表达。结论：（１）Ｒｂ蛋白的缺失。ＣＤＫ_４蛋白的过表达是骨肉瘤中的常见事件（２）骨肉瘤中ｐ１６与ｐＲｂ的表达呈负相关；（３）Ｒｂ蛋白阳性的骨肉瘤，ｐ１６蛋白的缺失及／或ＣＤＫ４蛋白的过表达，可能在ｐＲｂ的过度磷酸化而失活以致骨肉瘤失控地增生中起着重要作用；（４）ｐ１６－ＣＤＫ_４－ｐＲｂ通路的异常与骨肉瘤的发生密切相关。

RASSF1A和p16基因甲基化在子宫颈癌组织中的表达及意义

目的:探讨p16和RASSF1A基因异常甲基化在子宫颈癌组织中的表达及意义。方法:用甲基化特异性聚合酶链反应法(methylation-specific PCR,MSP)对40例宫颈癌组织,80例宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织、20例正常宫颈组织作为对照组进行p16和RASSF1A基因异常甲基化检测。结果:p16和RASSF1A甲基化在正常组未见表达。宫颈癌组p16基因甲基化阳性率为40.0%,明显高于CIN组的12.5%,差异有统计学意义(χ2=11.88,P<0.05)。宫颈癌组RASSF1A基因甲基化阳性率为20.0%,高于CIN组的7.5%,差异有统计学意义(χ2=4.04,P<0.05)。宫颈癌组p16和RASSF1A基因甲基化阳性率为55.0%,明显高于宫颈CIN组的17.5%,差异有统计学意义(χ2=17.12,P<0.05)。结论:p16和RASSF1A基因启动子区异常甲基化与宫颈癌的生物学行为相关,可能为宫颈癌的早期辅助诊断和治疗提供帮助。

食管鳞癌中hMLH1、E-cadherin、p16^INK4a基因启动子甲基化及其意义

背景与目的:目前认为抑癌基因启动子甲基化导致转录抑制是恶性肿瘤发生的重要机制之一,hMLH1、E-cadherin及p16INK4a基因在多种恶性肿瘤中都已被证实存在较高频率的甲基化。本研究通过检测食管鳞癌组织及癌旁组织中hMLH1、E-cadherin、p16INK4a基因启动子甲基化的发生情况,探讨hMLH1、E-cadherin、p16INK4a基因启动子甲基化在食管鳞癌发生发展中的作用。方法:采用酚-氯仿法提取105例食管鳞癌组织及癌旁组织的基因组DNA,应用甲基化特异性PCR对所提DNA进行hMLH1、E-cadherin、p16INK4a基因甲基化检测。采用EnVison免疫组织化学二步法对癌组织中上述3种基因蛋白表达进行检测。结果:癌组织中E-cadherin、hMLH1、p16INK4a基因启动子甲基化的阳性率分别为57.1%(60/105)、20.9%(22/105)和50.5%(53/105),而癌旁食管组织中相应的3个基因的甲基化率分别为10.5%(11/105)、1.9%(2/105)和7.6%(8/105),均显著低于癌组织。E-cadherin(P=0.021)及p16INK4a(P=0.026)基因甲基化与蛋白表达缺失密切相关,而hMLH1基因甲基化与蛋白表达无显著相关性。E-cadherin基因启动子甲基化与淋巴结转移有关(P=0.016),p16INK4a基因启动子甲基化与低分化癌有关性(P=0.024)。hMLH1基因甲基化与各项临床病理特征均无关。结论:食管鳞癌中p16INK4a基因启动子甲基化与相应蛋白表达缺失密切相关,且在低分化癌中更多见;E-cadherin基因启动子甲基化与相应蛋白质表达缺失有相关性,并且有淋巴结转移多见的显著特征,这2个基因的甲基化位点与食管鳞癌密切相关。hMLH1基因甲基化可能并不直接参与食管鳞癌的发生、发展。

乳腺癌组织中p16基因变异及CpG岛甲基化状态的研究

目的探讨p16基因在乳腺癌中的纯合缺失、突变和甲基化的改变及与乳腺癌发生、发展的关系。方法采用PCR缺失分析、PCR-SSCP及甲基化敏感内切酶-PCR分析方法检测p16基因在39例乳腺癌组织变化状况,并结合临床病理资料进行分析。结果39例乳腺癌组织有6例出现p16基因纯合缺失,3例发生p16基因突变,p16基因变异频率为15.4%,5’CpG岛11例发生甲基化,甲基化率为28.2%。10例良性乳腺病组织中未发现p16基因改变和甲基化。p16基因变异频率、甲基化状态与临床分期和淋巴结转移密切相关。结论p16基因变异、甲基化是乳腺癌中常见的分子改变,它们在乳腺癌的发生、发展过程中扮演着重要的角色。

NSCLC患者血浆p16和MGMT基因甲基化检测及临床意义

目的:检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血血浆中p16基因、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子的甲基化状态,探讨p16、MGMT基因启动子的异常甲基化在NSCLC筛查及早期诊断中的意义。方法:利用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测NSCLC患者外周血血浆p16、MGMT基因启动子的甲基化状态。结果:65例NSCLC血浆样品中分别发现19例(29.23%)p16基因启动子异常甲基化和16例(24.62%)MGMT基因启动子异常甲基化,45例正常对照血浆组未检测到p16、MGMT基因启动子的异常甲基化(P<0.05),血浆中两基因甲基化检出率与NSCLC的分型及临床分期无明显相关性(P>0.05)。结论:利用巢式甲基化特异性PCR法检测外周血血浆中p16、MGMT基因启动子的甲基化,可为NSCLC的筛查、早期诊断及预后判断提供有价值的信息。

人膀胱癌组织中p16与HPV的相关表达

目的 探讨膀胱癌组中抑癌基因p16及高危性人乳头瘤病毒之间的关系。方法 选取40例人膀胱癌标本,分别采用免疫组化染色方法-LSAB法检测p16及聚合酶链反应技术检测人乳头瘤病毒DNA。结果抑癌基因p16阳性表达率为52.5％(21/40),HPV-DNA阳性表达率为55.0％(22/40),9例标本p16与HPV-DNA同时表达阳性。结论 抑癌基因p16蛋白的表达随着膀胱癌病理分级、临床分期的上升其阳性表达率下降。HPV在病理分级低恶性的组织中表达阳性率高,说明HPV所致的膀胱癌大多数其分化程度较高。在病理分化较好、临床分期早期的同一膀胱癌的9份标本中,HPV-DNA与p16蛋白可同时表达阳性。抑癌基因p16与人乳头瘤病毒在膀胱癌的发生、发展过程中无明显相关性。

抑癌基因p16在成釉细胞瘤及牙源性角化囊肿中表达的研究

目的 研究成釉细胞瘤（Ameloblastoma,AB）中 p16蛋白及 p16 mRNA表达,探讨其生物学意义。方法 应用免疫组化方法（SP）检测40例 AB及牙源性角化囊肿（Odontogenic keratocyst,OKC）7例,基底细胞癌（Basal cell carcinoma,BCC）8例 p16蛋白的表达,同时用原位杂交法检测 p16 mRNA在20例 AB中表达。结果 40例AB,7例 OKC,8例 BCC,p16蛋白缺失表达分别为70％,85.7％,100％。p16mRNA缺失率80.5％,与蛋白缺失表达一致率53.8％。结论 （1）AB与 OKC的发生与p16蛋白缺失有关。（2）AB中原发与复发比,原发与恶变比 p16蛋白缺失率不同（P<0.05）。（3）AB及 OKC,BCC三种不同病变经统计学处理 P>0.05,末见明显相关性。（4）在 AB中p16蛋白与 p16 mRNA表达 P<0.05,具有一定相关性。

河南林州地区贲门癌和癌旁组织中p16基因启动子甲基化及蛋白表达

目的探讨贲门癌变过程中p16基因启动子区甲基化和p16蛋白表达变化特征和规律及其相互关系。方法采用甲基化特异PCR(MSP)及免疫组化方法,检测林州地区32例贲门癌患者癌组织、癌旁不典型增生组织和正常组织p16基因启动子区甲基化状态及蛋白表达情况。结果p16基因在癌组织中表达缺失18例(56%),不典型增生组织中表达缺失8例(73%);26例(81%)癌组织、7例(64%)不典型增生组织和18例(67%)正常组织发生了p16基因启动子区的甲基化。贲门癌组织中p16基因甲基化与表达缺失一致率为56%。差异无统计学意义,P>0.05。结论p16蛋白表达缺失可能是贲门癌变过程中的重要分子事件,p16基因启动子区甲基化可能是导致其蛋白表达缺失的机制之一。

p16蛋白与星形细胞瘤生物学行为的相关性研究

目的：探讨p16蛋白与人脑星形细胞瘤生物学行为的相关性。方法：采用免疫组织化学技术检测62例星形细胞瘤标本中p16、Rb、cyclinD1基因产物及Ki－67抗原的表达情况，探讨P16－cyclinDl／CDK4-pRb细胞周期调控通路的调控机制和p16蛋白与星形细胞瘤生物学行为的相关性。结果：（1）星形细胞瘤中pl6－cyclinD1／CDK4-pRb细胞周期调控通路存在异常调节和表达，以单个异常为主，占64.52％（40/62）。（2）p16蛋白表达缺失率为43、55％（27／62），恶性组（WHOⅢ－Ⅳ级）为65.63％（21／32），随病理分级的增高，缺失率增加（P＜0．001）；p16蛋白表达缺失者有较高的增殖标记指数（r＝－026，P＜0．05）；p16蛋白表达与KPS评分呈正相关（r=0．44，P＜0．001）。结论：p16、Rb、cyclinD1基因产物的异常表达和调节，尤其是p16蛋白缺失与星形细胞瘤发生发展密切相关，是反映星形细胞瘤恶性生物学行为的重要分子标志物之一。