α-亚麻酸植物甾醇酯对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的保护作用

目的 探讨α-亚麻酸植物甾醇酯（ALA-PS）对动脉粥样硬化（AS）的影响及其分子机制.方法 苏木素-伊红（HE）和油红O染色观察高脂喂养和ALA-PS干预组载脂蛋白E（ApoE）基因敲除（ApoE KO）小鼠AS形成.酶比色法检测血清胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）含量.Western blot法检测肝脏羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGCR）和过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）的蛋白表达.结果 与模型组比较,ALA-PS干预组小鼠AS面积显著减少,血清TC、TG显著降低（P＜0.05）,分别为10.33 mmol/L和1.39 mmol/L.同时肝脏HMGCR和PPARα蛋白表达分别降低46.8％和升高1.63倍.结论 ALA-PS能有效改善ApoE KO小鼠的AS,其分子机制可能与调节HMGCR和PPARα蛋白表达有关.

α-亚麻酸植物甾醇酯抑制氧化应激改善非酒精性脂肪性肝病

目的探讨α-亚麻酸植物甾醇酯(plant sterol ester ofα-linolenic acid,ALA-PS)对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的改善作用,并从抑制氧化应激(oxidative stress,OS)角度探讨其可能的分子机制。方法50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为5组(n=10):即对照组(control)、高脂高胆固醇组(HFD)、植物甾醇组(PS)、α-亚麻酸组(ALA)和α-亚麻酸植物甾醇酯组(ALA-PS)。Control组给予普通饲料,HFD组给予高脂高胆固醇饲料,PS、ALA和ALA-PS组给予相同的高脂高胆固醇饲料,并分别添加2%PS、1.3%ALA和3.3%ALA-PS。16w后,油红O染色检测小鼠肝脏脂质沉积情况;DCFH-DA探针检测肝脏ROS水平;试剂盒检测血清及肝脏MDA和GSH水平;蛋白免疫印迹法检测小鼠肝脏抗氧化关键调控因子Nrf2和抗氧化酶HO-1的蛋白表达水平。结果与Control组相比,HFD组小鼠肝脏组织出现大量脂质沉积、肝脏ROS的产生显著增多、血清及肝脏MDA水平显著增加、GSH水平显著降低、肝脏Nrf2和HO-1蛋白表达水平显著下调,差异均具有统计学意义。与HFD组相比,ALA-PS干预显著减轻HFD诱导的肝脏脂肪变性、减少肝脏ROS水平、降低血清及肝脏MDA水平、增加GSH水平,并显著上调肝脏Nrf2和HO-1的蛋白表达水平,差异均具有统计学意义。结论ALA-PS对NAFLD具有显著的改善作用,其分子机制与抑制OS有关。

α-亚麻酸植物甾醇酯调节SIRT1抑制油酸和胆固醇联合诱导的HepG2细胞焦亡

目的 探讨α-亚麻酸植物甾醇酯(PS-ALA)对油酸和胆固醇(OA/Cho)联合诱导的肝细胞焦亡的改善作用,并基于SIRT1信号分子进一步探索潜在的分子机制。方法 采用OA/Cho联合诱导HepG2细胞焦亡,同时给予PS-ALA、PS、ALA干预。油红O染色观察细胞脂质沉积;Hoechst33342/PI双染评价焦亡发生情况;蛋白免疫印迹检测细胞焦亡信号通路关键蛋白NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD-N的表达水平;免疫荧光染色检测NLRP3的表达水平;免疫荧光双标记进行SIRT1和NLRP3以及SIRT1和GSDMD-N共定位。结果 与正常对照组相比,OA/Cho组细胞内有大量脂滴沉积,并且发生明显的细胞焦亡,细胞焦亡信号通路关键蛋白NLRP3、Caspase-1 p20和GSDMD-N的表达水平显著增加,PS-ALA干预后显著改善OA/Cho诱导的细胞内脂质沉积,并有效抑制细胞焦亡。进一步的分子机制研究发现PS-ALA显著上调SIRT1的表达水平并同时降低NLRP3和GSDMD-N的表达水平。结论 PS-ALA能有效抑制OA/Cho诱导的HepG2细胞焦亡,其分子机制可能与激活SIRT1信号分子有关。

α-亚麻酸植物甾醇酯调控Nrf2/GPX4信号通路抑制HepG2细胞铁死亡

目的探讨α-亚麻酸植物甾醇酯(PS-ALA)对油酸与铁死亡诱导剂(OA/erastin)联合诱导的HepG2细胞铁死亡的改善作用,并基于Nrf2/GPX4信号通路进一步探索其潜在分子机制。方法采用1mmol的OA和10μmol的erastin联合诱导HepG2细胞发生铁死亡,同时给予ALA、PS和PS-ALA干预。油红O染色观察HepG2细胞脂肪变性程度;Hoechst/PI双染评价铁死亡发生;蛋白免疫印迹检测铁死亡相关蛋白Nrf2、GPX4、HO-1、NQO1及ptgs2的表达水平;荧光探针检测细胞内ROS与脂质过氧化物水平。结果与Control组相比,OA/erastin组细胞内有大量脂质沉积,ROS和脂质过氧化物显著增多,发生明显铁死亡。PS-ALA干预显著减轻OA/erastin诱导的HepG2细胞脂质沉积、减少细胞ROS与脂质过氧化物产生,抑制铁死亡。进一步的分子机制研究表明PS-ALA显著上调HepG2细胞Nrf2及其靶基因GPX4、HO-1与NQO1的蛋白表达水平。结论PS-ALA能有效抑制OA/erastin诱导的HepG2细胞铁死亡,其分子机制可能与上调Nrf2/GPX4通路有关。

α-亚麻酸植物甾醇酯调控TGF-β1/Smad信号通路改善小鼠肝纤维化

目的探讨α-亚麻酸植物甾醇酯(PS-ALA)对高脂高胆固醇饮食(HFCD)诱导的肝纤维化的改善作用,及其抑制TGF-β1/Smad信号通路的分子机制。方法将50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为Control、HFCD、ALA、PS和PS-ALA组,每组10只。Control组给予普通饲料;HFCD组给予高脂高胆固醇饲料(45%kcal脂肪、2%胆固醇);ALA、PS和PS-ALA组给予相同的高脂高胆固醇饲料并分别添加1.3%ALA、2%PS和3.3%的PS-ALA。24w后,Masson染色评估肝脏纤维化严重程度;试剂盒检测HYP、ALT和AST水平;免疫荧光法检测肝脏α-SMA的表达水平;Western-blot法检测肝脏TGF-β1、Smad2/3、P-Smad2、α-SMA、COL1A1及CTGF蛋白表达水平。结果与Control组相比,HFCD组小鼠肝脏组织出现大量胶原沉积,同时伴随α-SMA蛋白表达水平上调,提示肝脏纤维化发生。PS-ALA显著改善HFCD诱导的小鼠肝脏纤维化,并显著降低血清ALT、AST以及肝脏HYP水平(P<0.05);PS-ALA显著下调纤维化关键调节因子TGF-β1及其靶分子P-Smad2、COL1A1及CTGF的蛋白表达水平(P<0.05)。结论PS-ALA干预能有效改善HFCD诱导的肝纤维化,其分子机制与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。

α–亚麻酸植物甾醇酯改善非酒精性脂肪性肝病作用

目的探讨α–亚麻酸植物甾醇酯(ALA-PS)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的改善作用和潜在分子机制。方法选用50只雄性C57BL/6J小鼠,适应性喂养1周后随机分为5组,分别为对照组、模型组、植物甾醇组(PS)、α–亚麻酸组(ALA)和α–亚麻酸植物甾醇酯组(ALA-PS),每组10只。对照组给予普通饲料,模型组给予高脂饲料,PS、ALA和ALA-PS组给予相同高脂饲料并分别添加2%PS、1.3%ALA和3.3%ALA-PS。16周后,测定小鼠体重和肝指数;血清和肝脏TG、TC水平;HE染色观察肝组织脂质蓄积和脂肪变性程度;透射电镜观察内质网形态;Western blot法检测肝脏JNK、p-JNK、Bcl-2及Bax蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组小鼠肝组织出现大量脂质蓄积;与模型组比较,ALA-PS组显著改善高脂饮食诱导的小鼠肝脏脂肪变性,恢复了肝细胞内质网形态并显著降低血清及肝脏TG和TC水平(P <0.05);ALA-PS显著降低凋亡关键调节因子p-JNK和Bax的蛋白表达水平,增加Bcl-2蛋白表达水平。结论 ALA-PS干预能够有效改善高脂饮食导致的NAFLD,其分子机制与抑制内质网应激引起的细胞凋亡有关。