基于分子对接的三角帆蚌酪氨酸酶抑制肽筛选及活性评价

【目的】筛选和鉴定三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)珍珠层蛋白酶解产物中的酪氨酸酶抑制肽,为美白肽的研究与开发提供依据。【方法】以三角帆蚌珍珠层粉为原料,基于其蛋白组成特性,采用物理改性和可控酶解技术制备珍珠层活性肽(Peptides from nacre powder,P-NP),通过测定其2,2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH)的清除能力、酪氨酸酶抑制活性以及对紫外线B(UVB)辐照损伤人永生化角质形成细胞(HaCaT)的影响,探究其体外活性。采用液质联用技术(LC-MS/MS)和分子对接技术从P-NP中鉴定并筛选出三角帆蚌酪氨酸酶抑制肽,并进行固相合成和体外活性验证。【结果】P-NP的ABTS和DPPH自由基清除效果较佳,肽质量浓度为1.00、14.00 mg/mL时,两者清除率分别为41.58%和11.23%;P-NP的酪氨酸酶活性抑制能力良好,其半抑制浓度(IC_(50))值为7.51 mg/mL。P-NP质量浓度在83.22μg/mL时,显著提高UVB损伤HaCaT细胞的生长活力(P<0.05)。P-NP经LC-MS/MS鉴定后筛选出相对分子质量集中在500~1000的61条肽序列作为候选肽库,分子对接筛选出3条潜在的酪氨酸酶抑制肽,其主要通过氢键与酪氨酸酶活性中心及其以外的位点相结合,从而达到抑制其活性的作用。其中,Tyr-Pro-Asn-Pro-Tyr(YPNPY)对酪氨酸酶抑制作用最强,IC_(50)为(0.545±0.028)mmol/L,主要抑制类型为竞争型抑制。【结论】三角帆蚌珍珠层活性肽具有良好的清除自由基和酪氨酸酶抑制活性。

一种植物蛋白复合肽盐的工艺研究

食盐与我们的日常生活密切相关,但如果摄入过多食盐,会导致体内钠离子积累过多,进而引发一系列的疾病。该研究在以谷朊粉为原料制得咸味肽的基础上,以感官评分、色差值、水分、乳化性和乳化稳定性为指标,对氯化钾、酵母提取物和柠檬粉的添加量进行单因素试验,并利用响应面试验优化肽盐的配方。结果表明,在氯化钾为0.4 g、酵母提取物为0.2 g、柠檬粉为0.3 g的条件下,复合肽盐中多肽含量为11.4 mg/g,钠离子含量为0.35 g/100 g,钾离子含量为1.181 g/100 g,且添加酵母提取物和柠檬粉掩盖了肽盐的不良气味,外观呈浅黄色;减少了生活中钠的摄入量,得到低钠、减盐不减咸的调味品。

食品加工、贮藏对乳杆菌源抗菌肽抑菌活性的影响及安全性评价

为明确乳杆菌源抗菌肽粗提粉在食品加工、贮藏过程中的应用,先测定其抑菌谱,然后以白假丝酵母菌为指示菌,从最低抑菌浓度(MIC)、温度、pH、盐浓度、反复冻融以及贮藏时间等方面对粗提粉进行相对抑菌活性评估,然后进行安全性评价。结果表明,乳杆菌源抗菌肽粗提粉具有广谱抑菌性;其热稳定性良好,121℃处理20 min仍可保持79.68%的相对抑菌活性;在pH 2~6处理4 h后,可保持90%以上的相对抑菌活性,pH 10~12处理4 h后,几乎完全失活;盐的质量浓度达到0.8 mg/mL时,相对抑菌活性显著降低(P<0.05);在不同温度、不同贮藏时间,相对抑菌活性无显著变化(P>0.05);经-20℃反复冻融5次后的相对抑菌活性同样无显著性差异(P>0.05)。安全性评价证实粗提粉属无毒、安全级别。结论:乳杆菌源抗菌肽粗提粉稳定性好,适用范围广,可作为生物防腐剂应用于食品领域。

超声辅助酶解法制备小麦ACE抑制肽及其稳定性研究

以谷朊粉为原料,采用超声辅助酶解法制备小麦血管紧张素转换酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE)抑制肽,并以该抑制肽对ACE的抑制率为主要评价指标,以谷朊粉的水解度为次要评价指标,通过单因素试验结合响应面法对制备工艺进行优化,并研究该抑制肽的稳定性。结果表明:碱性蛋白酶是适宜酶解谷朊粉制备小麦ACE抑制肽的蛋白酶。最佳超声辅助酶解法制备小麦ACE抑制肽的条件为超声时间17 min、超声功率300 W、酶解温度60℃、酶解时间2.7 h、酶用量3600 U/g和谷朊粉质量分数5.1%,在此条件下,所制备的小麦ACE抑制肽对ACE的抑制率为72.90%,疏水性氨基酸含量为29.37 g/100 g。当该抑制肽的相对分子质量<3 kDa时,具有较好的强酸环境稳定性和热稳定性,在一定浓度K^(+)、Mg^(2+)环境中的稳定性也较好,且经体外模拟消化后仍能保持原活性的79.26%。因此,超声辅助酶解法是制备小麦ACE抑制肽的有效方法。

Effects of dairy bioactive peptides and lotus seeds/lily bulb powder on flavor and quality characteristics of goat milk yogurt

The objective of this study was to evaluate the changes on flavor and quality characteristics of goat yogurt during storage with the addition of dairy bioactive peptides and a mixture of lotus seed and lily bulb powder.Both the addition of dairy bioactive peptides and lotus seeds/lily bulb powder resulted in a fermentation time reduction,water holding capacity(WHC)improvement,and inhibition of post-acidification of goat yogurt during storage.A total of 50 volatile flavor components were detected in the goat milk yogurt samples,and the addition of the above two supplements were shown to be effective in improving the flavor and the textural properties of the goat milk yogurt during storage.The group added with lotus seeds/lily bulb powder showed the best WHC and textural properties,followed by the group added with dairy bioactive peptides alone and the group with both added.The addition of both supplements was found to be useful in making up for the two defects of goat yogurt,prolonged fermentation and soft curds.Therefore,dairy bioactive peptides and lotus seeds/lily bulb powder are recommended to be added to goat yogurt as nutritional supplements.

全蛋粉发酵工艺优化及其在仔猪上的有效能值和回肠末端氨基酸消化率测定

研究选用枯草芽孢杆菌、德氏乳酸杆菌、酵母菌、木瓜蛋白酶和脂肪酶为菌接种剂和酶添加剂,利用菌酶协同发酵技术对全蛋粉进行发酵,以增加发酵蛋粉中小肽含量为优化目标,通过响应面优化发酵参数;并检测发酵蛋粉在仔猪中的有效能值(消化能、代谢能)和回肠末端氨基酸消化率(表观回肠末端消化率和标准回肠末端消化率)。结果表明:经过响应面优化,发酵全蛋粉的最优条件为含水量65%,菌酶比例为5∶1,温度为38℃,时间为62h,此条件下发酵蛋粉小肽含量为15.09%。在仔猪中,发酵全蛋粉的消化能和代谢能分别为24.64 MJ/kg和23.88 MJ/kg,总能表观消化率为88.58%;表观和标准回肠末端粗蛋白消化率分别为75.87%和80.75%。综上所述,利用响应面优化全蛋粉菌酶协同发酵技术后,全蛋粉中的小肽含量有所提高,为发酵蛋粉在仔猪饲养中的应用提供了理论参考。

海参冻干粉和肽粉营养成分、体外抗氧化活性研究

【目的】比较海参冻干粉和肽粉的营养成分、抗氧化活性的差异。【方法】本研究以海参冻干粉和市售海参肽为研究对象,采用凯氏定氮法、国家标准GB/T 22492—2008的方法和苯酚-硫酸法对其蛋白质、多肽和总糖等基本营养成分进行分析,利用高效液相色谱进行分子量分布测定、单糖组成分析和氨基酸组成分析,并检测两者的体外抗氧化活性。【结果】海参冻干粉与肽粉的蛋白质含量分别为55.06%±0.58%和88.70%±0.63%,多肽含量分别为1.78%±0.08%和83.00%±0.23%,总糖含量分别为7.60%±0.23%和4.20%±0.17%,海参肽粉的蛋白质和多肽含量均明显高于海参冻干粉,总糖含量低于海参冻干粉。90%以上的海参肽粉分子量小于600 Da,分子量较小。海参体壁多糖的单糖由甘露糖、氨基葡萄糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖6种单糖组成,其中岩藻糖含量最高,占比67.06%;甘露糖含量最少,占比1.95%。海参肽粉的必需氨基酸和总氨基酸含量均高于海参冻干粉,说明海参肽粉氨基酸组成优于海参冻干粉。海参肽粉的DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、铁还原能力和超氧阴离子清除能力均高于海参冻干粉。【结论】海参肽粉的多肽含量、蛋白质含量、氨基酸组成明显优于海参冻干粉,分子量较小,且具有较强的体外抗氧化活性。【意义】本研究为海参肽粉功效产品的开发利用提供了参考依据。

脾氨肽冻干粉联合孟鲁司特钠对儿童反复呼吸道感染炎症指标及免疫功能的影响

目的探究脾氨肽冻干粉联合孟鲁司特对儿童反复呼吸道感染炎症指标及免疫功能的影响.方法选择该院2022年6月—2023年6月收治的70例反复呼吸道感染儿童为研究对象,按随机数字表法将其分为对照组与观察组,各35例.对照组患儿给予孟鲁司特钠治疗,观察组患儿给予孟鲁斯特钠联合脾氨肽冻干粉治疗.对比两组患儿的炎症指标、免疫功能和不良反应发生情况.结果治疗后,观察组血清淀粉样蛋白A、白细胞介素-6、降钙素原和C反应蛋白水平均低于对照组;观察组免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M均高于对照组;观察组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均高于对照组,CD8^(+)低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05).两组不良反应发生率对比,差异无统计学意义(P>0.05).结论脾氨肽冻干粉联合孟鲁司特钠用于反复呼吸道感染儿童中可减轻其机体炎症反应,改善T细胞亚群及免疫球蛋白因子水平,进而提高患儿免疫功能,安全性良好.

小麦低聚肽粉中谷氨酰胺含量测定方法及其临床应用前景

采用BTI-AQC二步柱前衍生法建立了一种有效检测小麦低聚肽粉中谷氨酰胺含量的方法。该方法在2～100μmol/L谷氨酰胺浓度内有很好的线性关系(r^2=0.999 9),最低检出限为2μmol/L,所有标准品3次重复的衍生峰面积相对标准偏差RSD均<1%,最适条件下标准二肽AQ(Ala-Gln)的检测回收率为(95.94±0.22)%。该方法检测小麦低聚肽粉中Gln含量为(23.54±0.49)%,远高于其他常见食源性低聚肽类产品。测定结果显示,除具有高的谷氨酰胺含量外,小麦低聚肽粉还具有水溶性好、稳定性强、易于消化吸收、蛋白含量高、氨基酸组成均衡等优势。

海藻粉和抗菌肽及其协同效应对蛋鸡生产性能与蛋品质的影响

本试验旨在探讨海藻粉和抗菌肽及其协同效应对蛋鸡生产性能与蛋品质的影响。采用4×2(海藻粉×抗菌肽预混剂)完全随机试验设计,将480只海兰褐蛋鸡随机分为8个组,每组5个重复,每个重复12只。饲粮海藻粉的添加水平分别为0、1.0%、3.0%、5.0%,抗菌肽预混剂的添加水平分别为300、600 mg/kg。预试期7 d,正试期28 d。结果表明:1)饲粮添加海藻粉显著提高了产蛋率、蛋料比、蛋黄颜色和蛋壳强度(P<0.05)。2)饲粮添加抗菌肽显著提高了产蛋率和蛋壳强度(P<0.05)。3)海藻粉和抗菌肽协同效应显著提高了产蛋率、蛋料比、蛋黄颜色和蛋壳强度(P<0.05)。由此可见,海藻粉和抗菌肽对蛋鸡生产性能与蛋品质的影响存在协同效应,以5%海藻粉+300 mg/kg抗菌肽最为理想。

暹罗鳄多肽粉的生物效应研究

在获得暹罗鳄(Crocodylus siamensis)多肽粉的基础上,进一步研究了暹罗鳄多肽粉对羟基自由基(.OH)、超氧阴离子自由基(O2-.)和1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH)的清除作用以及总还原力,以揭示其抗氧化能力.同时研究了暹罗鳄多肽粉对酪氨酸酶活性抑制作用.结果显示,暹罗鳄多肽粉具有较强的抗氧化、清除自由基作用,其总还原力与暹罗鳄多肽粉含量呈正相关,对.OH、O2-.和DPPH的半清除浓度HSC50分别为1.2,2.1和6.5mg/mL.暹罗鳄多肽粉对酪氨酸酶活力有明显的抑制作用,其IC50为6.60mg/mL.结果表明,暹罗鳄多肽粉具有一定的生物学功效,是一种天然的保健品.

纳豆菌发酵玉米蛋白粉制备玉米肽工艺优化

为了探索玉米肽的制备技术,以玉米蛋白粉为基质,应用纳豆菌发酵法制备玉米肽工艺进行了试验研究。分别对接种量体积分数、玉米蛋白粉质量分数、发酵温度、发酵时间进行了单因素试验研究,采用四因素三水平正交试验设计对玉米肽发酵工艺条件进行了优化,得到最优条件为:发酵温度40℃、发酵时间72 h、接种量体积分数4%、玉米蛋白粉质量分数5%。在此最优条件下发酵,玉米蛋白粉的水解度为11.17%,与理论预测值基本相符。

蜂蛹富肽蛋白粉对大鼠免疫功能和血糖、血脂的影响

选用50只3周龄SD大鼠随机分成两组,分别灌喂蜂蛹蛋白粉和经消化酶水解的蜂蛹蛋白即富肽蛋白粉4周。结果表明,灌喂富肽蛋白粉可显著增加大鼠血清IgG、IgA含量和脾脏指数(P<0.05),对大鼠血清IgM和胸腺指数的影响无统计学意义。灌喂富肽蛋白粉可极显著降低大鼠血糖(GLU)含量(P<0.01),显著提高血清甘油三酯(TG)、血清高密度胆固醇(HDL-C)含量,降低血清低密度胆固醇(LDL-C)含量(P<0.05),而对血清游离脂肪酸(FFA)和总胆固醇(TC)含量影响不显著。结果提示,富肽蛋白粉可增强大鼠的免疫功能、降低血糖,并能够预防和减轻动脉粥样硬化的发生。

奶粉中低聚肽质量浓度测定方法

以四肽Gly-Gly-Tyr-Arg为标样做标准曲线,用质量浓度为100g/L的三氯乙酸沉淀奶粉中的大分子蛋白质,经离心过滤后,在上清液中加入双缩脲试剂,于540nm下测定其OD值,查标准曲线计算出样品中的肽质量浓度。

暹罗鳄多肽粉对小鼠机体免疫力及抗疲劳效应的增强作用

为研究暹罗鳄(Crocodylus siamensis)多肽粉对小鼠免疫力及抗疲劳效应的影响,对小鼠的免疫力及相关血清指标、运动能力及相关酶活力指标进行了测定.实验结果显示:暹罗鳄多肽粉可以促进小鼠胸腺和脾脏的生长,增强机体免疫力.相对于对照组小鼠,暹罗鳄多肽粉组小鼠血清中的白蛋白、总蛋白、血钙含量升高(p<0.05),谷丙转氨酶活力和血糖浓度下降(p<0.05).小鼠爬杆及负重游泳实验发现服用了暹罗鳄多肽粉的小鼠垂直爬杆时间和负重游泳时间均长于对照组(p<0.05).进一步通过建立小鼠力竭游泳模型研究了暹罗鳄多肽粉的抗疲劳功效,结果显示与对照组相比,暹罗鳄多肽粉组小鼠血液中尿素氮和乳酸的含量以及乳酸脱氢酶活力均降低(p<0.05),而超氧化物歧化酶活力升高(p<0.05).综上结果表明暹罗鳄多肽粉可能有保肝降糖、增强机体免疫力及抗疲劳效应的作用.

甲鱼肽粉对小鼠免疫功能影响的研究

目的研究甲鱼肽粉对小鼠免疫力的影响。方法将200只雌性健康小鼠随机分为5个实验组,每组分为低、中、高和阴性对照组,连续灌胃给药30 d后对不同剂量组进行细胞免疫功能(Con A诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应)、体液免疫功能(抗体生成细胞检测、血清溶血素的测定)、单核-巨噬细胞功能(碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验)和NK细胞活性检测。结果甲鱼肽粉有促进小鼠迟发型变态反应的作用,能提高小鼠抗体生成细胞数和血清溶血素水平,增强小鼠NK细胞的活性。结论在本实验条件下,甲鱼肽粉对小鼠具有一定的免疫增强作用。

核桃蛋白(肽)粉生产工艺实践

以低温压榨后的核桃饼为原料,通过核桃蛋白(肽)粉制备中试生产线进行工艺实践,并给出了详细工艺参数。核桃饼经亚临界低温逆流萃取后,粕粉中残油为0. 92%,蛋白质含量为54%;经核桃蛋白(肽)粉制备工艺后,蛋白粉中蛋白质含量达80%,肽粉中酸溶性蛋白含量达75%;核桃蛋白粉得率为37%,肽粉得率为17. 5%,即每吨脱脂粕粉可获得核桃蛋白粉370 kg或肽粉175 kg;获得的核桃精炼油、蛋白粉、肽粉、酶解渣粉等可直接应用于功能性食品开发,实现了资源综合利用。

日粮添加海藻粉和抗菌肽对海兰褐蛋鸡产蛋性能的影响

采用4×2（海藻粉×抗菌肽）完全随机试验设计，研究日粮添加不同水平的海藻粉（0．0％、1．0％、3．0％、5．0％）和抗菌肽（300 mg/kg、600 mg/kg）对蛋鸡不同产蛋期（24～27周龄和28～31周龄）产蛋性能的影响。结果表明：（1）日粮海藻粉的添加水平显著提高了产蛋率和料蛋比（P＜0．05）。（2）抗菌肽添加水平在28～31周龄显著提高了产蛋率（P＜0．05）。（3）海藻粉和抗菌肽互作效应显著提高了产蛋率和料蛋比（P＜0．05）。结果提示，海藻粉和抗菌肽对蛋鸡产蛋性能的影响存在互作效应，以海藻粉5％、抗菌肽300 mg/kg水平组合最为理想。

微波干燥对生物解离富肽豆粉蛋白亚基及功能性的影响

以生物解离大豆水解液为研究对象,运用高效液相体积排阻色谱技术研究了不同微波干燥条件对富肽豆粉中蛋白类物质亚基组分和空间构象的变化规律,并对生物解离富肽豆粉的粉体性质及功能性质进行研究。结果表明,微波干燥条件对HPLC-SEC峰的强度影响明显,分子量18~44 ku的蛋白质水解物约占总蛋白质类的73.47%~89.36%,主要亚基成分为大豆球蛋白,这是由于不同微波干燥条件下的物相转换率和分子间碰撞机会不同,蛋白纤维化聚集形成的速度不同,从而对生物解离富肽豆粉分子量产生影响。此外,生物解离富肽豆粉的水溶性和分散性在不同微波干燥条件下具有相似趋势,这与粉体残余水分量、蛋白质分子运动剧烈程度、分子构象变化及分子聚集和解离相关。

栗蚕茧丝蛋白的氨基酸组成与含量测定

对栗蚕(Dictypoea japonica)丝粉、丝肽的氨基酸组成测定结果显示:栗蚕丝中含有人体所需的18种氨基酸和人体必需的8种氨基酸,属于全价蛋白质;丝粉中的天门冬氨酸、色氨酸、丙氨酸、丝氨酸、酪氨酸含量高于丝肽;芳香族氨基酸苯丙氨酸、色氨酸的含量以及长侧链氨基酸残基含量均高于大蚕蛾科的其它野蚕。分析氨基酸的组成认为,栗蚕丝粉不仅比其它野蚕丝粉具有更强的防止日光辐射的作用,而且具有更好的吸湿性,因而是一种优质营养性化妆品原料。