培养温度、时间对饲用凝结芽孢杆菌菌数的影响

研究采用平板计数法,评估了两个团体标准(T/YNBX 024—2021,简称“云南团标”;T/CSWSL 022—2020,简称“北京团标”)操作步骤中微生物的培养温度、培养时间对饲用凝结芽孢杆菌制剂的菌数检测结果的影响,旨在为确定饲用凝结芽孢杆菌制剂菌数检测的培养温度和时间提供参考。结果显示:无论采用云南团标、还是北京团标,在40℃/24 h“低温、短时”培养条件下,平板上无菌落生长,无菌数检出数据;50℃/24 h“高温、短时”培养的检出菌数显著高于40℃/48 h“低温、长时”(P<0.05),且50℃/24 h“高温、短时”与50℃/48 h“高温、长时”的检出菌数一致。本研究证明,平板计数法检测饲用凝结芽孢杆菌菌数受培养温度和时间影响,以培养温度为50℃、培养时间为24~48 h为宜。

基于损伤等效的直立锁边屋面板动态抗风揭试验方法

围护结构在台风等极端风下的抗风性能需要依靠动态试验测定,试验周期长导致成本高且模拟研究受限。基于直立锁边屋面板材料的损伤本构模型,通过疲劳分析研究荷载幅值对材料损伤影响,提出简化荷载序列组合。借助雨流计数法统计测点风压时程得到基于损伤等效的简化荷载循环,提出动态抗风揭试验方法。参照不同试验方法开展抗风揭试验,通过对比发现,试验方法对屋面板风揭破坏过程影响不明显。除永久塑性变形外,该文试验方法与现有试验方法下屋面板损坏现象基本一致,屋面板均为撕裂破坏。不同试验方法下屋面板承载力差异在10%~20%间。该文试验方法加载周期小于1h,现有试验方法加载周期则大于20h。在屋面板风揭破坏过程、承载力等抗风揭性能差异不大情况下,该文试验方法可大幅降低试验周期,为开展模拟研究奠定基础。

微量稀释联合平板计数法评价聚维酮碘抗菌活性及其影响因素

[目的]建立一种评价聚维酮碘抗菌效果的科学方法,并研究影响其抗菌能力的因素,为聚维酮碘防控水产细菌病提供参考。[方法]采用微量稀释联合平板计数法(包括标测法和模测法)测定了不同厂商和批次聚维酮碘的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,并评估了孵育温度、细菌浓度、培养基浓度、pH、货架期对聚维酮碘最小抑菌浓度的影响。[结果]标测法测得的聚维酮碘对4株渔源多重耐药菌的MIC(213~17g/m^(3))和MBC(216~19g/m^(3))是临床使用浓度的数万倍。模测法测得的聚维酮碘对MH可培养水生菌的MIC(27~11g/m^(3))和MBC(29~12g/m^(3))是临床使用浓度的数百到数千倍。试验体系的温度(5℃到35℃)越高、细菌浓度(103到108cfu/mL)越大、培养基浓度(0.082~21 g/L,MH)越大、pH(5.5到9.5)越高,聚维酮碘对细菌的MIC越大。聚维酮碘固态原粉货架期为18个月,而聚维酮碘溶液货架期约3个月。[结论]聚维酮碘对渔源致病菌和水生MH可培养菌的MIC远远高于临床使用浓度;水温、pH、培养基浓度、细菌浓度都影响抗菌活性;聚维酮碘固体稳定性远高于其水溶液。

测试片法检测食品中大肠菌群的验证评价

为探究大肠菌群测试片法在食品检测中的可行性,依据国际标准ISO 16140-2:2016中的性能指标验证要求,对MicroFast^(®)大肠菌群测试片法进行包容性、排他性,以及与国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》(GB 4789.3—2016)中方法的一致性验证,采用t-检验和Bland-Altman分析方法进行一致性分析评价。16株目标菌在测试片上形成典型菌落,24株非目标菌中的23株均未在测试片上形成菌落,阿巴特图巴沙门氏菌ATCC 35640在测试片上形成非典型菌落。测试片法和GB 4789.3—2016中方法的检测结果呈正相关(R^(2)>0.976);95%置信区间的样品比例为1∶25,满足不得高于1∶20的要求;所有食品类型的β-期望容忍区间(β-ETI)均在±0.5对数单位范围内,测试片法和GB 4789.3—2016方法具有很好的一致性。MicroFast^(®)大肠菌群测试片法对纯菌株的包容性和排他性良好,在一致性方面符合ISO 16140-2:2016对方法等效性的要求,可作为替代方法,用于检测食品中的大肠菌群。

饲用凝结芽孢杆菌的菌数检测方法研究进展

文章综述与分析了现有标准中饲用凝结芽孢杆菌产品的菌数检测法差异。基于实际生产与应用中单一及复合饲用凝结芽孢杆菌产品的两种类型,文章描述了现有两个团体标准T/YNBX024—2021(简称“云南团体标准”)和T/CSWSL 022—2020(简称“北京团体标准”)检测饲用凝结芽孢杆菌菌数的平板计数法检测程序,明确了饲用凝结芽孢杆菌产品菌数的检测结果应包括总菌数、芽孢数及杂菌数3个指标,重点比较了两个团体标准平板计数法的操作差异及其对产品菌数检测结果的影响,为现有饲用凝结芽孢杆菌菌数检测标准的更新及相关标准的制定提供科学依据。

基于平板计数的类球红细菌测量方法研究

类球红细菌是产辅酶Q10的主要微生物之一,定量检测类球红细菌活菌数对优化类球红细菌的发酵条件具有重要意义。通过对接种方式、接种量、培养基种类以及培养温度进行比较研究,对类球红细菌的平板计数法进行优化,并对优化后的平板计数法进行协同实验验证和不确定度分析。平板计数法最终优化结果为:接种方式为涂布法,接种量为50μL,培养基为营养琼脂,培养温度为32℃;该方法重复性和再现性均较好,室内重复性相对标准偏差为6.0%,室间相对标准偏差为16.4%。所优化方法的相对扩展不确定度为9.2%(k=2),适用于类球红细菌定量测量。

接种数量对细胞生长和药物作用的影响及细胞计数方法对比

以海拉细胞作为研究对象,对细胞数量差异引起的细胞生长速率变化以及对药物效果的影响展开研究。实验结果表明细胞起始数量越多,贴壁后密度越大,生长速率越快,并且药物对其生长的抑制作用越低。因此,准确地细胞计数是生物学实验的关键。比较了3种常用细胞计数方法:细胞计数板法、细胞计数仪法、流式细胞仪法,结果显示其线性相关系数R^(2)分别为0.983 5,0.999 7和0.996 0,同等条件下,细胞计数仪具有最高的准确性。同时也对结晶紫染色、底面积拍照、蛋白质含量估算和蛋白质内参GAPDH测量等间接方法进行评估,为生物学实验过程中的细胞数量测算提供数据参考。

平板计数法与纸片法检测食品微生物菌落总数的比较分析

做好食品安全检测对提高市场流通食品的安全性有着积极意义。在食品微生物菌落总数检测中,平板计数法与纸片法属于常用的分析方法。本文针对这2种方法的基础内容展开分析,利用相关的实验比较2种方法的优缺点,从而为食品检测体系的优化积累有效价值数据,加快完善检测体系。

基于ATP生物发光法的文物霉变检测与应用研究

为研究判定ATP(adenosine triphosphate,三磷酸腺苷)生物发光法在文物表面霉菌污染检测中应用可行性、科学性及适用性,利用ATP生物发光法对文物表面50种霉菌的生物发光值进行检测;构建了7种常见霉菌及其混合菌的菌落总数值与ATP生物发光值的线性关系函数,并在对应线性关系下分析了预测菌落总数值与实际值的差异;进一步利用ATP生物发光法评价模拟染霉试样在香茅醛熏蒸处理前后的霉菌数量变化。结果显示:50株待测霉菌中90%霉菌均检出了生物发光值(RLU)。在不同培养条件下,青霉、曲霉、木霉、毛壳菌、枝孢菌以及其混合菌的菌落总数对数值(lg^(CFU/mL))与生物发光对数值(lg^(RLU))之间均呈现了良好的线性关系,相关系数R^(2)>0.9817;在相应的线性关系下,预测的菌落总数值与实际平板计数的菌落总数值具有一致性(P<0.05),说明ATP生物发光法可以对文物表面霉菌进行准确相对定量。此外,香茅醛熏蒸处理组和对照组文物表面霉菌的生物发光值和菌落总数呈现了相同的差异变化趋势,说明ATP生物发光法可以直接用于熏蒸剂抑菌效力的评价。因此,ATP生物发光法在文物霉变检测中具有很高的适用性,同时在文物霉变程度分析及霉变文物消杀处理的效果评价等方面具有良好的应用价值,可为文物微生物病害的防控提供有效的技术支持。

壳聚糖创面敷料的微生物限度检验方法研究

目的通过对壳聚糖创面敷料的微生物限度检验方法进行方法适用性试验,为规范含壳聚糖创面敷料的微生物限度检验方法提供参考。方法采用《中华人民共和国药典(四部)》(2020年版)(通则1105)微生物计数法中的平皿法,分别对4种不同厂家壳聚糖创面敷料进行人工染菌的回收率测定,对其计数方法进行适用性试验。结果试验组2中除产品A2回收比值不符合要求外,其他3种产品的回收比值均在0.5~2.0,符合《中华人民共和国药典(四部)》(2020年版)(通则1105)要求。结论根据人工染菌的回收率可以判定,所建立的微生物限度检查方法可行,建议生产企业明确壳聚糖衍生物信息。

食品中蜡样芽孢杆菌检验方法验证结果分析

[目的]验证国标平板计数法、最大或然数(most probable numbe,MPN)计数法检测食品中蜡样芽孢杆菌的适用性。[方法]参照GB 4789.14—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》中平板计数法、MPN计数法检测样品中蜡样芽孢杆菌浓度,对比不同方法的检测结果。同时以蜡样芽孢杆菌为阳性对照,蕈状芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌为阴性对照,验证方法的特异性。[结果]该方法具有特异性,能够准确检出蜡样芽孢杆菌的计数,方法精密度和重复性好,回收率在84%~100%。[结论]2种方法均具有适用性和可操作性,均能达到标准方法要求的技术指标水平,检验结果准确可靠。

地下水中菌落总数测量不确定度的评定

目的:对地下水中菌落总数的测量不确定度进行分析评定。方法:根据HJ 1000-2018《水质细菌总数的测定平皿计数法》对地下水中菌落总数进行平板计数法的检测,按照《JJF 1059.1-2012测量不确定度评定与表示》中A类不确定度和B类不确定度进行菌落总数的评定。结果:某环境园地下水的扩展不确定度为0.0312,在95%置信区间内,菌落总数报告值的范围为2.3×10^(2)~2.6×10^(2)CFU/mL。结论:重复性引入的不确定度对于样品结果的影响大于样品移取和样品稀释过程引入的不确定度,但进行菌落总数不确定度评定时,应该全方面考虑各过程引入的不确定度。

食品中菌落总数与大肠菌群测定能力验证结果与分析

为了提高实验室菌落总数与大肠菌群检测能力,参加了2023年中国检验检疫科学研究院测试评价中心与一般财团法人日本食品检查协会联合组织的ACAS-PT1578(2023)中日联合微生物检测技能考核。依据《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》(GB 4789.2—2022)、《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》(GB 4789.3—2016)以及能力验证作业指导书要求进行样品检测,并采用不同方法进行结果比对。本次能力验证两项测定结果均为满意。其中,菌落总数测定|Z|值为0,大肠菌群计数|Z|值为0.2。通过参加能力验证为实验室出具数据结果的可靠性和有效性提供了客观证据,提升了检验人员的检测水平。

三种抗菌药物微生物限度检查方法学验证研究

目的:验证盐酸莫西沙星、诺氟沙星和阿奇霉素三种抗菌药物的微生物限度检查方法有效性。方法:分别使用平皿菌落计数法、洗脱法、薄膜过滤法对三种抗菌药物进行微生物限度检查,比较三种方法样品菌数检出和菌种回收率的差异。结果:薄膜法样品中菌数和回收率显著高于平皿菌落计数法和洗脱法。结论:薄膜法更适用于抗菌药物的微生物限度检查,结果更加可靠、准确。

不同加工类型样品大肠菌群检测方法选择研究

大肠菌群作为食品安全控制环节中重要指标之一,GB 4789.3—2016中提供了2种方法,分别为第一法(MPN法)与第二法(平板计数法),为研究不同类型样品最适宜的检测方法,将570份不同类型样本分别同时采用GB 4789.3—2016的第一法和第二法进行检测。结果表明,对于经过打磨、加热等破坏性生产加工的样品,第一法(MPN法)的检测灵敏度更高。对于未经打磨、加热等破坏性的样品,第一法(MPN法)与第二法(平板计数法)检测差异性不大。

3M菌落总数测试片的验收方法研究

目的研究3M菌落总数测试片的验收方法.方法参照标准GB 4789.28-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》,以金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌和枯草芽孢杆菌3种菌株为研究对象,分别用菌落总数测试片进行测定,定量法和半定量G值法对测定结果进行验收,同时与平板计数琼脂法结果进行对比.用平板倾注法和纸片法对质控样品进行菌落总数检测,并对结果进行分析.结果两种验收方法验收均为合格,质控样品评价结果为满意.结论3M菌落总数测试片可用于食品菌落总数的检测,可以缩短检测流程,提高工作效率.

TP法与CAP法测定食品微生物菌落总数的效果对比

目的:分析测试片法(Test Piece Method,TP)与计数琼脂平板法(Counting Agar Plate Method,CAP)测定食品微生物菌落总数的效果差异。方法:选取80份样品同时接受CAP法与TP法检测,对比两种检测方法对微生物菌落总数的检出率。结果:CAP法的检出总菌落数及超标率、检出大肠菌群落数及超标率、检出霉菌菌落数及超标率均高于TP法,但组间对比差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:在食品微生物菌落测定中,CAP法检出数量略高于TP法,但CAP法操作烦琐、影响结果的因素较多,TP法操作便捷、适用性广,因此在实际应用中可根据实验条件和需求灵活选择。

氧化还原电位对低煤阶煤生物甲烷生成的影响

氧化还原电位(Eh)是煤层生物甲烷生成的重要控制因素之一。为了解其对煤层生物甲烷产出的影响以及产甲烷的动力学过程,在实验室采用-102mV、-153mV、-208mV、-284mV、-315mV这5个氧化还原电位值,对河南义马低煤阶煤样品进行了生物甲烷模拟产出实验,采用气相色谱仪对不同反应阶段生成气体的成分及生成量进行检测,同时对菌种源中微生物进行培养计数。结果表明:①不同Eh条件下的实验均有甲烷的生成,氧化还原电位较低时产甲烷菌的繁殖更加快速,在-284mV时生物甲烷的浓度最大,-102mV时最小;②通过平板计数法,分析了产甲烷过程和细菌生长动力学机理——整个产甲烷生成过程也是微生物生长代谢的过程,间接证明了产气量大小变化的原因。结论认为,Eh对于煤层生物甲烷的生成具有重要的控制作用。

臭氧化山茶油对金黄色葡萄球菌的体外杀伤效果

目的:探寻油剂体外杀菌效果的检测方法,同时检测臭氧化山茶油对金黄色葡萄球菌的体外杀伤效果。方法:制备金黄色葡萄球菌悬液,采用三区划线法将金黄色葡萄球菌悬液接种于LB平板,培养过夜后选取21个直径相同的细菌单克隆,平均分为3组:对照组、基础油(山茶油)组、臭氧油(臭氧化山茶油)组。用无菌环隔离细菌单克隆,并给予臭氧油等处理,将平板正置培养过夜,次日挑取隔离培养的整个细菌单克隆于5 m L液体LB培基中培养12 h,然后采取平板计数法和比浊法检测菌液浓度,从而判断臭氧油的杀菌效果。结果:平板计数法和浊度法均显示,经臭氧油处理后的单克隆重悬培养后,菌液的细菌浓度显著低于对照组和基础油组(P<0.001)。结论:臭氧化山茶油对金黄色葡萄球菌有显著杀伤作用,单克隆菌落培养法检测油剂体外杀菌作用方法学可靠。

抑制大肠杆菌K88的益生菌体外筛选

本研究以从断奶仔猪肠道分离的益生菌为试验菌株,将大肠杆菌K88和益生菌接种到体外培养的猪小肠上皮细胞(intestinal porcine epithelial cell-1,IPEC-1)中,测定培养2.5h上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,同时将益生菌和大肠杆菌K88体外混合培养2.5h,进行平板计数,统计大肠杆菌K88菌数的变化,筛选出可以抑制大肠杆菌K88的益生菌。试验结果显示,干酪乳杆菌和凝结芽孢杆菌能显著降低IPEC-1培养上清液中的LDH活性(P<0.05),降低大肠杆菌K88对细胞的损伤;凝结芽孢杆菌能降低DMEM培养基中大肠杆菌K88的生长速度,结合模拟制粒过程及胃肠道环境的耐高温、耐酸及耐胆盐研究进行综合分析,该凝结芽胞杆菌对大肠杆菌K88有较好的抑制作用且具有良好的耐高温、耐酸及耐胆盐性能,具有作为微生态制剂菌株的应用潜力。本试验建立了能够抑制大肠杆菌K88的益生菌体外筛选技术模型。