表达血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的中国仓鼠卵巢细胞株研究模型的建立

本研究旨在建立表达重组野生型和突变型血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的中国仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary,CHO)细胞研究模型,为进行GPIb-Ⅸ生理功能的相关研究奠定基础。从表达野生型或缺失突变型GPIbα的大肠杆菌宿主菌中抽提质粒并用EcoRI酶切鉴定,然后将分别表达GPIbα、GPIbβ和GPIX3种基因的质粒共转染到中国仓鼠卵巢细胞中,通过免疫共沉淀、Western blot和流式细胞仪检测其表达效果。结果表明,转染48小时后,CHO细胞裂解物和细胞表面均可检测到GPIb-Ⅸ复合物的表达。结论:成功构建了表达血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的CHO细胞研究模型。

脑出血患者血小板CD42b,CD62p的表达与脑水肿形成的相关性(英文)

目的分析比较脑出血患者与健康人血小板CD42b,CD62p的表达差异及急性期脑出血患者血小板CD42b,CD62p的表达量与脑水肿体积的相关性,探讨急性期脑出血患者血小板表面糖蛋白CD42b,CD62p的表达及其与血肿周围脑水肿形成的关系。方法选自2002-01/08华中科技大学同济医学院附属同济医院神经科住院治疗的脑出血患者20例。健康者选自2002-01/08华中科技大学同济医学院附属同济医院神经科住院患者家属,共15例,利用流式细胞术(FCM)测定20例脑出血患者和15例健康人血小板CD42b和CD62p的表达,根据头颅CT测量脑出血患者血肿周围脑水肿带的大小,并对脑出血患者血小板CD42b和CD62p的表达与血肿周围脑水肿带的大小进行相关性分析。结果与健康人犤(9.7±1.1)%,(81.6±3.1)%犦比较,急性期脑出血患者血小板CD42b的表达(74.2±6.4)%减少,CD62p的表达(4.7±4.8)%增加(tCD42b=4.328,P<0.01;tCD62p=4.017,P<0.01);急性期脑出血患者血小板CD42b和CD62p表达量与血肿周围脑水肿带的大小有相关性(rCD42b=-0.489,P<0.05;rCD62p=0.646,P<0.01)。结论脑出血急性期血小板活化,活化的血小板参与了血肿周围脑水肿形成这一病理损伤过程。

CD42b、CD62p、hsCRP和Hcy与AMI患者冠脉病变程度的关系及对预后的预测价值

目的:分析CD42b、CD62p、hsCRP和Hcy与AMI患者冠脉病变程度的关系及对预后的预测价值。方法:根据SYNTAX评分,242例行PCI的AMI患者被分为低分组(65例,≤20分)、中分组(106例,21分~31分)和高分组(71例,≥32分),比较各组血浆CD42b、CD62p、hsCRP和Hcy水平。Pearson相关分析上述指标与SYNTAX评分的相关性;比较各组MACCE发生率;以ROC曲线分析上述指标对MACCE的预测价值。结果:与低分组比较,中分、高分组血浆CD42b水平[(87.71±5.94)比(68.93±3.45)比(55.54±4.31)]显著降低,血浆CD62p[(21.63±3.29)比(27.47±3.01)比(37.81±3.78)]和Hcy[(13.14±1.60)μmol/L比(17.31±1.93)μmol/L比(22.30±2.73)μmol/L]水平显著升高,P均=0.001。Pearson相关分析显示血浆CD42b水平与AMI患者SYNTAX评分显著负相关(r=-0.885,P=0.001),血浆CD62p和Hcy水平与SYNTAX评分显著正相关(r=0.799,0.801,P均=0.001)。与低分、中分组比较,高分组MACCE发生率(9.23%、18.87%比35.21%)显著升高,P=0.001,0.014。ROC曲线显示血浆CD42b、CD62p和Hcy预测AMI患者发生MACCE的最佳截断值分别为69.72、28.33和20.77μmol/L,灵敏度分别为64.7%、73.1%和75.2%,特异度分别为69.3%、80.5%和63.8%。结论:血浆CD42b水平和AMI患者SYNTAX评分显著负相关,CD62p及Hcy水平与SYNTAX评分显著正相关,且对预后MACCE事件有一定的预测价值。

血管性血友病因子和血小板表面受体突变的数据库构建及数据分析

背景:血管性血友病因子和血小板表面受体之间的相互作用在血小板黏附、传播、聚集等血栓形成过程中起到关键作用。目前关于血管性血友病因子突变信息的数据库并不完善且血小板表面受体相关的数据库仍未构建。目的:致力于构建血管性血友病因子及血小板糖蛋白Ibα相关突变的数据库,以利于相关领域的研究人员快速查找到该分子对的重要突变信息。方法:以数据库Uniprot、VWFdb及文献报道的突变信息为数据源,采用MySQL和Apache为后台数据库和服务器,运用PHP语言开发血管性血友病因子及血小板糖蛋白Ibα突变数据库。结果与结论:收集了341条血管性血友病因子,13条血小板糖蛋白Ibα的野生或者突变序列数据,并人工构建A1结构域的虚拟突变3 920条,建立了包括背景介绍、相关病理图册和资料下载等登录页面,初步实现了数据检索、突变位点分析以及虚拟突变位点信息等相关功能。该数据库较全面搜集及分析血管性血友病因子及血小板糖蛋白Ibα的数据信息,有利于研究人员对血管性血友病因子和血小板糖蛋白Ibα相关信息的查询,有助于新型抗血栓药物的研发,进一步提高临床诊断和治疗水平。

抗血小板膜糖蛋白Ibα胞内段多肽多克隆抗体的制备及初步应用

目的制备兔抗人血小板膜糖蛋白（GP）IbαC端557～561氨基酸序列多肽的多克隆抗体，并初步用于人血小板GPIbαC端559位丝氨酸磷酸化状态的检测。方法应用化学方法合成C—R—G-S—L-P（559位丝氨酸非磷酸化，Ser559）和C—R—G—S（P）-L-P（559位丝氨酸磷酸化，pSer559）多肽。将2种多肽分别与钥孔蜮血蓝蛋白交联后，以皮下注射法分别免疫新西兰大白兔，分离获得2种抗血清（抗Ser559多抗和抗pSer559多抗）。应用斑点印迹和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对抗血清进行鉴定并检测效价。从人血小板裂解液中分离纯化血小板GPIbα，利用抗Ser559多抗和抗pSer559多抗、采用ELISA方法检测人血小板GPIbαC端559位丝氨酸磷酸化状况。结果所制备的2种多抗分别特异性识别各自抗原，效价分别为1：32000和1：64000。2种多抗均可与纯化的人血小板GPIbα特异结合，表明人血小板GPIbα559位点丝氨酸存在磷酸化与非磷酸化两种状态。结论应用人工合成多肽成功制备出2种可特异性识别丝氨酸磷酸化状态的兔抗人血小板GPIbα胞内段多肽多抗，并证明人血小板GPIbcαC端559位丝氨酸存在磷酸化状态。