Response Surface Optimized Extraction of Flavonoids from Cacumen platycladi and Antioxidant Activities In vitro

[Objectives]To explore the optimal extraction process and the antioxidant activity of flavonoidsof Cacumen platycladi. [Methods]FCPwas obtained from C. platycladi by a new set extraction process of microwave-assisted extraction,freeze thawing,superfine crushingand freeze drying technology and purification. On the basis of single-factor tests,the quadratic regression parasitism model was established by the extraction amount of total flavonoids with microwave power,alcohol concentration,and liquid-to-solid ratio through the response surface methodology. [Results] The optimal extraction conditions were microwave power of 757 W,alcohol concentration of 69%,liquid-to-solid ratio of21∶ 1,with the optimal extraction yield of 15. 302 9 mg/g. Under the real conditions( microwave power of 800 W,alcohol concentration of69%,liquid-to-solid ratio of 21∶ 1) in our laboratory,the maximum yield of total flavonoids was 15. 9 mg/g,the results fitwell with the prediction of quadratic regression parasitism model. The good antioxidant activity has been determined byscavenging effect of FCP on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl( DPPH) radical and superoxide anion free radical with the scavenging yield of 70. 2% and 68. 8% respectively. [Conclusions]All results established a good foundation for furtherdevelopment of C. platycladi products.

侧柏叶的药效成分和分析方法研究进展

总结了侧柏叶及其炮制品的药效成分和分析方法。侧柏叶中的黄酮类、萜类和挥发油可能是其生发作用的物质基础,黄酮类成分可能是其止血作用的药效成分。侧柏叶的分析方法有液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、气相色谱-质谱联用法、毛细管电泳法和薄层色谱法。后续建议继续深入研究侧柏叶的药效成分,并在此基础上选用合适的分析方法对其质量进行评价。

基于HPLC研究柏子仁中黄曲霉毒素的污染状况与风险分析

目的基于HPLC研究柏子仁中4种黄曲霉毒素的污染情况,并进行风险分析,评估柏子仁的用药安全。方法采用Agilent Eclipse Plus C 18(4.6×250 mm 5μm)为色谱柱,柱后光化学衍生法检测,以甲醇∶乙腈∶水(35∶10∶55)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1);柱温:40℃;荧光检测器检测。结果黄曲霉毒素B 1、B 2、G 1、G 2分别在0.35~20.8μg·L^(-1)、0.13~7.6μg·L^(-1)、0.36~21.6μg·L^(-1)、0.13~7.6μg·L^(-1)范围内呈良好的线性关系,黄曲霉毒素B 1、B 2、G 1、G 2平均回收率分别为90.6%、83.46%、87.84%、86.58%,相对偏差分别为2.9%、3.6%、3.6%、4.7%。23批柏子仁中有14批检出黄曲霉毒素B 1和总量,残留量分别在1~4μg·kg^(-1)和1~5μg·kg^(-1)之间,均符合规定,但检出率高达61%,存在安全隐患。结论该方法简单、准确、方便,能有效评价柏子仁中黄曲霉毒素的污染情况。警示柏子仁易受黄曲霉毒素的污染,需加强柏子仁监管力度和不定期的专项抽检,降低安全风险,以确保临床用药安全。

响应面法优化水蒸气提取侧柏叶精油工艺研究

侧柏叶(Platycladi Cacumen)为中药材,其精油对多种腐败菌和致病菌均具有抗菌活性,有望作为天然抗菌剂应用于食品工业和医药领域。为寻找侧柏叶精油最佳提取工艺,为今后的开发利用提供科学依据,采用水蒸气蒸馏法提取侧柏叶精油,并结合单因素试验和响应面法优化提取工艺。结果表明:各参数对于侧柏叶精油提取率的影响比较为:蒸馏时间>NaCl浓度>液料比。在考虑经济可行性条件下,最佳提取条件为NaCl浓度2.3%、料液比1:8.0 g/mL、蒸馏时间2.0 h,实际提取率为1.22%。

基于HPLC指纹图谱结合化学模式识别评价侧柏叶的质量

目的 建立不同产地侧柏叶的HPLC指纹图谱,并采用化学模式识别评价侧柏叶质量。方法 采用HPLC法。以ZORBAX Eclipse plus-C18为色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:254 nm。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)建立24批侧柏叶HPLC指纹图谱并进行相似度评价,结合混合对照品图谱确定共有峰。采用SPSS 25.0软件进行聚类分析。采用Simca-P软件进行主成分分析和偏最小二乘法-判别分析,并筛选影响侧柏叶质量的差异性成分。结果 侧柏叶指纹图谱中共有13个共有峰,与对照指纹图谱相比,除S2一批外,其余23批药材的相似度均高于0.92。并指认了杨梅苷、槲皮苷、异槲皮苷、穗花双黄酮4个共有峰。聚类分析结果显示24批药材聚为两类,S1、S3-S24聚为一类,同一产地的药材有较大差异,不同产地药材也有相似性;S2聚为一类为圆柏叶。主成分分析结果表明6类主成分的累计方差贡献率为88.412%,可以反映原始色谱峰大部分信息。偏最小二乘法判别分析筛选出5种成分,是24批药材产生质量差异的标志性成分。结论 所建HPLC指纹图谱方法操作简便、准确,结合化学模式识别可用于侧柏叶的质量控制。峰8等5个成分为影响侧柏叶质量的差异性成分。

侧柏叶抗红色毛癣菌主要活性成分α-蒎烯以ERG-3为靶点发挥抗真菌作用

红色毛癣菌(Trichophyton rubrum,T.rubrum)是皮肤癣最主要病原;侧柏叶(Cacumen Platycladi)是侧柏[Platycladus orientali s(L.)Franco]的干燥嫩枝梢及叶,被《苗族医学》收录用于治疗皮肤癣。本研究旨在探讨侧柏叶抗T.rubrum的主要活性物质及其抗真菌机制,为抗皮肤癣新药研发提供帮助。本研究通过测定最小抑菌浓度和孢子萌发率分析了侧柏叶活性物质对T.rubrum的抑菌活性,使用电镜观察T.rubrum菌丝形态和孢子超微结构,并检测侧柏叶活性物质对T.rubrum细胞膜通透性、完整性和麦角甾醇含量的影响,从而阐述侧柏叶活性物质对T.rubrum抑菌机理,最后采用GC-MS和qRT-PCR方法找到其抗T.rubrum的作用靶点。结果显示,侧柏叶石油醚部位的α-蒎烯为主要抗菌活性成分,MIC为32μg·mL^(-1),极显著抑制孢子萌发(P<0.01);α-蒎烯可致细胞膜发生明显损伤和内容物流出、通透性极显著增加(P<0.01)以及24 h内细胞膜中麦角甾醇和24(28)脱氢麦角甾醇含量显著下降(P<0.05);引起脂质色谱图中ERG3活性抑制相关的“麦角甾烷-7,24-二烯-3β-醇”色谱峰出现;可极显著降低ERG3的相对表达量(P<0.01)。结果表明,α-蒎烯是侧柏叶中发挥抗T.rubrum活性最主要成分且以ERG3为其抗真菌靶点。

基于网络药理学探究“酸枣仁-柏子仁”药对治疗失眠的作用机制

目的:通过网络药理学方法探讨“酸枣仁-柏子仁”药对治疗失眠(insomnia)的作用机制。方法:基于中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)检索酸枣仁、柏子仁的活性成分及相关靶点。在GeneCards数据库和在线人类孟德尔遗传数据库(online mendelian inheritance in man,OMIM)中检索失眠相关靶点。通过在线软件Venn 2.1.0将失眠相关靶点与“酸枣仁-柏子仁”活性成分相关靶点取交集,即为“酸枣仁-柏子仁”治疗失眠的潜在靶点,绘制韦恩图,并利用Cytoscape 3.8.2软件构建“中药-活性成分-疾病靶点”网络。将潜在靶点导入STRING平台,得到潜在靶点蛋白的互作关系,利用Cytoscape 3.8.2软件构建PPI网络图,并使用“Network Analyzer”插件进行拓扑分析筛选核心靶点。将潜在靶点导入David 6.8数据库进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路富集分析。结果:在TCMSP数据库中检索得到酸枣仁活性成分9个、柏子仁活性成分5个,相关靶点53个。在GeneCards数据库和OMIM数据库获得失眠相关靶点2 930个。通过在线软件Venn 2.1.0将失眠相关靶点与“酸枣仁-柏子仁”活性成分相关靶点取交集,得到23个“酸枣仁-柏子仁”治疗失眠的潜在靶点。“中药-活性成分-疾病靶点”网络拓扑分析得到关键活性成分为(S)-衡州乌药碱[(S)-coclaurine]、花生四烯酸(arachidonic acid)及酸李碱(zizyphusine)。PPI网络拓扑分析得到SLC6A4、SLC6A3、CASP3、SLC6A2、ADRA1B、PPARG、NOS3可能为“酸枣仁-柏子仁”治疗失眠的核心靶点基因。GO功能富集分析得到生物学过程57个,细胞组成8个,分子功能16个。KEGG信号通路富集分析得到15条信号通路。结论:“酸枣仁-柏子仁”药对可通过多成分、多靶点、多层次发挥对失眠的治疗作用。

不同贮藏温度对北京地区市售柏子仁黄曲霉毒素B_(1)含量的影响

目的测定北京地区市售柏子仁黄曲霉菌毒素B1(AFB_(1))的含量,并阐明不同贮藏温度对柏子仁AFB_(1)含量的影响。方法采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法,Acquity UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm×1.7μm)色谱柱,以甲醇-10 mmol/L醋酸铵溶液为流动相,梯度洗脱,电喷雾离子源,正离子采集模式进行检测。测定柏子仁样品中AFB_(1)初始含量,并对其在不同温度(28℃、4℃、-18℃)下贮藏90 d内的含量进行不完全统计。结果8个批次柏子仁药材AFB_(1)的初始含量均未超标。柏子仁的较优储存温度为-18℃,4℃次之。-18℃贮藏90 d时,样品中AFB_(1)含量均不超标;4℃贮藏90 d时,其不合格率为25%。28℃不适宜柏子仁药材的贮藏,此温度下其AFB_(1)的不合格率最高。结论控制贮藏温度在4℃及-18℃,可减缓柏子仁AFB_(1)的产生,确保临床用药安全。

柏子仁、佛手联合治疗便秘型肠易激综合征作用机制研究

目的建立便秘型肠易激综合征大鼠模型,研究佛手、柏子仁单独用药与联合用药治疗便秘型肠易激综合征的效果与作用机制。方法冰水灌胃、限制饮水结合慢性束缚应激法制备大鼠便秘模型,造模成功后随机分为阳性对照组、佛手组、柏子仁组、联合用药组,另设空白对照组,10只/组,灌胃用药21 d后,观察大鼠体质量;胃动素(MOT)、血浆中P物质(SP)、血管活性肽(VIP)水平;小肠运动功能;MC计数、MC脱颗粒百分比情况。结果与阳性对照组相比,三种用药方式均能提高大鼠体质量;血浆MOT、VIP、SP水平、小肠墨汁推进率、MC计数、MC脱颗粒百分比均有显著变化(P<0.05);联合组VIP水平、MC计数两个指标优于单独用药组(P<0.05)。结论佛手、柏子仁对便秘型肠易激综合征大鼠均有治疗作用,联合用药的治疗效果最佳,能够同时调节大鼠的神经和体液,恢复小肠运动功能。

侧柏叶标准汤剂制备及质量标准研究

目的:参照《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》,对15批侧柏叶饮片进行标准汤剂制备,建立特征图谱,并测定其槲皮苷含量,提供一种可靠的评价侧柏叶标准汤剂质量的方法。方法:以槲皮苷为含量指标成分,分别对15批不同产地的侧柏叶饮片标准汤剂进行测定,计算转移率和出膏率,建立高效液相特征图谱方法,同时采用液质联用技术对共有峰进行指认。结果:15批侧柏叶标准汤剂出膏范围为10.51%~20.35%,平均值为16.08%;槲皮苷含量范围为0.69%~1.12%,平均值为0.91%;槲皮苷转移率的分布范围为51.11%~67.16%,平均值为57.67%。特征图谱呈现13个特征峰,其中10个共有峰被指认,与对照特征图谱相比,侧柏叶标准汤剂的相似度均大于0.90。结论:侧柏叶饮片标准汤剂制备规范,槲皮苷含量测定与特征图谱方法可靠、准确性和重现性好,可评价侧柏叶标准汤剂的质量,也可以评价侧柏叶配方颗粒的质量。

柏子仁皂苷和柏子仁油改善睡眠作用的研究

目的通过观察柏子仁皂苷和柏子仁油对小鼠阈下催眠小鼠只数和睡眠时间的影响,考察两柏子仁成分的药效学作用。方法18－22 g昆明种小鼠,按体重、性别均衡随机分为空白对照组,柏子仁皂苷高、中、低剂量组,柏子仁油高、中、低剂量组,共7组。连续给药10 d观察小鼠入睡只数、阈下剂量催眠时间,计算各组小鼠睡眠延长时间。结果柏子仁皂苷高剂量组入睡小鼠只数明显增多,中低剂量不明显。柏子仁油三个剂量组均能不同程度地增加小鼠睡眠只数,其中低剂量组作用明显,高、中剂量组作用相当。柏子仁皂苷高剂量组能明显延长小鼠睡眠时间,中、低剂量组作用相对较弱。柏子仁油低剂量组能明显延长小鼠睡眠时间,高、中剂量组作用相对较弱。结论柏子仁皂苷和柏子仁油均具有镇静催眠作用,柏子仁皂苷作用在一定范围内随剂量增加镇静催眠作用加强,柏子仁油镇静催眠作用在较低浓度时作用增强,在一定范围内又随浓度的增高而药效学作用降低。

侧柏叶红外指纹图谱共有峰率和变异峰率双指标序列分析法

利用共有峰率和变异峰率两个指标,以不同侧柏叶样品的红外指纹图谱为标准,计算出所测样品相对于标准品的共有峰率和变异峰率。按照共有峰率的大小,建立了不同的共有峰率和变异峰率双指标序列方法。分析结果显示,产地相同或相近的G1与G8之间、G4与G2G6之间有很高的共有峰率(均≥90.0%)和很低的变异峰率(均≤11.1%);相近产地不同年份的G10与G3G4、G5之间共有峰率均<50%、变异峰率均>50%;产地相距较远的G2与G7的共有峰率<50%、变异峰率>50%。该方法可以准确地区分不同产地、批次的侧柏叶。利用共有峰率和变异峰率双指标序列分析法可以对两个或多个中药样品进行方便可靠的鉴别,克服了多种中药鉴别方法只能进行真伪鉴别、产地鉴别的局限性,为中药质量的准确评价提供了一种新方法。

侧柏叶及其水煎液HPLC特征图谱的相关性研究

目的比较侧柏叶药材及其水煎液高效液相色谱(HPLC)特征图谱的差异,探讨其特征图谱的相关性。方法采用Zorbax SB-Aq C18色谱柱;流动相为乙腈-磷酸溶液(体积分数为0.1%),梯度洗脱;检测波长为254 nm;柱温为40℃;流速为1.0 mL·min-1。结果侧柏叶药材标示出22个共有特征峰,水煎液标示出药材的16个特征峰,鉴别了5个黄酮类特征峰(杨梅苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素、穗花杉双黄酮)。分别以10批药材及其水煎液特征图谱生成的共有模式为对照,各批次药材及其水煎液的相似度分别大于0.99和0.90。同批次药材及其水煎液特征图谱之间的相似度,有7批大于0.95,3批低于0.90。结论水煎煮方式能大部分提取侧柏叶的主要特征成分。本研究为侧柏叶粉末及含侧柏叶复方粉末水煎液外用的物质基础研究提供了一定的依据。

侧柏叶不同炮制品中槲皮苷与槲皮素的含量测定

目的以槲皮苷、槲皮素含量为指标,考察不同炮制方法对侧柏叶止血成分含量的影响。方法采用RP-HPLC法测定不同炮制品中槲皮苷、槲皮素的含量,色谱柱为Lichrospher C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液(38∶10∶52);流速1.0 ml.min-1;检测波长254 nm;柱温25℃。结果不同炮制品中槲皮苷、槲皮素的含量有显著差异,槲皮苷的含量以生品最高,炭品最低;槲皮素的含量变化为:炒炭品(炒焦品,其它炮制品未检出槲皮素。结论随着炮制温度的升高,槲皮苷的含量逐渐减少;炒炭后止血作用增强,推测与炭品中槲皮苷部分分解生成槲皮素有关。

柏子仁中改善睡眠有效成分的研究

柏子仁具有改善睡眠功效,通过对其有效成分的提取、分离及纯化,得到柏子仁脂肪油、柏子仁挥发油以及柏子仁甙三种成分。按照国标改善睡眠功能检验标准方法,采用高、中、低三个剂量组分别进行改善睡眠功能实验,研究结果表明三种成分均有改善动物睡眠的功效(与正常对照组相比,p<0.05)。

HPLC法同时测定侧柏叶中杨梅苷等4种黄酮的含量

目的建立同时测定侧柏叶中杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮含量的方法，为侧柏叶的质量控制和开发利用提供依据。方法采用HPLC法。色谱柱为WatersODSC18柱（150mm×4．6mm,5μm），流动相为甲醇-体积分数为0．5％乙酸溶液，梯度洗脱，流速为0．8mL·min-1，检测波长为340nm，柱温为室温。结果杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮质量浓度分别在61．2-122．4mg·L-1（r=0．9998）、10．56—211．2mg·L-1（r=0．9998）、2．85～57．0mg·L-1（r=0．9999）和7．54—150．8mg·L-1（r=0．9998）内与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为97．0％（RSD=2．5％）、97．1％（RSD=2．3％）、96．8％（RSD=2．1％）和97．4％（RSD=3．4％）。结论此法操作简便、快速、灵敏、准确，样品处理简便易行，适于侧柏叶的质量控制。

柏子仁总萜类成分药理活性及提取工艺研究

目的探讨从柏子仁中提取总萜类成分的最佳工艺及总萜类成分的镇静、催眠和耐缺氧作用。方法以均质时间、温度、料液比和次数4个因素进行考察,每个因素3个水平,采用L9(34)正交试验优选提取工艺。观察柏子仁总萜类成分对小鼠自发活动、戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间和睡眠个数及缺氧小鼠存活时间的影响。结果以甲醇溶液作为提取溶剂,提取温度80℃,料液比1∶10,均质10 min,均质提取1次为最佳提取工艺;总萜类成分能抑制小鼠的自发活动,延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间,增加小鼠睡眠个数,延长缺氧小鼠的存活时间。结论柏子仁总萜类成分具有镇静、催眠和耐缺氧作用;提取方法应用均质法操作简单、效率高,适用于柏子仁总萜类成分的提取。

大孔吸附树脂纯化侧柏叶总黄酮的工艺研究

目的研究AB-8型大孔树脂精制侧柏叶总黄酮的工艺条件。方法以总黄酮、槲皮苷含量结合指纹图谱主要特征峰面积保留率为考察指标;采用可见分光光度法测定总黄酮含量,HPLC法测定槲皮苷含量,HPLC法分析指纹图谱主要特征峰面积。结果AB-8型大孔吸附树脂纯化效果较好,最佳工艺条件为:上样液浓度为含生药量0.20g·mL-1,上样量为每1mL湿树脂上样0.375g生药,吸附速率为1mL·min-1,洗脱液为4倍柱体积的70%乙醇,洗脱速率为2mL·min-1;树脂经95%乙醇和1moL·L-1氢氧化钠溶液再生后,可重复使用3次。总黄酮与槲皮苷的保留率达70%、95%以上,峰1～3的保留率达90%以上,纯化后总黄酮及槲皮苷的含量分别提高了2.48倍和3.29倍。结论AB-8型大孔吸附树脂能较好地纯化富集侧柏叶总黄酮。

侧柏叶HPLC指纹图谱的方法学研究

目的:建立侧柏叶的指纹图谱分析方法,评价侧柏叶药材质量,同时为双柏制剂质量控制提供参考。方法:采用HPLC法测定,色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸(梯度洗脱);检测波长为254nm;流速为1mL/min;柱温为40℃。结果:14批侧柏叶共标示出11个共有峰与对照品比较,共有峰中检出槲皮苷和槲皮素。结论:方法准确可靠,重复性好,为侧柏叶药材及其制剂质量控制提供了依据。

新疆地产侧柏叶挥发油成分的气相色谱-质谱联用

目的用气相色谱-质谱联用(GC-MS)法对新疆地产侧柏叶挥发油成分进行分析。方法采用水蒸气蒸馏法从侧柏叶中提取挥发油,用GC-MS法对挥发油成分进行鉴别,采用归一化法确定其相对含量。结果共鉴定了33个成分,占挥发油总量的93.87%。结论为新疆产侧柏的开发利用提供依据。