肝细胞癌组织中PLAGL2和SNX5的表达及临床预后价值研究

目的探讨肝细胞癌(HCC)中多形性腺瘤基因样蛋白2(PLAGL2)和分拣微管连接蛋白5(SNX5)的表达及临床预后价值。方法回顾性选取2019年2月至2020年2月在山西医科大学附属忻州医院接受治疗的92例HCC患者为研究对象。采用免疫组化法检测HCC组织和癌旁组织中PLAGL2、SNX5表达情况。绘制Kaplan-Meier生存曲线,采用log-rank检验比较PLAGL2、SNX5阳性和阴性患者3年累积生存率。采用单因素和多因素Cox回归分析影响HCC预后的独立危险因素。结果HCC组织中PLAGL2和SNX5阳性率分别为78.26%(72/92)和76.09%(70/92),高于癌旁组织的6.52%(6/92)和4.35%(4/92),差异均有统计学意义(均P<0.01)。肿瘤最大径>5 cm、TNM分期Ⅲ期的患者PLAGL2和SNX5阳性率分别高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤最大径≤5 cm的患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。PPLAGL2阳性患者3年累积生存率为51.39%(37/72),低于PLAGL2阴性患者的80.00%(16/20),差异有统计学意义(P=0.037)。SNX5阳性患者3年累积生存率为50.00%(35/70),低于SNX5阴性患者的81.82%(18/22),差异有统计学意义(P=0.020)。肿瘤最大径>5 cm、TNM分期Ⅲ期、PLAGL2阳性及SNX5阳性均是影响HCC患者预后的独立危险因素(均P<0.01)。结论HCC组织中PLAGL2、SNX5阳性率升高,两者均参与促进HCC的发生、发展。PLAGL2阳性和SNX5阳性是影响HCC患者预后的独立危险因素,是HCC潜在的预后相关肿瘤标志物。

慢病毒短发夹RNA介导的多形性腺瘤基因样蛋白2沉默对肝癌细胞MHCC97-L增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨慢病毒短发夹RNA(shRNA)介导的多形性腺瘤基因样蛋白2(PLAGL2)沉默对肝癌细胞恶性行为的影响及其机制。方法Real-time PCR与Western blotting分别检测肝癌组织及癌旁组织中PLAGL2的表达水平;体外培养肝癌细胞MHCC97-L,构建慢病毒载体质粒PLAGL2-shRNA与对照NC-shRNA,转染MHCC97-L细胞,采用嘌呤霉素筛选稳转株;CCK-8、Transwell小室实验检测沉默PLAGL2后MHCC97-L细胞的增殖活力以及迁移和侵袭数量;Western blotting检测p-PI3K和p-Akt蛋白表达。用PI3K/Akt信号通路激活剂处理MHCC97-L细胞,检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。结果肝癌组织中PLAGL2表达水平显著升高(P<0.05);9株MHCC97-L细胞转染PLAGL2-shRNA可明显降低PLAGL2表达水平,同时,细胞增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05),p-PI3K、p-Akt表达受抑制(P<0.05);PI3K/Akt激活剂可明显逆转上述现象。结论慢病毒shRNA载体介导的PLAGL2沉默,可显著抑制肝癌细胞恶性行为,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。

人腮腺多形性腺瘤中骨形成蛋白-2成熟肽编码区基因克隆及序列分析

目的克隆腮腺多形性腺瘤(pleomorphic adenoma,PA)中骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein,BMP-2)成熟肽编码区基因片段,构建含有该基因片段的重组质粒,并DNA序列分析。方法从5例腮腺PA标本中分别提取总RNA,用特异性引物经逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增BMP-2成熟肽编码区基因片段,连接质粒载体pGEM-T,转化至感受态大肠杆菌JM109,挑选阳性克隆培养,抽提重组质粒DNA,测序鉴定。结果重组质粒DNA测序表明,插入的基因片段中有2个碱基发生改变,但所编码的氨基酸不变。结论从腮腺PA标本中成功克隆BMP-2成熟肽编码区基因片段,并构建重组质粒。

多形性腺瘤基因样因子2在上皮性卵巢癌组织中的表达及与预后的关系研究

目的探究多形性腺瘤基因样因子2(PLAGL2)在上皮性卵巢癌组织中的表达及与预后的关系。方法选取南京医科大学附属无锡人民医院妇科2014年7月至2020年1月收治的106例上皮性卵巢癌患者作为研究对象,于所有受试者入组24 h内收集并整理临床基础资料,采用常规免疫组化法对卵巢癌组织和癌旁正常组织中PLAGL2表达进行检测。随访观察患者预后,并根据预后结局分为预后不佳组和预后良好组。COX回归分析影响上皮性卵巢癌患者预后的因素。以受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评估PLAGL2对上皮性卵巢癌患者预后的预测价值。结果随访12个月内,106例上皮性卵巢癌患者中死亡19例,生存率82.08%。卵巢癌组织中PLAGL2阳性表达率高于癌旁正常组织(χ^(2)=9.339,P<0.05)。COX多因素回归分析结果显示,年龄46~58岁、国际妇产科联合会(FIGO)分期Ⅲ~Ⅳ期、病理分级低分化、术后残余病灶直径>1 cm及PLAGL2阳性表达均为上皮性卵巢癌患者预后的影响因素(P<0.05)。ROC分析显示,上皮性卵巢癌组织中PLAGL2表达对上皮性卵巢癌患者预后的ROC的灵敏度、特异度和AUC分别为89.47%、66.67%、0.781(P<0.05)。结论PLAGL2在预后不佳的上皮性卵巢癌患者中阳性表达率较高,且上皮性卵巢癌组织中PLAGL2表达对患者预后具有较高的预测效能。

多形性腺瘤基因样因子2在胃癌组织中的表达及其影响胃癌细胞侵袭、上皮-间充质转化的机制

目的观察多形性腺瘤基因样因子2(PLAGL2)在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达,探讨其对胃癌细胞侵袭、上皮-间充质转化(EMT)的影响及分子机制。方法采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot方法检测PLAGL2 mRNA和蛋白在胃癌及相应癌旁组织和人胃癌MKN-28、BGC-823、NCI-N87、SGC-7901细胞株中的表达。将PLAGL2小干扰RNA(siRNA)转染SGC-7901细胞,Real-time PCR、Western blot检测PLAGL2 mRNA和蛋白表达,Transwell侵袭实验检测敲低PLAGL2对细胞侵袭的影响,Western blot检测敲低PLAGL2对EMT相关分子标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关分子表达的影响。分别采用Wnt/β-catenin信号通路激活剂SKL2001和抑制剂XAV939处理转染PLAGL2-siRNA的SGC-7901细胞,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭变化。结果PLAGL2 mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达量(mRNA:1.11±0.27;蛋白:0.98±0.26)高于癌旁组织(mRNA:0.37±0.10;蛋白:0.28±0.11;t=-20.941,P<0.01;t=-20.186,P<0.01)。PLAGL2 mRNA和蛋白在胃癌细胞株MKN-28、BGC-823、NCI-N87、SGC-7901中的表达量高于人胃黏膜正常细胞GES-1(mRNA:t=-12.327,P<0.01;t=-19.812,P<0.01;t=-13.080,P<0.01;t=-15.218,P<0.01;蛋白:t=-11.816,P<0.01;t=-21.162,P<0.01;t=-14.517,P<0.01;t=-15.899,P<0.01)。转染后,SGC-7901的PLAGL2 mRNA和蛋白表达(mRNA:2.10±0.29;蛋白:1.96±0.27)较Control siRNA组(mRNA:6.61±0.73;蛋白:6.46±0.71)显著降低(t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01)。转染24、48、72 h后PLAGL2-siRNA组侵袭细胞数[(30.75±5.74)、(48.75±6.90)、(64.50±4.80)个]较Control siRNA组[(51.00±4.97)、(75.75±4.92)、(132.50±5.57)个]显著减少(t=-1.000,P<0.05;t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01),同时N-cadherin、Vimentin、β-catenin、基质金属蛋白酶(MMP)-7、c-Myc蛋白表达显著降低,E-cadherin蛋白表达显著增高(t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01;t=-8.205,P<0.01)。此外,SKL2001能够逆转敲低PLAGL2对SGC-7901细胞侵袭的抑制作用,XAV939则能够进一步加强以上作用。结论胃癌组织PLAGL2表达上调,siRNA干扰PLAGL2可通过抑制Wnt/β-cateninn信号通路的激活和EMT抑制胃癌侵袭。

PLAGL2与结肠癌侵袭能力的相关性研究

目的探讨多形性腺瘤基因样因子2(PLAGL2)在结肠癌和癌旁组织中的表达水平以及与结肠癌临床病理因素之间的关系,研究PLAGL2对结肠癌细胞侵袭能力的影响及其机制。方法通过免疫组化检测40例新鲜结肠癌组织及40例癌旁组织中PLAGL2的表达情况,根据术前影像检查结果及术后组织病理结果判断病人分期情况,分析PLAGL2与临床病理因素之间的关系。构建重组质粒pc DNA3.1-PLAGL2,利用转染试剂脂质体2000对SW480细胞进行转染PLAGL2质粒及对照组空载体质粒,分SW480、Vector、PLAGL2三组进行细胞培养,通过Transwell侵袭实验比较三组细胞侵袭能力的差异,并通Western-blot方法检测三组细胞中E-cadherin、vimentin及MMP-7的表达情况。结果 PLAGL2在Ⅲ~Ⅳ期、Ⅰ~Ⅱ期结肠癌组织与癌旁组织中的免疫组化评分(IS值)分别为8.12±2.997、5.71±2.494、2.17±0.984,差异有统计学意义(F=64.225,P<0.01)。卡方检验结果提示PLAGL2表达增高的病例临床分期较晚(χ2=5.700,P=0.017)、肿瘤较大(χ2=8.174,P=0.008)以及更易发生远隔脏器转移(χ2=13.610,P<0.001);Transwell侵袭实验比较细胞侵袭个数,PLAGL2组明显高于SW480和Vector两组,差异有统计学意义(F=27.997,P<0.01);Western-blot方法检测PLAGL2组细胞中E-cadherin表达明显降低(F=38.461,P<0.01)、vimentin(F=28.741,P<0.01)及MMP-7表达升高(F=24.520,P<0.01),差异有统计学意义。结论 PLAGL2的表达上调与结肠癌的发生、发展密切相关,并且能够促进结肠癌细胞的侵袭能力,可能机制与诱发上皮间质化(EMT)形成有关。

PLAGL2、TTF-1对SP-C基因启动子的共同调控作用

目的:探讨多形性腺瘤样基因2(PLAGL2)和甲状腺转录因子-1(TTF-1)对表面活性蛋白C(SP-C)基因启动子的共同调控作用。方法:应用定点诱变技术和体外细胞共转染后荧光素酶报告基因活性值检测技术研究PLAGL2、TTF-1对SP-C基因启动子表达活性的影响及相互作用;应用实时荧光PCR技术检测PLAGL2、TTF-1及SP-C在人胚肺和成熟小鼠肺Ⅱ型上皮细胞中的表达。结果:荧光素酶报告基因活性值检测结果显示TTF-1、PLAGL2共转染后所测SP-C基因启动子荧光素酶活性值明显低于PLAGL2共转染后SP-C基因启动子的活性值(P<0.01);SP-C基因启动子野生型质粒转染后的荧光素酶活性值明显低于其突变体质粒转染后的活性值(P<0.005);实时荧光PCR检测结果显示,PLAGL2基因的表达水平随胚肺发育成熟而逐渐减少,TTF-1和SP-C基因的表达水平则逐渐增高。结论:在肺Ⅱ型细胞中,PLAGL2和TTF-1对SP-C基因共同调控的过程中体现出一种动态平衡、相互抑制的关系。

前列腺癌组织PLAGL2表达临床意义探讨

目的 多形性腺瘤基因样蛋白2(pleomorphic adenoma gene-like protein 2,PLAGL2)作为细胞核内的转录因子可促进肿瘤发生,但其在前列腺癌中表达及临床意义尚属未知。本研究探讨前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织中PLAGL2表达,并分析PLAGL2与前列腺癌临床病理参数关系及淋巴结转移影响因素。方法 收集2010-01-01-2015-12-31中南大学湘雅医学院附属株洲医院泌尿外科103例前列腺癌患者行根治性前列腺切除术后病理标本及临床资料,选取50例良性前列腺增生病理标本及20例阳性淋巴结作为对照。采用组织芯片方式收集组织标本,免疫组化染色法检测PLAGL2表达,分析PLAGL2表达同前列腺癌患者临床病理参数关系及淋巴结转移影响因素。结果 前列腺癌PLAGL2阳性表达率(80.6%)高于良性前列腺增生(22.0%),χ2=55.003,P<0.001。PLAGL2表达水平与前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)水平(χ2=19.652,P=0.003)、Gleason评分(χ2=60.920,P<0.001)、PI-RADS评分(χ2=13.147,P=0.004)、临床分期(χ2=38.203,P<0.001)、淋巴结转移(χ2=36.875,P<0.001)、包膜侵犯(χ2=9.943,P=0.017)和精囊侵犯(χ2=8.355,P=0.031)有关联。前列腺癌盆腔淋巴结转移与PSA水平(χ2=7.828,P=0.022)、Gleason评分(χ2=39.417,P<0.001)、PI-RADS评分(χ2=4.820,P=0.034)、临床分期(χ2=19.495,P<0.001)、包膜(χ2=9.193,P=0.004)、精囊侵犯(χ2=10.473,P=0.003)和PLAGL2表达水平(χ2=36.875,P<0.001)有关联。Logistic回归分析显示,PLAGL2表达水平与Gleason评分是前列腺癌发生淋巴结转移的独立危险因素。结论 PLAGL2在前列腺癌组织中异常高表达,并与前列腺癌淋巴结转移相关,可能是预测淋巴结转移的重要因子。

质子型双菲啰啉的特异性抗肿瘤活性及其机制研究

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的恶性肿瘤,其发病率高且极易转移复发,严重影响人类健康。传统药物治疗存在不良反应大、多药耐药等问题,因此亟须寻找新的药物和作用靶点。本研究合成了质子型的双菲啰啉(protonic bis-phenanthroline,H-BP),结果显示H-BP可选择性地抑制肿瘤细胞增殖,引起肝癌细胞凋亡;在HCC荷瘤小鼠体内,H-BP能够有效阻止瘤块的生长,在中剂量(5 mg·kg^(-1))和高剂量(10 mg·kg^(-1))时甚至可完全消除肿瘤,并对小鼠体重没有明显影响。实验方案由西南大学动物实验伦理委员会批准,严格按照动物使用和护理的伦理原则进行实验操作。机制研究表明,H-BP引起HCC凋亡的原因与H-BP降低了原癌基因转录因子多形性腺瘤基因样蛋白2(pleomorphic adenoma gene like-2,PLAGL2)的表达有关,造成PLAGL2下游蛋白缺氧诱导因子和β连环蛋白的下调,从而引发癌细胞死亡。本研究不仅使用氢键二聚化方法合成化合物,为药物的设计提供新的思路,而且实验结果表明PLAGL2可能是肿瘤治疗中的一个有效靶标。