柑橘基因组DNA快速提取及ISSR-PCR扩增体系优化

对CTAB-mini法进行改良,得到一种效率较高的柑橘DNA提取方法。试验结果表明,得到的高质量DNA适合柑橘ISSR分析。同时,采用正交设计对影响柑橘ISSR-PCR因子进行优化。试验结果表明:20μl反应体系中采用5ng模板DNA、0.35mmol/LdNTPs、0.15μmol/LPrimer、1UTaq酶和3μl10×Buffer(含Mg2+)为柑橘ISSR-PCR最优反应体系。

二次正交旋转组合设计优化药桑花青素提取工艺

在超声波辅助条件下,采用四元二次正交旋转组合设计研究乙醇体积分数、液料比、时间、温度4个因素对药桑花青素提取效率的影响,用DPS7.05软件分析得出4个因素的回归方程。结果表明,超声波辅助提取最佳工艺条件为:乙醇体积分数范围52.46%～55.93%、提取液料比范围39.51:1～42.43:1(mL/g)、提取时间范围27.77～32.23min、提取温度范围50.18～52.4℃,在此工艺条件下花青素提取效率均能达到67%以上。

小麦麸皮阿拉伯木聚糖碱提工艺条件优化研究

为提高小麦麸皮中阿拉伯木聚糖的得率,本研究在考察了温度、时间、碱液与H2O2浓度和振荡速度等单因素对阿拉伯木聚糖得率影响的基础上,采用二次回归正交旋转组合设计对阿拉伯木聚糖的碱提工艺条件进行了优化并建立数学模型。结果表明,在提取温度88℃、时间200min、NaOH浓度0.16mol/L、H2O2浓度1.5%的条件下,阿拉伯木聚糖的得率达到最大值21.23%,验证实验结果与模型预测值相符。

截短侧耳素溶剂提取工艺的优化

采用溶剂法提取截短侧耳素产生菌Pleurotus mutilis烘焙菌体中的截短侧耳素。筛选适宜的提取溶剂,在单因素实验的基础上通过正交实验对提取过程中的多个影响因素进行了筛选和优化,确定提取工艺为:液料比4∶1(mL:g)的醋酸丁酯为提取溶剂,提取时间为10 min,振摇转速为140 r/min,提取次数为3次,截短侧耳素的提取率为94.56%。工艺条件简单、稳定可行,具有实际应用价值。

薰衣草高质量DNA提取及ISSR-PCR多重化体系的建立

以伊犁薰衣草‘701’新鲜叶片为材料,对4种基因组DNA提取方法进行比较,并通过单因子梯度比较试验结合L9(34)正交优化设计,对ISSR-PCR扩增体系中退火温度、DNA、Mg2+、dNTP和引物浓度进行最佳条件及配比筛选。结果表明,改良3×CTAB法是薰衣草高质量DNA少量提取的最佳方法 ;建立薰衣草ISSR-PCR扩增优化体系为,20μL反应体系中包括模板DNA 50 ng,Mg2+3 mmol/L,dNTP 0.3 mmol/L,引物0.3 mmol/L,Taq酶1 U;扩增程序退火温度为56℃。运用本试验建立的ISSR-PCR优化体系,对5份薰衣草种质进行了初步验证,获得了良好的多样性扩增条带。

二次回归正交旋转设计优化燕麦多酚化合物提取工艺

燕麦中含有丰富的多酚化合物,具有很强的抗氧化活性。本实验在单因素试验基础上,采用二次回归正交旋转组合设计对燕麦粉中多酚化合物提取工艺进行优化,建立提取温度(X1)、提取时间(X2)、乙醇体积分数(X3)、料液比(X4)4个因素与总多酚得率之间的回归模型:Y=5.2119+0.6358X1+0.1947X2-0.4213X3+0.452X4-0.1016X12-0.2786X22-0.1963X32-0.1526X42,得出各因素对燕麦总多酚得率影响的顺序为提取温度>料液比>乙醇体积分数>提取时间。从模型可知,在提取温度60℃、提取时间65.2min、乙醇体积分数50.6%、料液比1:20(g/ml)条件下,燕麦总多酚得率量最高可达6.6717mg/g。验证值为6.3989mg/g,与理论值基本一致。

单头赤眼蜂DNA提取方法比较及其PCR反应体系优化

为了探明有效的基因组DNA提取方法和PCR反应体系,从而得到符合分子生物学实验要求的基因组DNA模板的数量和质量,以单头松毛虫赤眼蜂为材料,应用CTAB法、SDS法和Chelex法进行基因组DNA提取效果的比较,并将核酸助沉剂用于赤眼蜂DNA的提取中,然后将提取的基因组DNA采用L16(45)正交设计试验,对影响赤眼蜂基因组DNA PCR反应体系的5因素(Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、DNA模板、Taq聚合酶)4水平进行筛选。结果表明:CTAB法优于SDS法和Chelex法,且核酸助沉剂的加入明显增强了模板DNA提取效果。同时确立的ITS2的PCR优化反应体系为:总体积为25mL,Mg2+浓度为1.50mM,dNTPs浓度为0.25mM,引物浓度为0.30μM,DNA模板取2.00μL,Taq聚合酶量为2.00U。

拳卷地钱基因组DNA提取及ISSR-PCR扩增体系优化

目的建立一种拳卷地钱基因组DNA的提取方法;对影响拳卷地钱ISSR-PCR反应的各因素进行优化,建立稳定的反应体系。方法采用改进的CTAB法提取拳卷地钱基因组DNA;以Taq酶、Mg2+、dNTP和引物4因素3水平的正交设计对拳卷地钱ISSR-PCR反应体系进行优化。结果采用改进的CTAB法提取的拳卷地钱基因组DNA质量高,且适用于ISSR-PCR扩增;获得拳卷地钱最佳反应体系(20μl)为:Taq酶0.5 U,Mg2+2.0 mmol/L,dNTP 250μmol/L,模板DNA 50ng,引物0.6μmol/L。结论建立并优化了拳卷地钱总DNA提取方法及ISSR-PCR反应体系。

染色丝织品的植物染料提取工艺优化

采用一种低酸度充氮气密封加压并且适当加热的方法进行植物染料染色丝织品的剥色提取,利用LC-MS鉴定了植物染料的主要有效成分,并借助正交实验设计的方法对剥色提取条件进行了优化,确立了黄檗、槐米染色丝织品的最佳剥色条件。结果表明:黄檗的最佳剥色条件为盐酸质量分数0.19%的CH_3OH提取液,80℃恒温提取60 min;槐米在65℃,不添加盐酸,V_(CH3OH)︰V_(H2O)为65︰35的提取液中提取90 min效率最高。方法重复性、稳定性良好。通过对比传统方法与实验中所用的剥色提取方法,发现该方法剥色效率最高可达传统方法的9倍多,明显提高了剥色效率。

二次回归正交旋转组合设计对黄芩多糖提取工艺的优化

采用三因素二次回归正交旋转组合设计方法,研究液固比、浸提温度、浸提时间对黄芩多糖提取率的影响,确定黄芩多糖的较优提取工艺。结果表明:通过频率分析法得到黄芩多糖最优提取工艺为液固比30:1(ml/g)、浸提温度85℃、浸提时间100min,在此工艺条件下黄芩多糖提取率为4.92%。

肝得宁片中五味子、女贞子提取工艺研究

目的 :为肝得宁片优化五味子、女贞子提取工艺条件。方法 :以五味子甲素转移率和得膏率为主要指标 ,结合工业化生产的可行性 ,对超临界CO2 萃取法、醇提法、水煮法等提取方法进行了比较研究 ,并采用正交设计法优选醇提工艺条件。结果 :3种提取方法以醇提法为佳 ,醇提工艺正交设计优化结果为 :乙醇浓度 90 % ,回流次数2次 ,时间为 1h ,溶媒用量为 6倍。结论 :本工艺稳定可行 ,可为提取五味子。

加拿大原产地西洋参多糖提取工艺优化研究

[目的]筛选加拿大原产地西洋参多糖的最佳提取工艺条件。[方法]单因素和正交试验法。[结果]加拿大原产地西洋参多糖的最佳提取分离工艺为:加热回流法,药材粒径为65目的西洋参粉末加入25倍体积80%乙醇90℃回流1 h,提取2次,滤渣减压干燥后按照料液比为1:35加水浸泡3 h,100℃提取1 h,提取3次。[结论]为加拿大原产地西洋参多糖的提取分离条件提供了参考,为加拿大原产地多糖西洋参的进一步开发研究提供依据。

葛根多糖提取工艺的优化

目的:以葛根多糖为研究对象,提取率和含量为指标,进行综合分析,得出葛根多糖的最佳提取工艺。方法:通过正交试验分析影响葛根多糖提取的因素,采用加权分析法分析各因素的影响度。结果:应用最佳提取工艺,葛根多糖提取率可达15.38%,含量达12.88%。结论:该方法简单、可靠,应用广泛,可为葛根多糖的工业化生产提供依据。

龙眼果肉黄酮乙醇法提取优化工艺研究

采用乙醇法通过单因素渐进试验,即不同的乙醇浓度梯度、不同的水浴温度梯度、不同的水浴时间梯度、不同的料液比梯度、不同的提取次数提取龙眼果肉黄酮,探明各因素范围,之后采用4因素4水平L16(45)正交试验设计,确立龙眼果肉黄酮提取的优化工艺:乙醇浓度85%、温度70℃、水浴时间2.5 h、料液比1∶3。

正交设计与响应面优化法用于精馏系统的区别

考察了正交设计法和响应面优化法用于精馏系统优化时的区别.以甲醇-丙酮-水体系为研究对象,以塔顶产品含量为约束对象,分别使用正交设计法和响应面优化法对其进行优化.得到两种方法下的产品浓度和塔釜能耗数据:正交设计法中塔釜能耗为1.648 5×106kcal/h;响应面优化法中塔釜能耗为1.317 2×106kcal/h,塔釜可节能15.81%.结果表明正交设计法适用于水平数不多的实验,而响应面优化法更适用复杂的精馏系统.

高山红景天中有效成分的微波辅助提取

采用微波辅助提取的方法从高山红景天中提取功能性成分红景天苷,研究固液比、微波辐照时间、预浸时间和乙醇浓度四因素对红景天苷提取率的影响。根据回归方程,采用降维方法讨论乙醇浓度对红景天苷提取率的单因子效应,并讨论了乙醇浓度和预浸时间之间的交互作用。结果表明微波功率为130 W,20%(v/v)乙醇作提取溶剂,固液比为1:29(g/mL),微波辐照时间60 s时,红景天苷的一次提取率达到80%。与传统的乙醇回流法相比,微波1 min提取两次和采用传统乙醇加热回流120 min提取四次的结果相差不大,但传统回流的乙醇消耗量为微波提取的2倍,热耗大。

坛紫菜氨基酸提取工艺影响条件的优化与分析

以坛紫菜(Porphyra haitanensis)为实验材料,采用盐酸水解法和浸提法,以日立L-8900型高速全自动氨基酸分析仪为测定仪器,分别研究了坛紫菜总氨基酸(TAA)和游离氨基酸(FAA)在提取过程中各条件的不同水平对提取结果的影响.实验结果表明:(1)利用正交设计L9(34)对影响TAA提取的4个条件(藻体质量、稀释倍数、干燥温度、空白值)在3个水平上进行优化实验,藻体质量、稀释倍数对测定结果影响显著,干燥温度影响不显著;通过实验筛选出各条件的最佳水平为:藻体质量为0.050 0g,稀释3倍,干燥温度为60℃.(2)利用正交设计L16(45)对影响FAA测定的5个条件(藻体质量、提取液、提取温度、提取时间、空白值)在4个水平上进行优化实验,结果表明藻体质量、提取液、提取温度、提取时间的不同水平对测定结果均有显著影响,其中藻体质量对结果的影响最大;通过实验筛选出各条件的最佳水平为:藻体质量为0.010 0 g,提取液为去离子水,提取温度为60℃,提取时间为4 h.

正交设计优选抗瘤升白片的提取工艺

目的 :正交设计优选抗瘤升白片提取工艺。方法 :采取提取挥发油、浸出物 (醇冷浸与水煮提 )的定量检测 ,及在化疗时其成品升WBC作用的药效学实验。结果与结论 :A1 、D1 提取工艺的浸出物较高。

回归正交法优化杜仲叶中绿原酸提取工艺研究

以杜仲叶为原料,在正交试验基础上,采用二次回归正交试验,优化了微波辅助提取杜仲叶中绿原酸的工艺条件。结果表明,最佳工艺条件为浸提温度61.71℃、乙醇质量分数为74.82%、pH为6、液料体积质量比为30.50 mL/g、提取时间为25 min,在此条件下,绿原酸提取率为4.578 6 mg/g。

超声波辅助复合酶法优化提取香菇多糖

利用超声波辅助纤维素酶与果胶酶复合法优化提取香菇多糖.方法:在单因素及正交实验基础上,以香菇多糖提取率为响应值,采用Box-Benhnken法设计响应面实验,得出香菇多糖最佳提取工艺参数.结果:香菇多糖最佳提取工艺:料液比1:21.17 g/m L、复合酶比1.96:1、温度48.21℃,在此条件下提取率最高为3.09%,与预测值3.14%相比,相对误差1.59%,模型拟合良好.结论 :与传统方法对比,超声辅助复合酶法明显提高香菇多糖得率,是较理想的提取方法.