白灵菇、杏鲍菇、阿魏菇多糖体外抗氧化活性研究

以热水浸提、乙醇沉淀的方法,分别从白灵菇、杏鲍菇、阿魏菇子实体中提取多糖。通过水杨酸法检测多糖提取物对羟基自由基(.OH)的清除作用、对邻苯三酚自氧化系统产生的超氧阴离子自由基(O-2.)的清除作用、还原力的测定以及在模拟胃液条件下对NO-2清除实验,对三种不同来源的多糖进行了体外抗氧化活性研究,结果表明:白灵菇、杏鲍菇、阿魏菇多糖提取物均具有较强的体外抗氧化性能,且随着多糖浓度的增大,其抗氧化活性逐渐增强。白灵菇对羟基自由基(.OH)的清除能力最强,杏鲍菇次之,阿魏菇最弱;杏鲍菇对超氧阴离子自由基(O2-.)的清除能力最强,白灵菇次之,阿魏菇最弱;在还原力以及对NO-2清除方面,白灵菇均表现为最强、杏鲍菇次之,阿魏菇则表现得最差。

阿魏侧耳多糖抗癌作用机理研究

目的:阿魏侧耳(阿魏菇)多糖(Pleurotus ferulae polysaccharide,PFP)抗宫颈癌作用的机理研究。方法:MTT法、中性红比色法和Griess法。结果:灌胃给药500 mg.kg-1的阿魏菇多糖可抑制小鼠宫颈癌U14移植瘤的生长,抑瘤率达到39%,临床抗宫颈癌药顺铂的抑瘤率为46.5%,阿魏菇多糖与顺铂共同作用时,抑瘤率达到65.1%;但是在体外实验中,不同浓度阿魏菇多糖分别作用于人宫颈癌HeLa和人乳腺癌MCF-7细胞不同时间后,却不能抑制两种细胞的生长;在5μg.mL-1的脂多糖刺激下,阿魏菇多糖不能促进脾淋巴细胞的增殖;不同浓度的阿魏菇多糖作用于腹腔巨噬细胞24 h,能使腹腔巨噬细胞的吞噬能力显著增强,并且呈现明显的剂量依赖性,与此同时阿魏菇多糖也促进了腹腔巨噬细胞的增殖,但是却不能刺激腹腔巨噬细胞释放NO。结论:阿魏菇的抗宫颈癌机制可能是通过促进小鼠机体免疫功能而实现的。

乙醇提取阿魏侧耳发酵液多糖的优化设计

采用液体深层发酵培养阿魏侧耳,以乙醇为提取剂,在不同的浓度、温度、时间条件下提取多糖,利用正交实验得到一种优化方案。实验结果表明:以发酵液多糖提取的最优方案是乙醇浓度80%、提取温度80℃、提取时间2.5h。

阿魏侧耳酸提水溶性多糖的研究

从热水浸提过的阿魏侧耳 (Pleurotusferulae)子实体中用 3%的三氯乙酸提取出另一种水溶性粗多糖PFA ,将PFA经Sevage法脱蛋白、透析、CTAB络合去沉淀后得多糖PF3。苯酚硫酸法测得PF3糖含量为 94 1 % ;用光散射和GPC联机测得PF3重均分子量为 1 96 5× 1 0 6 ;用IR和GC分析了组成和结构 ,PF3由鼠李糖、木糖、葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成 ,含有α 糖苷键。同时研究了PF3对核糖核酸酶的抑制作用 ,表明在浓度 5mg mL时其抑制率可达4 4 4 %。

阿魏菇深层发酵菌丝体多糖提取工艺优化研究

以液体深层培养的阿魏菇新鲜菌丝体为原料 ,使用均匀正交设计的试验方法优化了阿魏菇多糖提取工艺。实验结果表明 :在菌丝密度为 10 0～ 2 5 0mg/mL (鲜重 )范围内 ,超声波破壁时间为 18min、热水浸提时间为 4h、提取温度为 70℃的提取工艺 ,多糖提取率可达到 :0 .914 % (鲜重 )。

超声波法提取阿魏菇多糖的工艺

研究超声波辅助提取阿魏菇多糖的方法,通过单因素和正交试验考察并确定阿魏菇多糖的最佳提取工艺。通过试验最终确定阿魏菇多糖的最佳提取工艺为:超声功率160 W、超声时间70 min、液料比30∶1(g/mL)、提取温度60℃。在该条件下,阿魏菇多糖得率为11.08%。

白灵菇液体深层发酵多糖的提取

本文对白灵菇菌株液体深层发酵液中胞内、胞外多糖的提取工艺进行了研究。通过单因子试验和正交试验结果得到胞内多糖的提取工艺参数:温度60℃,提取时间2h,提取次数为2次,加水倍量为35倍。胞外多糖的提取工艺参数:浓缩比为1/2、浓缩温度60℃、醇沉终浓度75%、pH6.0。

阿魏侧耳水溶性多糖免疫活性的研究

采用碳粒廓清试验、淋巴细胞转化试验以及肿瘤坏死因子 (TNF)的诱生及其活性检测试验 ,观察阿魏侧耳水溶性多糖的免疫活性。结果表明 ,阿魏侧耳子实体水溶性粗多糖PFWP1具有非特异性免疫功能和特异性细胞免疫功能 ;阿魏侧耳菌丝体水溶性粗多糖PFWP2 和阿魏侧耳子实体水溶性多糖PFWP3 免疫活性不明显。

阿魏侧耳胞外多糖对荷瘤小鼠免疫能力的影响

通过皮下注射小鼠腹水瘤细胞构建荷瘤小鼠模型,灌胃法给药,采用血液分析仪、细胞培养、酶联免疫吸附等设备和方法测定血液中白细胞和淋巴细胞数量、腹腔巨噬细胞吞噬能力、脾淋巴细胞增殖能力、免疫器官指数、血浆中肿瘤坏死因子-α含量等来研究阿魏侧耳胞外多糖对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用。结果显示:与荷瘤对照组相比,灌胃100、200 mg/kg的阿魏侧耳胞外多糖可显著降低荷瘤小鼠瘤体质量(P<0.05)、提高血液中白细胞和淋巴细胞数量(P<0.05)、促进脾淋巴细胞的增殖(P<0.05),增加免疫器官指数(P<0.05)和血浆中肿瘤坏死因子-α的含量(P<0.05);灌胃200 mg/kg的阿魏侧耳胞外多糖可以显著增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力(P<0.05)。因此,一定浓度的阿魏侧耳胞外多糖可提高荷瘤小鼠的免疫能力。

阿魏菇多糖联合顺铂对小鼠宫颈癌U14细胞的凋亡诱导作用

目的:观察阿魏菇多糖(polysaccharides from Pleurotus ferulae,PFP)、顺铂(DDP)及两者联合对小鼠宫颈癌细胞株U14移植瘤的抑制作用及凋亡诱导作用,并初步探讨阿魏菇多糖的抗肿瘤作用机制。方法:建立昆明小鼠U14宫颈癌模型,并随机分为四组:模型对照组、PFP组、DDP组、PFP+DDP组,治疗10天后检测各组瘤重及抑瘤率,采用TUNEL法检测各组瘤组织凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果:模型组小鼠体内瘤体积、瘤重明显高于各干预组(P<0.01),PFP+DDP组小鼠体内瘤重和瘤体积分别为[(0.40±0.61)g,(197.84±11.99)mm3]低于DDP组[(0.61±0.26)g,(211.46±14.58)mm3];PFP组、DDP组、PFP+DDP组瘤组织凋亡指数均高于模型对照组,其中以PFP+DDP组最明显。结论:PFP联合DDP比两药单独应用抑制肿瘤生长及诱导肿瘤细胞凋亡的作用更强,二者具有协同抗癌作用。PFP可以增强DDP的药物敏感性,其作用机制可能是通过诱导宫颈癌细胞凋亡而实现的。

阿魏侧耳多糖的分离纯化与抗肿瘤活性的研究

从阿魏侧耳 (Pleurotusferulae)子实体中用热水浸提出粗多糖PFW ,将PFW脱蛋白后 ,经DEAE—纤维素柱层析 ,得两种多糖PF1 和PF2 。用光散射和GPC联机测定 :PF1 含有两种组分其重均分子量分别为 7 875× 1 0 5 和 3 2 4 5× 1 0 4 ;PF2 重均分子量为 3 1 87× 1 0 6。用IR和GC分析它们组成和结构 ,结果表明 :PF1 由鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成 ,含有 β 糖苷键和甘露糖苷 ;PF2 由鼠李糖、木糖、葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成 ,含有α 糖苷键。给小鼠腹腔注射多糖 ,对移植性肿瘤S 1

阿魏侧耳多糖研究进展

阿魏侧耳是一种具有药用价值的名贵珍稀食用菌,具有"天然、营养、保健"于一体功能。现对阿魏侧耳的研究历史及阿魏侧耳多糖的药用价值进行综述。

白灵菇多糖液体发酵工艺的优化

以胞外多糖为指标,通过摇瓶培养的方式对白灵菇液体发酵培养基及培养条件进行了研究。结果表明,白灵菇液体发酵产胞外多糖的最佳培养基组合为:葡萄糖2%、蛋白胨0.75%、CaCl20.2%;白灵菇液体发酵产胞外多糖的最佳发酵条件为:起始pH值7.0,接种量20%,装液量120mL,培养天数6d。

阿魏菇多糖的相对分子质量及单糖组成的测定

测定了阿魏菇多糖(Pleurotus ferulae Lenzi polysaccharide,PFLP)的相对分子质量和单糖组成,在理论上为深入探究PFLP的结构以及构效活性奠定了基础。PFLP利用离子交换柱层析(DEAE-52Cellulose)和凝胶柱层析(Sephadex G-100)进行初步和进一步分离纯化,紫外、冻融、电泳实验对其进行纯度鉴定。利用Sephadex G-100柱层析法测定相对分子质量,气相色谱分析其单糖组成。经过分离纯化、纯度鉴定后得到两种纯PFLP组分,分别命名为PFLP1、PFLP2,其相对分子质量分别为5 582、7 963。PFLP1由鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比为1︰1.66︰19.6︰3.98;PFLP2由鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比为1︰0.40︰0.66︰6.76︰4.27。

不同氮源对阿魏菇菌丝生长量及多糖含量的影响

分别以蛋白胨、酵母膏、硫酸铵、硝酸铵为氮源,用液体摇床培养法与平板培养法培养阿魏菇,并对胞外多糖产量及菌丝生长情况进行了研究。结果表明:酵母膏为阿魏菇生长的最佳氮源,液体培养基中菌球长势好,胞外多糖产量高,平板培养菌丝生长速度快。

阿魏菇菌丝体胞内多糖提取工艺研究

对离子束诱变筛选得到的阿魏菇菌株,进行了胞内多糖提取纯化试验,分别对影响多糖提纯的提取条件,醇析条件,盐析条件,去蛋白效率,H2O2脱色进行了研究,并利用回归模型对工艺条件的最优组合、单因子效应进行了探讨。结果表明,胞内多糖最佳提纯工艺为,浸提料液比15,温度100℃,3h,提取3次,置-20℃冰冻后可初步去除不溶杂质,然后向多糖溶液中加入试剂硫酸铵和无水乙醇析出多糖(加入条件为:硫酸铵和多糖液m/m1:5;无水乙醇和多糖液v/v1:1),静置8h,H2O2脱色6h。

薄层色谱法和气相色谱法分析2种侧耳多糖的单糖组成

目的分析阿魏菇和杏鲍菇2种侧耳多糖的单糖组成。方法阿魏菇多糖和杏鲍菇多糖经完全酸水解后,用薄层色谱法(thin layer chromatography,TLC)和气相色谱法(gas chromatography,GC)分析样品的单糖组成,并测定各单糖的摩尔比例。结果 TLC法和GC法均检测出阿魏菇多糖和杏鲍菇多糖含有阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal)单糖组分,GC法测得阿魏菇多糖和杏鲍菇多糖中各单糖的摩尔比(Ara:Man:Glc:Gal)分别为1.00:1.75:11.79:2.22和1.00:4.53:1.92:2.24。结论阿魏菇多糖和杏鲍菇多糖的单糖组成类似,但二者的各单糖摩尔比例有差异,TLC和GC法适用于分析阿魏菇和杏鲍菇多糖的单糖组成。

白灵菇子实体的氨基酸及多糖含量的测定

对白灵菇子实体菌盖、菌柄中氨基酸及粗多糖含量进行了测定。测定结果表明:菌盖与菌柄中氨基酸总量分别为13.67%、7.43%,E/T分别为36.87%、37.42%,F/T分别达到31.60%、29.48%,S/T分别为20.19%、21.40%,其氨基酸含量丰富且配比合理。菌盖与菌柄中粗多糖含量分别为45.5mg/g、46mg/g。

响应面法优化阿魏菇多糖的超声辅助提取工艺及抗氧化活性研究

为研究阿魏菇多糖(Pleurotus ferulae polysaccharides,PfP)的超声提取工艺及体外抗氧化活性,在单因素试验的基础上,采用中心组合设计(box-behnken design,BBD)和响应面方法(response surface methodology,RSM),研究超声时间、超声温度、液料比及提取次数对PfP提取率的影响,优化PfP的超声辅助提取工艺;通过测定对Fe3+还原能力和对DPPH自由基、羟基自由基(·OH)的清除能力,对PfP的体外抗氧化活性进行研究。结果显示,超声温度、超声时间以及液料比均对PfP的提取率有显著影响,其中料液比影响最大,超声时间影响最小;最佳工艺条件为:超声温度66℃、超声时间27min、液料比29∶1(mL/g)、提取2次,在此条件下PfP提取率达到14.69%。体外抗氧化试验结果表明,PfP使Fe^3+还原产生的最大吸光值为0.54,对DPPH和·OH的最大清除率分别为85.61%和56.1%,其抗氧化活性均在一定浓度范围呈剂量正相关效应。

阿魏侧耳胞外多糖生物活性初步研究

本文研究了阿魏侧耳液体发酵胞外多糖的生物活性.液体深层发酵和乙醇萃取法制备阿魏侧耳胞外多糖,小鼠经灌胃给药,采用血液分析仪、体外孵育等方法,测定血液中白细胞数量、腹腔巨噬细胞吞噬能力和免疫器官指数;利用显微观察、细胞计数和纸片琼脂法等研究阿魏侧耳胞外多糖对肿瘤细胞、细菌和真菌生长的影响.结果表明：与对照组相比,灌胃100和200 mg/kg的阿魏侧耳胞外多糖可显著提高小鼠血液白细胞数量（P＜0.05）、增加免疫器官指数（P＜0.05）和增强巨噬细胞吞噬能力（P＜0.05）;40 ～ 80 g/L阿魏侧耳胞外多糖对枯草芽孢杆菌的生长有一定的抑制作用;5～ 80 mg/L阿魏侧耳胞外多糖对体外培养的人胃癌细胞和人宫颈癌细胞的存活无明显影响作用.因此,一定浓度阿魏侧耳胞外多糖可提高小鼠的免疫能力,抑制枯草芽孢杆菌的生长,但对其他供试细菌、真菌和体外培养的肿瘤细胞的生长无明显影响作用.