CpxR对鼠伤寒沙门菌连接蛋白基因pmrD的调控作用

前期发现黏菌素对鼠伤寒沙门菌acrB和cpxR双缺失后的cpxR回补株JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR(JS△△/pR)的MIC值较标准株JS显著下降了16倍,且JS△△/pR中PhoPQ和PmrAB之间的连接蛋白基因pmrD的表达量显著降低。为探索cpxR对pmrD的调控作用,本研究构建了pmrD的单基因过表达菌株JS△acrB△cpxR::kan/ppmrD(JS△△/pD),并用overlapping PCR扩增得到cpxR和pmrD的共表达基因cpxR-pmrD,构建了cpxR、pmrD共表达菌株JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR-pmrD(JS△△/pRD)。用微量肉汤稀释法测定了黏菌素对各菌株的最小抑菌浓度(MICs),同时测定了各菌株在LB肉汤中的生长曲线和黏菌素的杀菌曲线。结果表明,成功构建了鼠伤寒沙门菌pmrD的单基因过表达菌株JS△△/pD和cpxR、pmrD共表达菌株JS△△/pRD。MIC结果显示,黏菌素对JS△△/pR的MIC值较JS显著下降(16倍),JS△△/pD的MIC值没有变化,而JS△△/pRD的MIC值显著上升(16倍)。生长曲线显示,JS△△/pR的生长活性最低,JS△△/pD、JS△△/pRD的生长活性均高于JS△△/pR。黏菌素的杀菌曲线显示,JS△△/pRD在不同浓度黏菌素中的存活率显著高于JS△△/pD。这些结果表明:在JS△△背景下,pmrD对菌株黏菌素敏感性的影响依赖于cpxR,cpxR对pmrD的调控具有双向性,即对生理表达的pmrD具有负调控作用,而对过表达的pmrD具有正调控作用。本试验为全面系统阐明cpxR或cpxR与acrB相互作用调控沙门菌敏感性的分子机制奠定基础。

家族相关的HLA部分不合的异基因骨髓移植

目的 :为了扩大异体造血干细胞移植供者造血干细胞的来源 ,探索 HL A部分不完全相合的家属供者的异体外周血干细胞移植治疗白血病的方法和效果 ,以克服家庭缩小 ,家族性 HL A相合供者不足的困难。方法 :对两例无 HL A相合家族供者的白血病患者进行 HL A一个位点不合的家族供者的异体外周血造血干细胞移植 ,给予抗淋巴细胞球蛋白和 FK5 0 6,以防治 GVHD。结果 :2例病人均移植成功 ,1例 HL A- A位点不合的病人顺利植入 ,未发生 GVHD。 1例 HL A- B位点不合的病人发生了 度 GVHD,经治疗后缓解。随访 >6个月均显示供者在染色体改变 ,无白血病表现。结论 :以 HL A不完全相合的家族供者进行异体造血干细胞移植治疗白血病是可行的有效方法 ,抗淋巴细胞球蛋白及 FK 5 0 6是防治