猪FcγRⅢ和γ链共转染Marc-145细胞系的建立

为了建立稳定表达猪FcγRⅢ(Porcine Fc gamma receptorⅢ,poFcγRⅢ)的Marc-145细胞系,从PAM细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅢ和γ链的cDNA,并构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅢ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300 mg/L)和G418(400 mg/L)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环试验和流式细胞术对细胞系进行了鉴定。结果表明,成功构建了猪FcγRⅢ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系,表达于转染细胞表面的猪FcγRⅢ受体分子能与猪IgG特异结合。

I型免疫缺陷病毒蛋白R降低U251细胞恶性生物学行为的研究

目的探讨重组腺病毒介导的I型人类免疫缺陷病毒蛋白R（Vpr）转染对胶质瘤U251细胞TGFl3RIll表达及恶性生物学行为的影响。方法将U251细胞分为正常对照组，空载体组和实验组进行细胞培养，空载体组和实验组按感染复数（multiplicityofinfection，MOI）=100分别进行空载腺病毒（Ad—GFP）和含有Vpr基因的重组腺病毒（Ad—Vpr）转染，转染后用Westernblot检测Vpr、TGFl3RIU、MMP-2和MMP-9表达水平，Transwell、划痕实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果实验组U251细胞经Ad-Vpr转染后，可见Vpr蛋白表达，同时TGFf3RIU蛋白表达升高，正常对照组、Ad-GFP组、Ad-Vpr组TGFβRⅢ与B—actin密度灰度比值分别为0．71±0．04，0．83±0．09和1．13±0．16，三组间差异有统计学意义（P〈0．05）。MMP-2和MMP-9蛋白表达降低，Ad．Vpr组MMP-2和MMP-9与13-actin密度灰度比值分别为0．51±0．11和0．43±0．08，对照组为1．11±0．11和1．06±0．18，Ad-GFP组为1．23±0．05和1．16±0．12，与对照组和Ad—GFP组相比，Ad—Vpr组MMP-2和MMP-9表达明显降低（P〈0．05）。Transwell体外侵袭实验结果显示，对照组、Ad—GFP组和Ad-Vpr组平均视野的穿膜细胞数分别为（123．12±10．82）个、（118．89±12．65）个和（80．64±7．72）个，与对照组和Ad—GFP组比较，Ad-Vpr转染组穿膜细胞数明显减少，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论Ad-Vpr可能通过上调TGF±RⅢ降低胶质瘤U251细胞的迁移和侵袭能力。