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PolyI:C刺激猪PK15细胞后病毒感染应答基因未注释转录本鉴定及其特征分析
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作者 赵为民 王红 +5 位作者 徐盼 陈哲 陶晓莉 李碧侠 付言峰 程金花 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1622-1631,共10页
【目的】鉴定猪PK15细胞在类病毒聚肌胞苷酸(PolyI:C)刺激后病毒感染应答基因的未注释转录本的数量、剪接类型、新蛋白编码与分子结构,为进一步研究这些未注释转录本的功能奠定基础。【方法】将猪PK15细胞分为对照组和试验组,每组3个重... 【目的】鉴定猪PK15细胞在类病毒聚肌胞苷酸(PolyI:C)刺激后病毒感染应答基因的未注释转录本的数量、剪接类型、新蛋白编码与分子结构,为进一步研究这些未注释转录本的功能奠定基础。【方法】将猪PK15细胞分为对照组和试验组,每组3个重复;试验组加入终浓度为20μg/mL的PolyI:C,对照组加入等体积(2μL)的PBS,两组在37℃、5%CO_(2)条件下分别刺激6 h后进行Nanopore测序,鉴定两组的总转录本与差异表达基因。对差异表达基因进行GO功能分析,进一步筛选病毒感染的应答基因。对总转录本与Ensemble注释的转录本序列进行比较,发现未注释转录本。将病毒感染应答基因的未注释转录本与其对应的Ensemble注释转录本序列进行比对,分析未注释转录本的剪接类型和编码蛋白。【结果】PolyI:C刺激后,两组共鉴定蛋白编码的转录本61505个,其中有Ensemble数据库注释的39497个,未注释的转录本22008个,未注释转录本数量占总数的35.78%。同时两组鉴定到71个差异蛋白编码基因,与对照组相比,试验组上调表达基因57个,下调表达基因14个。GO功能富集分析显示,这些差异表达基因富集到20个生物过程,其中前3个生物过程分别是防御病毒反应、Ⅰ型干扰素信号通路和病毒应答,均与病毒感染应答相关。24个病毒感染应答的基因有16个基因存在未注释转录本,其中CCL 5、IFI 6、BST 2和MX 1基因未注释转录本的数量多于其Ensemble注释的总转录本数量,且大部分未注释转录本产生新的蛋白序列。IFIT 3、OAS 2、RSAD 2、CCL 5、IFI 44、CD 40、IFI 6、BST和MX 19个基因的未注释转录本有差异表达。【结论】本研究系统地鉴定了猪PK15细胞受PolyI:C刺激后病毒感染应答基因的未注释转录本的分子特征,筛选的IFIT 3、OAS 2、RSAD 2、CCL 5、IFI 44、CD 40、IFI 6、BST和MX 19个基因的差异表达的未注释转录本可能具有重要生物学作用,为进一步解析宿主基因在抗病毒反应中的复杂转录调控机制提供了依据。 展开更多
关键词 Nanopore测序 polyi:c 病毒感染 转录本 选择性剪接
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PolyI:C介导气道平滑肌细胞TLR3和IL-8、Eotaxin的表达 被引量:7
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作者 闫明华 朱述阳 +1 位作者 段存玲 嵇桂娟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期966-968,972,共4页
目的:观察PolyI:C对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)Toll样受体3(TLR3)及炎性细胞因子表达的影响,探讨ASMCs内TLR3表达与气道炎症间的关系。方法:体外培养大鼠ASMCs,传代培养后分为正常对照组和PolyI:C刺激组,PolyI:C刺激组又分为不同的时间... 目的:观察PolyI:C对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)Toll样受体3(TLR3)及炎性细胞因子表达的影响,探讨ASMCs内TLR3表达与气道炎症间的关系。方法:体外培养大鼠ASMCs,传代培养后分为正常对照组和PolyI:C刺激组,PolyI:C刺激组又分为不同的时间点。用RT-PCR法检测细胞TLR3mRNA的表达;Western blot法检测ASMCs中核因子κB(NF-κB)的蛋白含量;ELISA法检测细胞培养上清Eotaxin和IL-8的浓度。结果:与正常对照组相比较,PolyI:C刺激组ASMCs内TLR3mRNA和NF-κB蛋白表达增加(P<0.05);ASMCs培养上清液中IL-8和Eotaxin浓度增加(P<0.05),并存在时间依赖性。结论:PolyI:C可以上调ASMCs内TLR3的表达,活化NF-κB,增加趋化因子Eotaxin和IL-8的浓度,参与哮喘的气道炎症反应。 展开更多
关键词 气道平滑肌细胞 polyi:c TOLL样受体3 NF-ΚB
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PolyI:C体外诱导草鱼PKR基因的克隆与表达 被引量:3
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作者 李景芬 刘莉 曹访 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第33期20514-20516,20529,共4页
[目的]克隆草鱼的PKR基因,为草鱼抗病毒基因研究奠定基础。[方法]依据GenBank上斑马鱼(AJ852023.1)和鲫鱼(AY293929.1)的PKR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计了3对简并引物;采用100μg/ml PolyI:C体外分别处理草鱼肾细胞(Ctenop... [目的]克隆草鱼的PKR基因,为草鱼抗病毒基因研究奠定基础。[方法]依据GenBank上斑马鱼(AJ852023.1)和鲫鱼(AY293929.1)的PKR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计了3对简并引物;采用100μg/ml PolyI:C体外分别处理草鱼肾细胞(Ctenopharyngodon indellus kidney cells,CIK)12、36、48 h,并提取处理后细胞的总RNA,逆转录后用降落PCR方法扩增这3个处理时间细胞中PKR基因。[结果]处理12 h时未扩增出PKR基因,处理36和48 h时都扩增到了PKR基因,并且表达量随处理时间的增加有所升高,扩增到的部分序列与鲫鱼和斑马鱼的该段序列同源性分别为100.00%和81.48%。[结论]试验成功获得了草鱼PKR基因的部分序列,PolyI:C高效诱导草鱼PKR蛋白表达将有助于开创治疗草鱼类病毒病的一种新思路。 展开更多
关键词 polyi:c PKR 草鱼 克隆 表达
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Polyi:c对非小细胞肺癌细胞A549细胞增殖及运动抑制作用的体外研究
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作者 吴美玉 崔海 宋勉 《中国科技期刊数据库 医药》 2021年第11期26-29,共4页
探讨Polyi:c复合物在体外是否抑制人A549细胞株的细胞增殖及细胞运动。方法:RT-QPCR法明确Polyi:c复合物干预A549细胞前后TLR3 mRNA的表达。经细胞活力-毒性实验确认不同浓度的Polyi:c复合物对A549细胞增值率的影响;单层细胞增殖实验检... 探讨Polyi:c复合物在体外是否抑制人A549细胞株的细胞增殖及细胞运动。方法:RT-QPCR法明确Polyi:c复合物干预A549细胞前后TLR3 mRNA的表达。经细胞活力-毒性实验确认不同浓度的Polyi:c复合物对A549细胞增值率的影响;单层细胞增殖实验检测Polyi:c复合物对A549细胞倍增时间的影响。划痕实验评价Polyi:c复合物干预前后A549细胞的愈合能力;transwell迁移实验考察Polyi:c复合物干预前后A549细胞的纵向运动能力;transwell侵袭实验考察Polyi:c复合物干预前后A549细胞的侵袭潜能。结果:正常情况下A549细胞表达TLR3 mRNA,当给予Polyi:c复合物干预时TLR3 mRNA的表达明显升高(P<0.01)。给予浓度为10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL浓度的Polyi:c复合物干预A549细胞时,24h 时细胞增殖率从92%降为61%,48h时细胞增殖率从55%降为37%(P<0.05)。经Polyi:c复合物刺激24h时A549细胞单层增殖率减少1.49倍,48h时减少2.07倍(P<0.01)。PolyI:C复合物可抑制非小细胞肺癌细胞的平行运动能力,刺激A549细胞24h及48h时的划痕间隙面积具有统计学差异(P<0.01)。结论:1.Polyi:c复合物上调A549细胞中TLR3 mRNA的表达。2.Polyi:c复合物在体外通过促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,在A549细胞中实现抗肿瘤作用。3.Polyi:c复合物在体外通过干扰A549细胞的平行运动能力、纵向运动能力及侵袭潜能实现抗转移作用。 展开更多
关键词 polyi:c TLR3 肺癌 免疫治疗
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PolyI:C刺激豚鹿(Axis porcinus)外周血淋巴细胞转录组分析 被引量:2
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作者 隋维恺 高艳 +5 位作者 杨茜茜 冷思竹 严慧娟 屈羽 陈维刚 杜小刚 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2021年第1期114-120,128,共8页
【目的】初步探究豚鹿的抗病毒免疫机制,为野生动物保护提供新的思路。【方法】利用转录组测序技术对聚肌胞苷酸(PolyI:C)刺激后的豚鹿外周血淋巴细胞进行测序分析并使用qPCR方法对数据的准确性进行验证。【结果】拼接得到121204条unige... 【目的】初步探究豚鹿的抗病毒免疫机制,为野生动物保护提供新的思路。【方法】利用转录组测序技术对聚肌胞苷酸(PolyI:C)刺激后的豚鹿外周血淋巴细胞进行测序分析并使用qPCR方法对数据的准确性进行验证。【结果】拼接得到121204条unigene,平均长度1121 bp。共有97.12%的unigene得到成功注释。经过差异表达分析,获得402个差异表达基因(DEGs)。GO和KEGG富集分析显示差异基因在免疫反应方面出现富集,进而筛选出28个免疫相关基因。随机选取9个基因进行实时荧光定量分析,验证结果与测序结果变化趋势一致。【结论】获得了Poly I:C刺激后豚鹿外周血淋巴细胞的基因表达谱,为豚鹿抗病毒免疫应答机制的研究奠定了基础,为疫苗佐剂的开发及应用提供了理论基础。 展开更多
关键词 Poly I:c 豚鹿 外周血淋巴细胞(PBL) 转录组 qPcR
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Rab7 GTPase负向调节巨噬细胞中poly I:C诱导的细胞因子的表达 被引量:2
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作者 王玉珍 谢基明 +1 位作者 王宁飞 刘帅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期867-870,共4页
目的:通过构建Rab7的失活突变载体tRab7(Rab7T22N),研究Rab7失活突变后对poly I:C诱导的RAW264.7巨噬细胞中细胞因子的影响。方法:利用PCR定点突变法构建Rab7的失活突变载体Rab7T22N,将Rab7的真核表达载体及其突变体tRab7通过脂质体法... 目的:通过构建Rab7的失活突变载体tRab7(Rab7T22N),研究Rab7失活突变后对poly I:C诱导的RAW264.7巨噬细胞中细胞因子的影响。方法:利用PCR定点突变法构建Rab7的失活突变载体Rab7T22N,将Rab7的真核表达载体及其突变体tRab7通过脂质体法瞬时转染RAW264.7细胞,通过Western blot方法检测Rab7的表达情况。poly I:C刺激转染细胞不同时间后检测细胞因子IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达变化。结果:Western blot检测结果显示,与转染空质粒的对照细胞相比,转染Rab7和tRab7的细胞中Rab7的蛋白水平显著增高。Rab7过表达后,抑制了巨噬细胞RAW264.7中poly I:C刺激后IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的产生,而Rab7失活突变体tRab7(Rab7T22N)过表达后显著促进了IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达。结论:Rab7抑制了poly I:C刺激的巨噬细胞中IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达,该抑制作用依赖于其GTP结合活性。本研究为进一步阐明Rab7在TLR3信号转导通路中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 polyi:c Rab7 IFN-Β TNF-Α TLR3
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青蛤(Cyclina sinensis)ERK基因的克隆及其在Poly I:C刺激下的表达分析 被引量:1
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作者 侯梓园 石雅峰 +2 位作者 姚远 潘宝平 闫春财 《安徽农业科学》 CAS 2019年第1期99-102,共4页
[目的]研究青蛤(Cyclina sinensis) ERK基因的克隆及在Poly I:C刺激下的表达情况。[方法]在已建立的青蛤转录组文库中筛选得到青蛤细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases)基因类似序列。运用生物信息学软件在线... [目的]研究青蛤(Cyclina sinensis) ERK基因的克隆及在Poly I:C刺激下的表达情况。[方法]在已建立的青蛤转录组文库中筛选得到青蛤细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases)基因类似序列。运用生物信息学软件在线对该基因进行结构分析。采用PCR技术克隆基因,并使用实时荧光定量PCR技术克隆得到Cs ERK基因在青蛤5个不同组织中的表达情况及在干扰素诱导剂PolyI:C的刺激下ERK基因在青蛤血淋巴中的时序性表达情况。[结果]ERK基因序列全长为2 407 bp,开放阅读框长1 338 bp,共编码445个氨基酸。ERK基因在青蛤的血淋巴、外套膜、闭壳肌、肝脏和鳃5个组织中均表达,在血淋巴中表达量最高,闭壳肌中表达量最低。青蛤ERK基因在Poly I:C胁迫下表达量在6 h时达到最大值,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。[结论]ERK基因所指导合成的蛋白是青蛤重要的免疫信号通路蛋白。 展开更多
关键词 青蛤 ERK基因 polyi:c 荧光定量PcR
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用离心逆流分配色谱仪分离POLY I:C 被引量:3
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作者 王今 金绿松 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第3期388-392,共5页
用两相溶剂系统的离心逆流分配色谱仪,分离人工合成聚肌胞Poly I:C.采用步进洗脱和梯度洗脱.在梯度洗脱中对Ito氏的缓冲液进行改进,得到了很好的分离结果,分成四个组分,其沉降系数分别为12s,7.0s,6.3s,和3.8s.此分离结果优于普通柱色的... 用两相溶剂系统的离心逆流分配色谱仪,分离人工合成聚肌胞Poly I:C.采用步进洗脱和梯度洗脱.在梯度洗脱中对Ito氏的缓冲液进行改进,得到了很好的分离结果,分成四个组分,其沉降系数分别为12s,7.0s,6.3s,和3.8s.此分离结果优于普通柱色的结果. 展开更多
关键词 离心逆流色谱 polyi:c
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Characterization and Expression Analysis of a Complement Component Gene in Sea Cucumber(Apostichopus japonicus) 被引量:3
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作者 CHEN Zhong ZHOU Zunchun +4 位作者 YANG Aifu DONG Ying GUAN Xiaoyan JIANG Bei WANG Bai 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS 2015年第6期1096-1104,共9页
The complement system plays a crucial role in the innate immune system of animals. It can be activated by distinct yet overlapping classical, alternative and lectin pathways. In the alternative pathway, complement fac... The complement system plays a crucial role in the innate immune system of animals. It can be activated by distinct yet overlapping classical, alternative and lectin pathways. In the alternative pathway, complement factor B(Bf) serves as the catalytic subunit of complement component 3(C3) convertase, which plays the central role among three activation pathways. In this study, the Bf gene in sea cucumber(Apostichopus japonicus), termed Aj Bf, was obtained by rapid amplification of c DNA ends(RACE). The full-length c DNA of Aj Bf was 3231 bp in length barring the poly(A) tail. It contained an open reading frame(ORF) of 2742 bp encoding 913 amino acids, a 105 bp 5'-UTR(5'-terminal untranslated region) and a 384 bp 3'-UTR. Aj Bf was a mosaic protein with six CCP(complement control protein) domains, a VWA(von Willebrand factor A) domain, and a serine protease domain. The deduced molecular weight of Aj Bf protein was 101 k Da. Quantitative real time PCR(q RT-PCR) analysis indicated that the expression level of Aj Bf in A. japonicus was obviously higher at larval stage than that at embryonic stage. Expression detection in different tissues showed that Aj Bf expressed higher in coelomocytes than in other four tissues. In addation, Aj Bf expression in different tissues was induced significantly after LPS or Poly I:C challenge. These results indicated that Aj Bf plays an important role in immune responses to pathogen infection. 展开更多
关键词 sea cUcUMBER Apostichopusjaponicus cOMPLEMENT factor B LPS cHALLENGE polyi:c cHALLENGE
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大黄鱼C型溶菌酶对鳗弧菌胁迫的响应研
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作者 邱本丹 刘慧慧 吴常文 《中国水运(下半月)》 2016年第6期169-173,共5页
溶菌酶作为是鱼体内非特异性免疫因子,在机体起到消化和防御病毒作用。本研究克隆了大黄鱼C型溶菌酶基因ORF长度为333bp,可编码110个氨基酸,Gen Bank数据库的登陆号为XM-010753143.1,相对分子质量为27.68k Da,理论等电点为5.24,具有8个... 溶菌酶作为是鱼体内非特异性免疫因子,在机体起到消化和防御病毒作用。本研究克隆了大黄鱼C型溶菌酶基因ORF长度为333bp,可编码110个氨基酸,Gen Bank数据库的登陆号为XM-010753143.1,相对分子质量为27.68k Da,理论等电点为5.24,具有8个半胱氨酸,能形成4对二硫键,有2个保守的催化残基位点Glu17和Asp34。多序列比对显示,大黄鱼C型溶菌酶氨基酸序列与其他鱼类同源性高达71%以上。进化树发现,大黄鱼C型溶菌酶首先与鲈形目鱼类聚在一起,鱼类C型溶菌酶与哺乳动物的亲缘关系近。基因结构分析可知,大黄鱼C型溶菌酶基因含有3个外显子和2个内含子。实时荧光定量PCR检测显示,大黄鱼C型溶菌酶8种组织(肝脏、脾脏、肾脏、脑、心、肌肉、鳃、肠)中均有表达,其中在肝中表达水平量最高(800多倍),脾和肾组织最低。鳗弧菌和poly I:C感染后,大黄鱼肝脏、脾脏和肾脏组织中C型溶菌酶基因的表达变化不大,说明C型溶菌酶在大黄鱼体内主要起到消化作用。 展开更多
关键词 大黄鱼 c型溶菌酶 鳗弧菌 polyi:c
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基于表达谱芯片挖掘抗猪瘟病毒相关基因及其在不同猪瘟抗体水平下的表达差异 被引量:2
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作者 王晓铄 俞英 +4 位作者 刘会杰 肖丽 翟立维 敖红 王楚端 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期14-22,共9页
本研究旨在筛选抗猪瘟病毒相关基因,并分析不同猪瘟抗体水平下这些相关基因在大白和长白猪中的表达差异。首先,基于表达谱芯片技术,采用Agilent猪4×44K全基因组表达谱芯片,分析4组试验材料(病毒模拟物PolyI:C转染的猪PK15细胞、甲... 本研究旨在筛选抗猪瘟病毒相关基因,并分析不同猪瘟抗体水平下这些相关基因在大白和长白猪中的表达差异。首先,基于表达谱芯片技术,采用Agilent猪4×44K全基因组表达谱芯片,分析4组试验材料(病毒模拟物PolyI:C转染的猪PK15细胞、甲基化酶抑制剂Aza-CdR转染的PK15细胞、PolyI:C及Aza-CdR共同转染的PK15细胞、无处理的mock细胞),获得试验组间显著性差异表达基因。进而对差异表达基因进行聚类分析和Gene Ontology(GO)分析。结果表明,存在显著差异表达的抗粘液病基因(MX1)和双链RNA依赖的蛋白激酶R基因(PKR)主要参与抗病毒相关的生物学过程。分析2个基因在不同猪瘟抗体水平下大白猪与长白猪外周血中的表达情况发现,2个基因在猪瘟高抗组中的表达量均显著高于未免疫组(P<0.05)。此外,MX1在猪瘟高抗组中的表达存在品种间差异,大白猪中的表达量极显著高于长白猪(P<0.01)。鉴于MX1和PKR基因都是干扰素通路中的重要基因,本研究结果提示,MX1和PKR基因可作为针对抗猪瘟病毒感染的重要候选基因。 展开更多
关键词 表达谱 差异表达基因 抗猪瘟病毒相关基因 polyi:c Aza-cdR
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苦马豆素对小白鼠移植性肿瘤S_(180)、ARS的抑制试验 被引量:19
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作者 杨鸣琦 曹光荣 +2 位作者 李绍君 高峰 王安福 《动物医学进展》 CSCD 1998年第2期26-29,共4页
苦马豆素饮水(3μg/ml)或配合皮下注射(4~12mg/kg/d)对小白鼠移植性肿瘤S180的抑制率为30.57%~40.76%(P<0.01),苦马豆素饮水兼皮下注射并配合干扰素(15000IU/kg)或聚肌胞(... 苦马豆素饮水(3μg/ml)或配合皮下注射(4~12mg/kg/d)对小白鼠移植性肿瘤S180的抑制率为30.57%~40.76%(P<0.01),苦马豆素饮水兼皮下注射并配合干扰素(15000IU/kg)或聚肌胞(100μg/只)对S180的抑制率为59.24%~69.43%(P<0.01),实验认为苦马豆素饮水兼皮下注射并配合聚肌胞是抑制S180较为理想的组合;苦马豆素单独使用或与干扰素或聚肌胞联用对小白鼠移植肿瘤ARS的生命延长率为2.35%~23.53%(P>0.05)。 展开更多
关键词 苦马豆素 干扰素 肿瘤 小白鼠 聚肌胞
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PolyI:C协同IL-15作为小鼠卵透明带3基因疫苗佐剂黏膜免疫效果的观察 被引量:2
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作者 王丹阳 杨雨 +3 位作者 杨秀梅 张富春 吴道澄 张爱莲 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期7-13,共7页
目的:以Toll样受体拮抗物Poly I:C协同细胞因子IL-15作为免疫佐剂,通过滴鼻方式免疫ICR小鼠,对卵透明带3(murine zona pellucida,m ZP3)基因疫苗的免疫增强效果进行观察。方法:将Poly I:C和IL-15单独或协同与用壳聚糖(chitosan,Chi)包裹... 目的:以Toll样受体拮抗物Poly I:C协同细胞因子IL-15作为免疫佐剂,通过滴鼻方式免疫ICR小鼠,对卵透明带3(murine zona pellucida,m ZP3)基因疫苗的免疫增强效果进行观察。方法:将Poly I:C和IL-15单独或协同与用壳聚糖(chitosan,Chi)包裹的m ZP3基因疫苗滴鼻免疫ICR小鼠,ELISA法检测小鼠血清中特异性抗m ZP3抗体和生殖道黏液、肺洗液中s Ig A的水平,MTT法检测淋巴细胞增殖,小鼠的平均窝仔数和生育率检测抗生育情况,组织学观察小鼠的卵巢病理切片。结果:Poly I:C协同IL-15共同免疫组能够显著提高免疫后小鼠抗m ZP3抗体的水平,促进淋巴细胞的增殖,平均窝仔数和生育率显著降低,小鼠的卵巢发育异常。结论:Poly I:C协同IL-15能够增强m ZP3基因疫苗的免疫效果,并在一定程度上降低小鼠生育率。 展开更多
关键词 polyi:c IL-15 基因疫苗 佐剂
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草鱼eIF-5A的克隆、组织表达和进化分析 被引量:1
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作者 王军花 陈琼 +2 位作者 马梅生 王丽坤 胡成钰 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第8期48-54,62,共8页
【目的】克隆和鉴定草鱼(Ctenopharyngodonidella)的eIF-5A基因,并分析其组织表达和适应性进化。【方法】在克隆草鱼eIF-5A全长cDNA的基础上,利用ORF finder、SMART等在线软件对草鱼eIF-5A的分子特征进行分析,并利用PAML 3.15软件包中... 【目的】克隆和鉴定草鱼(Ctenopharyngodonidella)的eIF-5A基因,并分析其组织表达和适应性进化。【方法】在克隆草鱼eIF-5A全长cDNA的基础上,利用ORF finder、SMART等在线软件对草鱼eIF-5A的分子特征进行分析,并利用PAML 3.15软件包中的密码子替换模型检测eIF-5A的分子适应性进化;RT-PCR分析eIF-5A在草鱼心、脑、肌肉、鳃、脾、肝、肠、肾等组织中的本底表达和Poly I:C诱导表达。【结果】草鱼eIF-5A全长cDNA为2 249 bp,其中包含5′非编码区41 bp,3′非编码区1 743 bp;最大开放阅读框为465 bp,编码1个由155个氨基酸残基组成的蛋白质;草鱼eIF-5A分子质量为16.856 ku,等电点pI为5.18,N端含有eIF-5A家族共有的羧腐胺赖氨酸,C端包含一段富含亮氨酸的结构域。草鱼eIF-5A与人及其他动物具有较高的同源性,只有少数氨基酸残基发生替换;适应性进化分析也表明,eIF-5A不但具有结构的保守性,还具有功能的保守性;eIF-5A在草鱼心、脑、肌肉、鳃、脾、肝、肠、肾等组织中恒量表达,并且其表达不因Poly I:C的诱导而发生变化。【结论】eIF-5A是一类与细胞分裂和分化密切相关的蛋白质,在生物体中具有多种剪切体,提示eIF-5A对维持细胞生存非常重要;鉴定的草鱼eIF-5A为eIF-5A1,而非eIF-5A2。 展开更多
关键词 真核翻译起始因子5A(eIF-5A) 基因克隆 基因表达 草鱼 polyi:c
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人偏肺病毒感染小鼠肺内Toll样受体表达及PolyI:C对病毒感染的影响 被引量:1
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作者 窦颖 赵耀 +1 位作者 张志勇 赵晓东 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期1-7,共7页
探讨人偏肺病毒感染BALB/c小鼠后肺组织Toll样受体(TLRs)表达变化及PolyI:C对病毒复制的影响。实验小鼠分为hMPV感染组、polyI:C+hMPV组、polyI:C+DMEM组、DMEM对照组,均在滴鼻后1、3、5、7、9和16d处死,取肺组织用于病毒滴度测定、病... 探讨人偏肺病毒感染BALB/c小鼠后肺组织Toll样受体(TLRs)表达变化及PolyI:C对病毒复制的影响。实验小鼠分为hMPV感染组、polyI:C+hMPV组、polyI:C+DMEM组、DMEM对照组,均在滴鼻后1、3、5、7、9和16d处死,取肺组织用于病毒滴度测定、病理检查、通过RT-PCR和实时荧光定量PCR方法检测小鼠肺组织内TLRs mRNA的表达。结果显示:①与hMPV感染组相比,polyI:C+hMPV组小鼠肺内病毒复制水平明显减低,仅在感染后第5d及第7d检测到病毒;病理检查结果亦提示肺部炎症明显减轻。②RT-PCR结果提示:hMPV感染组小鼠与DMEM对照组相比,肺组织内大部分TLRs mRNA表达均升高。③实时荧光定量PCR结果提示:hMPV感染后小鼠肺组织TLR7-8 mRNA增高最为显著,且有时间依赖性;滴鼻后24h,polyI:C+hMPV组TLR3的表达明显升高。提示:人偏肺病毒感染BALB/c小鼠后,可上调小鼠肺组织Toll样受体表达,其中TLR7/8途径可能在启动天然免疫应答中起着重要作用;polyI:C可通过早期活化TLR3,抑制hMPV在小鼠肺内的复制,并减轻肺部炎症。 展开更多
关键词 人偏肺病毒 TOLL样受体 BALB/c小鼠 polyi:c
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聚肌苷酸-聚胞苷酸阻止非肥胖性糖尿病发病机制的研究 被引量:1
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作者 任如枫 王晨 张志利 《中国药物与临床》 CAS 2002年第6期379-382,共4页
目的 观察免疫调节剂聚肌苷酸 聚胞苷酸 (polyI:C)对非肥胖性糖尿病 (NOD)小鼠糖尿病发生和胰岛炎程度的影响以及干预后胰腺细胞Fas和Fas配体 (FasL)的表达变化情况。方法 给 36只 4周龄NOD雌鼠隔日腹腔注射 polyI :C 0 0 5 μg/g ,... 目的 观察免疫调节剂聚肌苷酸 聚胞苷酸 (polyI:C)对非肥胖性糖尿病 (NOD)小鼠糖尿病发生和胰岛炎程度的影响以及干预后胰腺细胞Fas和Fas配体 (FasL)的表达变化情况。方法 给 36只 4周龄NOD雌鼠隔日腹腔注射 polyI :C 0 0 5 μg/g ,共 4周 ;同样方法注射等量的磷酸盐缓冲液 (PBS)作为对照。于 15周时各处死18只小鼠 ,取胰腺组织HE染色进行胰岛炎评分 ,反转录 多聚酶反应 (RT PCR)法检测FasmRNA和FasLmRNA的表达。其余小鼠 2 4周龄时观察发病率。结果 ① 2 4周龄时polyI:C干预组的发病率 11 1% ,明显低于PBS对照组的发病率 72 7% (P <0 0 1)。②polyI :C干预组胰岛炎评分指数明显低于PBS对照组 ,胰岛炎严重程度明显减轻 (P <0 0 1)。③PT PCR检测 polyI :C干预组胰腺FasmRNA表达低于PBS对照组 (P <0 0 1) ,而FasLmRNA表达差异无显著性。结论 polyI :C可以降低NOD小鼠糖尿病的发病率 ,延缓糖尿病的发生 ,减轻胰岛炎的严重程度 ,polyI:C通过抑制胰腺细胞Fas表达从而减少胰岛 β细胞的凋亡 。 展开更多
关键词 聚肌苷酸-聚胞苷酸 非肥胖性糖尿病 发病机制
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杂交石斑鱼干扰素调节因子3(IRF3)基因的克隆及表达分析 被引量:3
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作者 卢晓颖 黄宝松 +6 位作者 马骞 陈刚 王忠良 黄建盛 ERIC AMENYOGBE 谢瑞涛 邓文鑫 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期144-151,共8页
干扰素调节因子家族(IRFs)具有抗病毒、免疫调节功能,干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3,IRF-3)是IRFs家族中的一员,也是免疫相关因子。为了解IRF3基因在杂交石斑鱼(Epinephelus.fuscoguttatus,♀)×清水石斑鱼(E.pol... 干扰素调节因子家族(IRFs)具有抗病毒、免疫调节功能,干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3,IRF-3)是IRFs家族中的一员,也是免疫相关因子。为了解IRF3基因在杂交石斑鱼(Epinephelus.fuscoguttatus,♀)×清水石斑鱼(E.polyphekadion,♂)应对外源病毒刺激的免疫反应,利用cDNA末端快速扩充(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆了杂交石斑鱼IRF3基因,该基因cDNA全长为2 529 bp,包含5'非编码区(5'-UTR)325 bp,3'非编码区(3'-UTR)916 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)1 377 bp,可编码458个氨基酸。氨基酸序列包含N-末端DNA结合区(N-terminal DNA binding region,DBD)(1-108 aa)、1个C-末端干扰素相关区(C-terminal interferon related region,IAD)(255-435 aa)及色氨酸富含区(Tryptophan rich region,SRD)(440-450 aa)3个结构域。系统进化分析结果显示,杂交石斑鱼IRF3与花鲈(Lateolabrax maculatus)IRF3聚为一支,亲缘关系较近。利用实时荧光定量PCR检测IRF3基因在杂交石斑鱼肝、胃、鳃、肠和脾脏等9种组织表达情况,以及在外周血淋巴细胞(Peripheral blood lymphocytes,PBL)的时序性表达情况,结果显示,IRF3基因在9种组织中均有表达,肝、胃和肠中的表达量明显高于其他组织,头肾表达量最低。PBL在PolyI:C刺激1 h后IRF3基因表达量逐渐升高,4 h时表达量达到最大值(约为对照组的9.3倍),8 h后逐渐下降。 展开更多
关键词 杂交石斑鱼 干扰素调节因子3 基因克隆 外周血淋巴细胞 polyi:c
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polyI:C诱导人胎盘滋养层细胞抗HBV感染的体外研究 被引量:1
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作者 资捷 王前 +2 位作者 郑磊 熊石龙 王芳 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2012年第8期1228-1231,共4页
目的:探讨体外polyI:C对人胎盘滋养层细胞乙型肝炎病毒(HBV)感染的作用。方法:将2μg或8μg HBV重组质粒pcDNA3.1(+)-HBV1.3转染人胎盘滋养层细胞Bewo,12 h后以Toll样受体3(TLR3)配体polyI:C处理3天,同时设对照组。采用微粒子酶免疫分析... 目的:探讨体外polyI:C对人胎盘滋养层细胞乙型肝炎病毒(HBV)感染的作用。方法:将2μg或8μg HBV重组质粒pcDNA3.1(+)-HBV1.3转染人胎盘滋养层细胞Bewo,12 h后以Toll样受体3(TLR3)配体polyI:C处理3天,同时设对照组。采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量PCR法分别检测细胞上清液HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平,并以荧光定量RT-PCR和ELISA分别检测细胞TLR3 mRNA表达及细胞上清IFN-β水平。结果:与对照组比较,polyI:C均可显著抑制Bewo细胞HBV复制(P<0.01或0.05),但与2μg HBV重组质粒转染组比较,转染8μg HBV重组质粒组polyI:C对HBV复制的抑制率显著下降(P<0.01),且polyI:C诱导Bewo细胞TLR3 mRNA表达及IFN-β水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:polyI:C可诱导人胎盘滋养层细胞抗HBV感染,但随着HBV感染量的增大,通过下调细胞TLR3 mR-NA表达及IFN-β产生,其抗HBV感染的作用被显著削弱。 展开更多
关键词 polyi:c TOLL样受体3 胎盘 滋养层细胞 乙型肝炎病毒
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Toll样受体3激动剂在疫苗佐剂中的应用进展 被引量:1
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作者 曹晓亚 徐福洲 +6 位作者 郭杰 温彤 苏霞 周宏专 杨兵 崔一芳 郭芳芳 《生物技术进展》 2020年第2期144-151,共8页
模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)在先天免疫系统中起着至关重要的作用,是重要的宿主传感器,可识别入侵病原体所显示的病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP)。PAMP是独立的免疫调节剂,且具... 模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)在先天免疫系统中起着至关重要的作用,是重要的宿主传感器,可识别入侵病原体所显示的病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP)。PAMP是独立的免疫调节剂,且具有多种生化成分和特殊结构,逐渐被认为是许多现代疫苗的关键成分。Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)3激动剂是一种合成的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),能够以与病毒感染相似的模式激活宿主免疫防御的多种通路。当与抗原适当混合时,TLR3激动剂可以用作PAMP-佐剂,以调节和优化抗原特异性免疫应答。基于此,主要讨论了TLR3及其激动剂的作用机制以及TLR3激动剂在疫苗佐剂中的应用进展,以期为动物疫苗的研究提供新的思路。 展开更多
关键词 适应性免疫 佐剂 先天免疫 poly Ic TOLL样受体3
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MUC1蛋白在侵袭性垂体腺瘤表达及其诱导抗肿瘤免疫反应的研究 被引量:4
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作者 马立新 刘志慧 +5 位作者 隋德华 徐文虎 王波 邢海龙 李勐 李泽福 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1250-1255,共6页
目的探讨MUC1蛋白在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中的表达及其诱导的抗肿瘤免疫反应。方法收集滨州医学院附属医院及山东大学齐鲁医院神经外科自2009年3月至2014年12月手术切除的人垂体腺瘤标本86例,其中侵袭性垂体腺瘤42例,非侵袭性垂... 目的探讨MUC1蛋白在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中的表达及其诱导的抗肿瘤免疫反应。方法收集滨州医学院附属医院及山东大学齐鲁医院神经外科自2009年3月至2014年12月手术切除的人垂体腺瘤标本86例,其中侵袭性垂体腺瘤42例,非侵袭性垂体腺瘤44例,采用免疫组化染色、Westernblotting检测标本MUCl蛋白的表达;术前取患者外周全血400mL,分离外周血单个核细胞(PBMC)并诱导培养树突状细胞(DCs),将DCs分为MUCl组、5μg/mLpolyI:C组、25μg,mLpolyI:C组、50μg/mLpolyI:C组、脂多糖(LPS)组、对照组,分别加入100μL 50μg/mL MUCl、5μg/mL polyI:C、25μg/mLpoly I:C、50μg/mLpolyI:C、50μg/mLLPS和100μL溶剂,培养48h后ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子α(TNF—α)、白介素(IL)-1β、IL-6的浓度;将DCs分为PBS对照组、polyI:C组、MUC1+polyI:C组,分别加入100μL PBS、50μg,mLpolyI:C、50μG/mLMUCl+50μg/mL polyI:C,培养48h后流式细胞仪(FCM)检测细胞CD40、CD80、CD83、CD14、组织相容性基因位点抗原DR(HLA—DRl的表达;C57BL/6小鼠24只按随机数字表法分为MUCl组、MUCl+polyI:C、PBS对照组,每组8只,分别在第1、15天皮下注射1mL50汕卧nLMUCl抗原、50μg/mL CMUCl抗原+50μg/mLpolyI:C和PBS。注射后7d取各组小鼠脾细胞(CTL)加入到体外培养的小鼠垂体瘤细胞AtT20中,D-乳酸脱氢酶fD.LDH)释放试剂盒检测各组CTL的杀伤活性。结果侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中MUCl表达阳性率分别为90.4%(38/421、20.5%(9/44),MUCl蛋白在侵袭性垂体腺瘤中表达(2.0353±0.0359)高于非侵袭性垂体腺瘤(0.3488±0.0205),差异有统计学意义(B,0.05);ELISA检测显示MUCl组、5μg/mLpolyI:C组、25μg/mL polyI:C组、50μg/mLpolyI:C组DCs上清液中3种细胞因子的浓度均依次增加,差异有统计学意义(P〈0.05);FCM检测显示PBS对照组、polyI:C组、MUCl+polyI:C组细胞CDl4的表达依次减少,CD40、CD80、CD83、HLA-DR的表达依次增加,差异有统计学意义(P〈0.05)。D-LDH释放试剂盒检测结果显示PBS对照组、MUCl组、MUCl+polyI:C小鼠CTL细胞活性依次增加,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论MUC1蛋白在侵袭性垂体腺瘤中表达较高,MUCl+polyI:C可以有效的诱导抗肿瘤免疫反应.抑制侵袭性垂体腺瘤的进展。 展开更多
关键词 侵袭性垂体腺瘤 MUc1蛋白 polyi:c 树突状细胞
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