PCGF3在口腔鳞状细胞癌中的表达及其对细胞活力和凋亡的影响

目的:探究多梳环指蛋白3(PCGF3)对口腔鳞状细胞癌OSCC细胞活力和凋亡能力的影响及其潜在机制。方法:通过在线公共数据库进行数据下载,分析PCGF3在OSCC中的差异性表达及与病理特征的关联性。选取手术切除的OSCC组织和癌旁组织50对,统计分析PCGF3表达与患者生存率的关系。采用IHC检测标本中的PCGF3的表达水平,并将提取的肿瘤组织及癌旁组织研磨匀浆分析其mRNA表达。通过RT-qPCR和Western blot实验分析OSCC细胞系中PCGF3的mRNA和蛋白表达水平,并进一步分析PCGF3、p-PI3K、p-AKT、cyclin D1和cleaved caspase-3(cl-caspase-3)蛋白表达;此外,通过CCK-8实验和流式细胞术实验分析PCGF3对细胞活力和凋亡活动的影响。最终构建裸鼠皮下瘤模型对上述实验进行验证。结果:UALCAN和TCGA数据库的结果显示,PCGF3在OSCC中高表达,且与病理分期、病理分级、患者的生存率等关联性大。PCGF3在OSCC组织和细胞系中高表达;Western blot结果显示,对OSCC细胞进行敲减和过表达PCGF3后,PCGF3、p-PI3K、p-AKT、cyclin D1和cl-caspase-3蛋白表达分别表达降低和增高;细胞活力和凋亡能力均受影响;sh-PCGF3组裸鼠肿瘤的体积和质量较sh-NC组低,且HE结果显示sh-PCGF3组肿瘤细胞的核异型性少。结论:PCGF3可调控OSCC细胞的活力和凋亡能力,其潜在机制可通过激活PI3K/AKT信号通路参与OSCC细胞的活力和凋亡活动。

Bmi-1在乳腺癌组织中的表达及意义

背景与目的:多梳基因家族的Bmi-1被认为是一种癌基因,在多种肿瘤组织中均有表达,但其与乳腺癌关系的研究国内尚无报道。本研究旨在通过检测中国人乳腺癌组织中Bmi-1的表达,探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化SP法检测58例乳腺癌组织中Bmi-1蛋白的表达情况,并结合患者的临床病理资料分析与其相关性。结果:所检测的58例乳腺癌标本中Bmi-1蛋白强阳性表达48例(82.8%)。统计分析结果发现Bmi-1的强阳性表达与乳腺癌的淋巴结转移及临床分期密切相关(P<0.05),而与肿瘤大小及ER、PR、c-erbB-2、VEGF等临床病理特征无显著性相关(P>0.05)。结论:Bmi-1蛋白在乳腺癌组织中的高表达与肿瘤进展相关,预示肿瘤具有高度转移潜能;Bmi-1可能成为预测乳腺癌高度转移的新分子标志物。

人脑胶质瘤中BMI1的表达及其意义

目的:研究基因BMI1在中枢神经系统最常见的肿瘤-胶质瘤组织中的表达情况,并探讨其表达水平与胶质瘤的恶性程度及发生、发展的关系。方法:使用荧光定量实时PCR技术检测基因BMI1在34例各级别胶质瘤手术切除组织及10例正常对照组织中的表达。同时对34例各级别胶质瘤组织及10例正常对照脑组织使用免疫组化的方法检测BMI1蛋白的表达。结果:实时PCR的结果显示,基因BMI1在对照脑组织、Ⅱ级胶质瘤、Ⅲ级胶质瘤及Ⅳ,级胶质瘤组织中的表达相对值分别为0.655、2.65、5.62及5.43。胶质瘤组中BMI1的表达水平显著高于对照组(P=0.001).恶性胶质瘤组(Ⅲ级与Ⅳ级胶质瘤)中BMI1的表达水平显著高于良性胶质瘤(Ⅱ级胶质瘤),JP=0.015,Ⅲ级胶质瘤组与Ⅳ级胶质瘤组之间未发现存在差异(P=0.902);免疫组化结果显示,BMI1蛋白在对照脑组织、Ⅱ级胶质瘤、Ⅲ级胶质瘤和Ⅳ级胶质瘤组织中的表达阳性率分别为10%、25%、100%和100%。各级别胶质瘤组织中BMI1蛋白的阳性表达率显著高于正常脑组织对照组(P=0.001),而且在恶性胶质瘤组织中BMI1蛋白的阳性表达率显著高于良性胶质瘤(P=0.000)。结论:无论是在mRNA水平还是在蛋白水平上,BMI1在各级别脑胶质瘤标本中的表达水平均明显高于正常脑组织对照,且恶性胶质瘤中BMI1的表达要明显高于良性胶质瘤。BMI1在胶质瘤的发生、发展过程中有重要作用。

Polycomb蛋白复合体对细胞衰老的表观遗传学调控

细胞衰老在表观遗传学上的调控越来越受到人们的关注.Polycomb蛋白复合体(polycombgroup proteins)通过对组蛋白的修饰,尤其是甲基化修饰发挥对靶基因的沉默作用,并因此广泛参与到发育、增殖、分化以及肿瘤发生等重要生命过程.目前,有一系列的研究报道了polycomb的各组份参与了细胞衰老的调控.本文对polycomb发挥基因沉默作用机制的最新研究进展进行了归纳总结,并以衰老过程中的重要分子p16为重点,详细介绍了polycomb调节p16表达,影响细胞衰老进程的机制.研究表明,多种polycomb成员同时结合在p16INK4a基因座,它们的结合表现出相互依赖的同时又有各自的作用.这为进一步深入理解细胞衰老提供了表观遗传学的证据.

PcG蛋白EZH2在胃癌发生发展过程中的表达及其临床意义

背景：EZH2是表观遗传调控因子PcG蛋白的核心成分，可通过催化组蛋白H3氨基末端第27位赖氨酸发生三甲基化而抑制靶基因表达。研究发现EZH2在前列腺癌、乳腺癌、胃癌等恶性肿瘤组织中表达增高，并与肿瘤进展和预后差相关。目的：探讨EZH2在胃癌发生、发展中的作用和临床意义及其与细胞增殖的关系。方法：应用免疫组化技术检测32例正常胃黏膜、34例慢性非萎缩性胃炎、33例慢性萎缩性胃炎、40例异型增生和69例胃癌组织中EZH2、Ki-67的表达情况，分析EZH2与Ki-67和胃癌临床病理特征之间的相关性。结果：EZH2在正常胃黏膜和慢性胃炎组织中主要表达于腺颈部，在正常胃黏膜、慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎和异型增生组织中，其表达水平逐渐增高（P〈O．05），异型增生与胃癌组织间则无明屁差异（P=0．678）。各病变组织中，EZH2与Ki-67的表达水平均呈正相关（P〈0．01），所有组织中EZH2总体表达水平显著高于Ki-67（P〈0．01）。胃癌组织中EZH2的表达水平与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期相关（P〈0．05）。结论：EZH2过表达是胃癌发生过程中的早期分子事件，其可能通过促进胃腺上皮增殖参与了胃癌的发生、发展过程。

Polycomb Group蛋白复合体与干细胞的发育调控

Polycomb group(PcG)蛋白是表观遗传调控因子中一个非常重要的家族,参与维持特定基因的沉默,在调控干细胞增殖与分化的过程中起着非常重要的作用。PcG蛋白可通过形成不同的蛋白复合物引起不同的染色质修饰来调控干细胞的生命活动,其复合物主要包括两个重要的表观遗传调控因子:PRC1(polycomb repressive complex 1)和PRC2(polycomb repressive complex 2)。为了阐明PcG蛋白在干细胞增殖与分化中的调控作用,本文分别从PcG蛋白复合体的组成、在靶基因中的定位、募集和在干细胞发育中的调控等方面进行了综述,旨在为进一步研究干细胞的发育调控机制提供理论依据。

siRNA靶向沉默PcG蛋白EZH2对人胃癌细胞株MKN45增殖和侵袭力的影响

背景：PcG蛋白是一组转录抑制因子，其核心成分EZH2在胃癌组织中表达增高，并与胃癌的进展相关。目的：应用RNA干扰（RNAi）技术研究EZH2对人胃癌细胞株MKN45增殖和侵袭力的影响，从细胞水平探讨EZH2参与胃癌发生的机制。方法：使用EZH2小干扰RNA（siRNA）转染MKN45细胞，以实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测EZH2mRNA和蛋白表达，CCK-8（Cell Counting Kit-8）实验检测细胞增殖情况，流式细胞仪分析细胞周期．MatrigelTM侵袭实验检测细胞侵袭力。结果：EZH2siRNA能有效抑制MKN45细胞的EZH2mRNA和蛋白表达。与阴性对照siRNA组相比，EZH2siRNA组MKN45细胞增殖抑制率为14．7％（P＜0．05），侵袭能力显著降低[穿过Transwell小室膜细胞数：（38．5±3．4）个／HPF对（92．7±9．7）个／HPF，P＜0．05），细胞周期阻滞于G0／G1和G2／M期。结论：EZH2siRNA可抑制人胃癌细胞的增殖和侵袭力，证实EZH2通过促进细胞增殖和侵袭在胃癌发生中发挥作用。

家蚕多梳蛋白家族基因BmPsc的全长序列克隆及表达分析

多梳蛋白(polycomb group,PcG)基因Bmi-1(B cell-specific MLV integration site-1)与人类造血干细胞以及多种肿瘤干细胞的维护相关,Bmi-1蛋白具有典型的N端Ring结构,通过结合核小体并抑制其重塑以实现抑制关键基因转录,具有沉默目的基因的功能。Bmi-1在昆虫中的同源基因为Psc(posterior sex combs)。采用RACE技术获得家蚕Psc基因(BmPsc)全长4 084 bp的序列。该基因位于家蚕第4号染色体上,是一个单外显子基因,ORF为3 291 bp,编码1 096个氨基酸,蛋白质分子质量121 kD,等电点(pI)为9.83;同源序列比对发现BmPsc与赤拟谷盗(Tribolium castaneum)的Psc基因序列有58%的相似度,与果蝇(Drosophila melanogaster)的Psc基因序列仅有34%的相似度;氨基酸序列分析显示BmPsc具有保守的N端Ring结构。利用qRT-PCR检测家蚕5龄第3天幼虫各组织以及5龄各时期幼虫血液中BmPsc基因的表达水平,发现BmPsc在各组织均有表达,在精巢以及卵巢中的表达明显较高,其次是翅原基(含造血器官),在循环血液中也有较高表达;在5龄各时期幼虫血液中的表达呈一定规律性,于蜕皮后的5龄第2天以及进入变态前的5龄第6天出现表达峰值,而在5龄中期(第4～5天)为表达低谷。研究结果为进一步阐释该基因在细胞水平以及个体水平对干细胞分化的抑制作用奠定了基础。

NSPc1相互作用蛋白的筛查及其与组蛋白乙酰化酶HBO1相互作用的验证

目的寻找多梳家族(polycomb group)蛋白NSPc1的体内可能的相互作用蛋白。方法通过酵母双杂交实验筛选与NSPc1相互作用的蛋白。使用Pull-down实验,Co-IP实验以及细胞内荧光共定位实验进一步证实双杂交中发现的相互作用。结果分别以NSPc1蛋白的全长、N端和C端作为诱饵筛查人3月胎脑cDNA文库,发现N端诱饵可以与组蛋白乙酰化转移酶HBO1相互作用,该相互作用在体内外实验中都得到了验证。结论组蛋白乙酰化酶HBO1是NSPc1的相互作用蛋白之一,该相互作用可能参与NSPc1对靶基因转录的表观抑制活性的发挥。

多蜂房蛋白BMI-1在子宫内膜癌中的表达及意义

目的研究BMI-1在子宫内膜癌中的发生、发展、浸润及转移中的作用及其对临床诊断、治疗以及预后评估的意义。方法运用免疫组化方法研究正常子宫内膜、增生症组子宫内膜及子宫内膜癌组织中BMI-1的表达。结果 BMI-1在子宫内膜癌组中的表达显著高于正常子宫内膜组织和增生症子宫内膜组织(分别为106.31±11.696、199.47±9.151、143.60±9.361,P<0.05),子宫内膜癌组织中的BMI-1的表达与手术-病理分期、肌层浸润深度及是否出现淋巴结转移有关,而对于组织学分级、病理类型及雌、孕激素受体方面则无统计学意义。结论 BMI-1与子宫内膜癌的发生、发展、浸润及转移密切相关。

CBX8蛋白与肿瘤相关性研究进展

色素框同源蛋白8(chromobox protein homolog 8,CBX8)是PcG家族蛋白PRC1复合体的核心组成部分,在细胞增殖、衰老、维持干细胞自我更新和全能性及肿瘤发生中发挥重要作用.目前研究发现CBX8在多种恶性肿瘤中表达增高,并与肿瘤的进展及预后密切相关,已成为当前肿瘤领域的研究热点.本文就当前CBX8在肿瘤中的研究作一综述.

转录抑制因子RYBP的研究进展

Pc G蛋白(polycomb group proteins)是多细胞有机体中一类重要的表观遗传抑制因子,其功能是维持细胞分化和个体生长发育过程中基因的正确表达。转录抑制因子RYBP(Ring1 and YY1 binding protein)是Pc G蛋白家族成员,可以与Ring1A、YY1和M33等其他Pc G蛋白家族成员相互作用,通过形成蛋白质复合体的形式行使功能。本文简述RYBP基因在小鼠(Mus musculus)和果蝇(Drosophila melanogaster)等模式生物中的表达特征,综述RYBP在基因转录调控、干细胞分化、细胞凋亡和恶性肿瘤发生中的作用及其转录抑制机制,以期较为详细了解RYBP的研究进展,为鳞翅目昆虫家蚕(Bombyx mori)RYBP的研究提供借鉴。

神经系统多梳蛋白1在神经系统来源细胞中的表达及促增殖作用

目的检测神经系统多梳蛋白1(NSPc1)基因在神经系统来源的细胞中亚细胞定位及表达水平,探索NSPc1基因表达水平与神经系统来源的细胞增殖能力的关系。方法使用细胞免疫荧光与激光共聚焦技术检测人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系中内源性的NSPc1蛋白及外源过表达的绿色荧光蛋白-NSPc1融合蛋白的亚细胞定位情况。使用流式细胞术检测NSPc1基因过表达对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系细胞周期的影响。使用实时荧光定量聚合酶链式反应方法检测正常人脑组织与16例不同世界卫生组织分级的人胶质瘤样品中NSPc1基因的mRNA表达水平差异。结果 NSPc1蛋白主要定位于SH-SY5Y细胞的细胞核。过表达NSPc1显著增加SH-SY5Y细胞处于S期的细胞比例,而减少G2期的比例。人胶质瘤样品中NSPc1基因的mRNA平均表达水平高于正常人脑组织。结论NSPc1基因的高表达能促进神经系统来源的细胞增殖,NSPc1高表达可能与胶质瘤恶性度相关。

人NSPc1慢病毒过表达系统的建立与鉴定

目的建立并鉴定人NSPc1慢病毒过表达系统,以便应用过表达技术进一步研究NSPc1功能。方法设计针对人NSPc1cDNA序列的带酶切位点引物,PCR扩增获得双链DNA后,与酶切后的pLenti6-TO-EGFP-TRIP载体片段进行连接、转化,酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒,转染293T细胞并用Western blot检测质粒过表达效果。用293T细胞制备慢病毒颗粒,感染293T细胞后收集细胞全蛋白,用Western blot检测慢病毒系统过表达效果。结果证实人NSPc1正确插入慢病毒载体,人NSPc1慢病毒过表达质粒及相应病毒颗粒能有效过表达NSPc1。结论人NSPc1慢病毒表达系统的成功建立,为应用过表达技术研究人NSPc1功能打下了基础。

NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的构建并鉴定NSPc1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统进一步研究NSPc1的功能。方法设计针对NSPc1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的pLentiLox3.7载体片段进行连接、转化。用双酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒并转染293T细胞,收集细胞全蛋白用Western检测RNAi效果。结果重组克隆经酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,Western检测证实设计的三条RNA干扰序列有效敲低了293T细胞中的内源性NSPc1。结论 3个NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的成功构建为应用基于慢病毒系统的RNAi技术来研究NSPc1基因的功能打下了基础。

Polycomb Group蛋白复合体与植物春化作用

Polycomb Group(PcG)蛋白能形成Polycomb Repressive Complex 1(PRC1)和PRC2等复合体,通过一个保守且表观遗传的机制调节基因表达并控制动植物的发育。拟南芥中由VERNALIZATION2参与形成的PRC2复合体(VRN2-PRC2)在春化过程中能对主要开花抑制基因FLOWER LOCUS C(FLC)的染色质进行组蛋白甲基化修饰,形成H3K27me3(组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化)等转录抑制标记,从而抑制FLC转录,促进开花。虽然麦类作物的春化机理与拟南芥有较大差异,但最近的研究表明麦类作物春化过程也受PcG蛋白调控。文章对拟南芥PcG蛋白介导的春化调节机制进行综述,期望能对植物尤其是麦类作物的春化机理研究提供资料。

CBX与肿瘤关系的研究进展

CBX蛋白(Chromobox protein homolog)是多梳蛋白家族(Polycomb group proteins,Pc G)的重要成员,多梳蛋白家族是一种表观遗传调控复合物,以聚合转录抑制复合体PRCs的形式存在,可以通过修饰染色质对靶基因进行转录抑制,在调控细胞分化、衰老、死亡和肿瘤发生、转移中发挥着重要作用。CBX蛋白家族是经典型PRC1的重要成员,包括5个成员,CBX2、CBX4、CBX6、CBX7和CBX8,越来越多的证据表明它在肿瘤发生、发展中扮演重要角色。本篇综述阐述了目前关于CBX家族成员在肿瘤中的研究进展。

CBX7与恶性肿瘤关系研究进展

表观遗传基因沉默是基因功能丧失的重要机制,在肿瘤的发生、发展过程中与基因突变密切相关。多梳基因家族蛋白(PcG)调控表观遗传介导的转录沉默,参与胚胎、成体干细胞的功能维持和恶性肿瘤的发展。色素框蛋白7(CBX7)属于PcG家族,广泛表达于多种恶性肿瘤中,且CBX7表达水平与恶性肿瘤的生物学特性和预后显著相关,并且可以增强肿瘤的治疗效果。但CBX7在不同肿瘤中的生物学作用有很大差异,能否成为恶性肿瘤预后判断指标及治疗靶点仍需要进一步研究。

EZH2与哺乳动物生殖研究新进展

组蛋白甲基化转移酶同源序列增强子(enhancer of zeste homolog,EZH)是由EZH基因编码的一种组蛋白赖氨酸甲基化转移酶,有EZH1和EZH2两种亚型,属于多梳家族(Polycomb Group,PcG)蛋白成员。PcG家族的成员相互结合形成多聚蛋白复合物参与基因转录调控、DNA甲基化,促进异染色质的形成从而发挥沉默基因的功能、维持胚胎细胞的正常增殖与分化。本文主要介绍EZH2的基本功能及其在哺乳动物生殖和相关疾病中的研究新进展。

CBX4与HOXA5在慢性粒细胞白血病中的表达及相互作用研究

Polycomb group complex(Pc G)作为发挥转录抑制作用的重要表观遗传调控复合物,参与发育、衰老以及肿瘤发生等重要病生理过程。Pc G成员众多,分为PRC1与PRC2两种复合物,各组分间功能既协同,又不失特性。PRC1中的CBX4独特的结构域使其功能尤为特殊。近年发现,作为一类造血干细胞恶性克隆性疾病,白血病中常伴有Pc G基因的异常表达或者突变。本研究通过q PCR发现,在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者外周血白细胞中存在CBX4的表达明显下调,而Pc G经典靶基因HOX家族中的HOXA5则表现为上调。给予伊马替尼(Imatinib)治疗后,二者均向相反方向恢复至正常人的表达水平,并且CBX4的表达水平与CML的经典分子标志物BCR-ABL1融合基因有较好的相关性。上述结果提示,CBX4可以作为CML潜在的预后标志物。为了进一步揭示CBX4与HOXA5是否存在相互作用关系,本文通过双荧光素酶实验证实,CBX4能通过HOXA5的启动子而负调控其表达。本研究发现,CBX4与HOXA5在CML中存在负相关的异常表达,且证明CBX4可作为HOXA5的负调控因子。