虎杖苷通过调节癌基因表达对小鼠骨肉瘤生长的抑制作用

目的 探讨虎杖苷通过调节癌基因对小鼠生长骨肉瘤生长的抑制作用。方法 58只小鼠皮下注射U2OS细胞悬液建立骨肉瘤荷瘤小鼠,随机分为模型组、虎杖苷低剂量组、虎杖苷中剂量组、虎杖苷高剂量组和顺铂组。虎杖苷低、中和高剂量组小鼠分别腹腔注射虎杖苷50、100和200 mg/kg;顺铂组小鼠腹腔注射顺铂2 mg/kg, 1次/天,连续5 d;模型组小鼠腹腔注射等量生理盐水。测定肿瘤质量,计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤细胞形态;TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡率;qRT-PCR法检测c-Myc、p53和PTEN mRNA水平,蛋白印迹法检测c-Myc、p53、PTEN、Bax和Bcl-2蛋白水平。结果 模型组肿瘤细胞形态正常,核大深染,细胞膜完整;虎杖苷低、中和高剂量组以及顺铂组细胞核染色不同程度变淡,细胞核固缩,细胞密度降低,细胞出现坏死,细胞核出现分裂,其中以顺铂组和虎杖苷高剂量组最为显著。与模型组比较,虎杖苷低、中和高剂量组以及顺铂组肿瘤质量、p53和c-Myc mRNA水平、Bcl-2、p53和c-Myc和蛋白相对表达量降低,且顺铂组<虎杖苷高剂量组<虎杖苷中剂量组<虎杖苷低剂量组;而细胞凋亡率、PTEN mRNA以及Bax和PTEN蛋白相对表达量水平升高(P<0.05)。与虎杖苷低剂量组比较,虎杖苷中剂量组和高剂量组以及顺铂组抑瘤率升高,且顺铂组>虎杖苷高剂量组>虎杖苷中剂量组(P<0.05)。结论 虎杖苷通过促进抑癌基因表达,抑制促癌基因表达,调节细胞凋亡相关蛋白,促进癌细胞凋亡,抑制骨肉瘤生长。

壮药痛风立安颗粒质量标准研究

目的:建立壮药痛风立安颗粒的质量标准。方法:用薄层色谱法(TLC)鉴别处方中的粉萆薢、虎杖、甘草;用高效液相色谱法(HPLC)测定马钱苷、异嗪皮啶、虎杖苷的含量。结果:TLC鉴别特征斑点明显,阴性样品无干扰。HPLC中马钱苷在3.6~653.4 ng(r=1.0000)范围内线性关系良好,异嗪皮啶在10.5~156.9 ng(r=1.0000)范围内线性关系良好,虎杖苷在65.0~974.3 ng(r=1.0000)范围内线性关系良好;马钱苷、异嗪皮啶、虎杖苷加样回收率分别为100.50%(RSD%=1.21)、97.38%(RSD%=1.30)、97.22%(RSD%=1.28)。结论:所建立的薄层色谱鉴别和含量测定方法专属性强,重复性好,可用于壮药痛风立安颗粒的质量控制。

HPLC同时测定心脑联通胶囊中葛根素、虎杖苷和野黄芩苷的含量

目的利用梯度洗脱,建立高效液相色谱法测定心脑联通胶囊中葛根素、虎杖苷和野黄芩苷含量的方法。方法采用高效液相色谱法。Diamonsil ODS柱(4.6mm×200mm,5μm),流动相为乙腈(A)和0.05%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,流速1.0m L.min-1,检测波长336nm。结果葛根素的线性范围为0.0232～0.1856g.L-1(r=0.9995),平均回收率为100.0%,RSD=1.3%,虎杖苷的线性范围为0.0152～0.1216g.L-1(r=0.9996),平均回收率为98.7%,RSD=0.9%,野黄芩苷的线性范围为0.0046～0.0369g.L-1(r=0.9998),平均回收率为100.4%,RSD=0.9%。结论本方法操作简便,测定结果准确可靠,可用于心脑联通胶囊的质量控制。

虎杖苷对幽门螺旋杆菌脂多糖诱导的胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞凋亡及TNF-α水平影响

目的研究虎杖苷对幽门螺旋杆菌脂多糖诱导的胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞凋亡及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)水平影响。方法用脂多糖灌胃构建胃黏膜损伤大鼠模型,给予虎杖苷灌胃处理,对各组大鼠对胃黏膜损伤指数进行评分。取各组大鼠胃黏膜组织,用ELISA法测定TNF-α、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)水平,用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(supev oxide dismutase,SOD)含量,TUNEL测定细胞凋亡,Western blot法测定剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)蛋白水平。结果脂多糖灌胃处理后的大鼠胃黏膜损伤指数增加,TNF-α、IL-8水平升高,SOD水平下降,MDA水平也升高,细胞凋亡率升高,Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高,与未用脂多糖处理的大鼠相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。虎杖苷处理后的胃黏膜损伤大鼠的胃黏膜损伤指数降低,TNF-α、IL-8水平降低,SOD水平升高,MDA水平下降,细胞凋亡率降低,Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平降低,与胃黏膜损伤大鼠模型相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论虎杖苷可以减少幽门螺旋杆菌脂多糖诱导的胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞凋亡,减少炎症因子合成,降低氧化损伤。

虎杖标准汤剂质量标准研究

目的:制备20批来自不同产地的虎杖标准汤剂,测定其出膏率,并对虎杖苷和大黄素进行含量测定,计算其转移率,建立HPLC指纹图谱分析方法,并进行质量标准研究。方法:以Agilent ZORBAX Extend-C18为色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)为流动相;检测波长为254nm,测定饮片的大黄素含量;以乙腈-水(23∶77)为流动相;检测波长为306nm,测定饮片的虎杖苷含量;并采用HPLC指纹图谱技术,建立其HPLC指纹图谱,同时利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)软件对20批虎杖标准汤剂指纹图谱进行分析。结果:通过对20批虎杖标准汤剂进行测定,虎杖苷和大黄素转移率范围分别为19.2%~42.7%和1.8%~3.2%,出膏率范围为14.9%~19.0%;通过指纹图谱分析,确定了10个共有峰,并对20批虎杖标准汤剂分别进行了相似度评价,其相似度均大于0.95。通过对比共有峰的保留时间,指认出3种成分,分别为虎杖苷(峰2)、白藜芦醇(峰4)、大黄素(峰10)。结论:本研究中虎杖标准汤剂的制备方法规范,20批样品的指纹图谱相似度高,其方法精密度、稳定性和重复性良好,可为虎杖配方颗粒的质量控制提供参考。

不同产地虎杖中各成分含量的比较

目的：比较不同产地虎杖中各成分的含量。方法：采用梯度洗脱的高效液相色谱法测定虎杖苷、白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素及大黄素甲醚的含量,色谱柱为C18柱,检测波长为306nm,流速为1.0m L/min,柱温为30℃;采用显色法测定虎杖中总黄酮含量。结果虎杖苷进样量在0.1452~1.4520μg（r=0.9999）范围内、白藜芦醇在0.01525~0.1525μg（r=0.9998）、白藜芦醇苷在0.01253~0.6265μg（r=0.9998）、大黄素在0.02358~0.2358（r=0.9998）范围内、大黄素甲醚在0.004892~0.2446μg（r=0.9999）范围内线性关系良好,各成分平均回收率分别为98.2%（RSD=1.0%,n=3）、98.5%（RSD=2.0%,n=3）、99.0%（RSD=1.5%,n=3）、100.2%（RSD=1.9%,n=3）、99.7%（RSD=1.0%,n=3）;总黄酮的测定以芦丁为对照,测定波长500nm,在7.24~43.44g/L范围内线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率为98.5%（RSD=1.5%,n=3）。结论：不同产地虎杖中各成分的含量是有差别的。

不同产地虎杖中虎杖苷和总黄酮含量比较

目的比较不同产地虎杖中虎杖苷和总黄酮的含量。方法以高效液相色谱法测定虎杖苷含量,色谱柱为Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-1%磷酸（50∶50）,检测波长为306 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃;以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH为显色反应体系,采用紫外分光光度法测定虎杖中总黄酮含量。结果虎杖苷进样量在0.169 8-3.396 0μg（r=0.996 6）范围内与峰面积呈良好线性关系,平均回收率为98.57%,RSD为1.82%（n=5）;对于总黄酮的测定,以芦丁为对照,测定波长为500 nm,其质量浓度在7.48-44.86 g/L范围内与吸光度线性关系良好（r=0.999 8）,平均回收率为97.95%,RSD为0.73%（n=5）。结论所建立的方法简便、准确、重复性好。不同产地虎杖中虎杖苷和总黄酮的含量有差异。

舒筋风湿酒质量标准的含量检测指标研究

目的建立HPLC测定舒筋风湿酒中虎杖苷和大黄素两种有效成份含量的方法。方法虎杖苷和大黄素含量检测采用Agilent HPLC,Agilent C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm),分别以乙腈-水(23∶77)和甲醇-0.1%磷酸溶液(82∶18)为流动相,流速1m L·min^(-1),检测波长分别为306nm和254nm。结果虎杖苷和大黄素的线性范围分别为6.29~201.40μg·m L^(-1)(R^2=0.99994)和10.41~330.00μg·m L^(-1)(R2=0.99997),平均回收率分别为99%和98%。结论虎杖苷和大黄素的含量检测方法简单,结果准确、可靠,可以作为该酒剂质量控制指标。

一测多评法测定虎杖中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素及大黄素甲醚的含量

目的:在建立虎杖中4种成分同步测定方法的基础上,建立一测多评法的方法学考察模式,验证该方法在虎杖中应用的可行性和技术适应性。方法:以虎杖为研究对象,建立大黄素与虎杖苷、白藜芦醇、大黄素甲醚的相对校正因子,并用该校正因子进行虎杖苷、白藜芦醇、大黄素甲醚的含量计算,实现一测多评;同时采用外标法测定饮片中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素及大黄素甲醚的含量,并比较计算值与实测值的差异。结果:11批虎杖饮片中3种成分含量的计算值与实测值的RSD<3%,表明两者无显著差异。结论:以虎杖苷、白藜芦醇、大黄素和大黄素甲醚同步测定的一测多评法控制虎杖饮片的质量是可行的、准确的。

不同干燥工艺对参蒲盆炎颗粒浸膏中芍药苷、虎杖苷和延胡索乙素的影响

目的从指标性化学成分量变化的角度,考察不同干燥方式和条件对参蒲盆炎颗粒浸膏质量的影响,为干燥工艺的优选提供方法依据。方法参蒲盆炎颗粒浸膏分别采用带式真空干燥、喷雾干燥、板式减压干燥、常压干燥4种不同方式进行干燥,测定各干燥样品含水量及芍药苷、虎杖苷和延胡索乙素的量,分别采用方差分析、聚类分析与主成分分析方法比较各组样品中3种指标成分量的差异、聚类情况,确定与干燥工艺参数相关性最大的化学成分。结果不同干燥方式样品含水量差异小,芍药苷、虎杖苷、延胡索乙素的量存在较大差异,以带式真空干燥样品中各成分量最高,喷雾干燥次之,100℃常压干燥样品最低。其中,带式真空干燥、喷雾干燥对样品指标性成分破坏较小且聚为一类,而板式减压干燥、常压干燥对样品指标成分破坏较大,并各自聚为一类。芍药苷、虎杖苷和延胡索乙素的量对4种干燥工艺的参数变化均较为敏感,在干燥过程中应重点监测这几类物质的量变化。结论干燥方式和条件的改变对参蒲盆炎颗粒浸膏质量的影响不容忽视,指标性化学成分定量测定可作为评价参蒲盆炎颗粒浸膏干燥工艺优选的一种快速检测方法。

HPLC法同时测定乙肝扶正胶囊中6种化学成分的含量

目的:建立同时测定乙肝扶正胶囊中多种指标成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇-0.1%醋酸水溶液(梯度洗脱),柱温为30℃,没食子酸、虎杖苷、白藜芦醇与二苯乙烯苷的检测波长均为320nm,肉桂醛和丹参酮ⅡA的检测波长均为254nm。结果:没食子酸、虎杖苷、二苯乙烯苷、白藜芦醇、肉桂醛、丹参酮ⅡA的质量浓度分别在0.12200～0.85400、0.00588～0.04116、0.01360～0.09520、0.00208～0.01456、0.04352～0.30460、0.00640～0.04480mg·mL-1范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r>0.9990);平均加样回收率分别为99.9%、99.8%、102.3%、100.5%、101.2%、100.1%,RSD分别为2.5%、1.6%、1.5%、2.1%、1.9%、1.4%(n均为6)。结论:本方法专属性强、灵敏、快速,结果准确、可靠,可用于乙肝扶正胶囊的质量控制。

RP-HPLC同时测定不同根龄虎杖根中虎杖苷和白藜芦醇

目的:建立反相高效液相色谱法同时测定不同根龄虎杖根中虎杖苷和白藜芦醇含量。方法:采用Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相甲醇-1.0%磷酸水溶液(50∶50),流速0.8 mL.min-1,检测波长319 nm,柱温为30℃。结果:虎杖苷和白藜芦醇的进样量分别在0.716～7.160μg(r=0.999 6)和0.740～7.400μg(r=0.999 8)与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为99.7%,98.5%。结论:本方法快速简便,重复性好,专属性强,可作为虎杖根的质量控制方法。