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产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌聚合酶交联螺旋反应快速检测方法的建立
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作者 王璊 孟祥宇 +1 位作者 程静 庞梦婷 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期716-722,共7页
为建立一种快速检测产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌(emetic Bacillus cereus)的新型、敏感且可视化的聚合酶交联螺旋反应(PCLSR)方法,本实验根据该菌结构性合成酶基因cesB设计特异性引物,通过对反应体系和反应条件的优化,初步建立了检测emetic ... 为建立一种快速检测产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌(emetic Bacillus cereus)的新型、敏感且可视化的聚合酶交联螺旋反应(PCLSR)方法,本实验根据该菌结构性合成酶基因cesB设计特异性引物,通过对反应体系和反应条件的优化,初步建立了检测emetic B.cereus的PCLSR方法。结果显示,PCLSR方法在64℃反应50 min、dNTP浓度为0.3 mol/L、Bst聚合酶浓度为8 U/管时获得最佳扩增效果。以5株emetic B.cereus和12株临床常见菌的DNA作为模板,经本研究建立的该PCLSR方法检测,结果显示,PCLSR法能有效检测5株emetic B.cereus,而对其他相关细菌的检测结果均为阴性,表明该方法特异性较强。将emetic B.cereus 10倍倍比稀释(1×10^(7)cfu/mL~1×10^(0)cfu/mL)后采用该PCLSR法、LAMP法和荧光定量PCR(qPCR)方法检测,结果显示,PCLSR法和qPCR方法的检测限均达1×10^(2)cfu/mL,LAMP法的检测限为1×10^(3)cfu/mL,表明本研究建立的PCLSR法的敏感性较高。采用“国标”中的细菌培养法、PCLSR法、qPCR法及环介导等温扩增(LAMP)法同时检测50份人工污染emetic B.cereus的饲料及灭菌牛奶样品,结果显示,PCLSR法与qPCR法检测emetic B.cereus的阳性率为30%(15/50),阴性率为70%(35/50),二者的符合率均达100%;细菌培养法和LAMP法检测emetic B.cereus的阳性率为24%(12/50),阴性率为76%(38/50),二者与PCLSR法的总符合率均为80%。综上所述,本研究建立的PCLSR法具有较强的特异性、较高的敏感性,且不需要复杂设备和昂贵试剂即可在短时间内完成对emetic B.cereus的检测,该方法的建立为基层部门对emetic B.cereus的检测及该菌的流行病学调查提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 聚合酶交联螺旋反应 检测
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Gamma-aminobutyric acid A receptor and N-methyl-D-aspartate receptor subunit expression in rat spiral ganglion neurons 被引量:2
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作者 Xiaolan Tang Meng Gao Shuang Feng Jiping Su 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2010年第13期1020-1024,共5页
BACKGROUND: Gamma-aminobutyric acid A (GABAA) and N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors are significant receptors in the central nervous system. An understanding of GABAA and NMDA receptor expression in spiral ga... BACKGROUND: Gamma-aminobutyric acid A (GABAA) and N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors are significant receptors in the central nervous system. An understanding of GABAA and NMDA receptor expression in spiral ganglion neurons (SGN) provides information for the functional role of these receptors in the auditory system. OBJECTIVE: To investigate mRNA expression of GABAA receptor (GABAAR) and NMDA receptor (NMDAR) subunits in the rat SGN. DESIGN, TIME AND SETTING: This in vitro, molecular biological study was performed at the Laboratory of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, Guangxi Medical University, China from July 2007 to May 2008. MATERIALS: Reverse Transcriptase Kit and Taq DNA polymerase were purchased from Fermentas Burlington, ON, Canada; GABAAR and NMDAR primers were purchased from Shanghai Sangon, Shanghai, China. METHODS: SGN from 3-5 day postnatal Wistar rats was collected for primary cultures, mRNA expression of GABAAR and NMDAR subunits in the SGN was determined by reverse transcription polymerase chain reaction. MAIN OUTCOME MEASURES: Expression levels of GABAAR and NMDAR subunits were determined by quantitative analysis. RESULTS: GABAAR subunits (αl 6, β1 3, and y1 3) and NMDAR subunits (NR1, NR2A, NR2B, NR2C, NR2D, NR3A, and NR3B) were detected in the SGN. In α subunit genes of GABAAR, α1 and α3 expression was similar (P 〉 0.05) and greater than the other subunits. Of the β subunit genes, β1 subunit mRNA levels were greater than β2 and β3. Of the y subunit genes, y2 subunit mRNA levels were greater than y1 and y3. NR1 mRNA expression was the greatest of NMDAR subunits. CONCLUSION: GABAAR subunits (α1 6, β1-3, and y1-3) and NMDAR subunits (NR1, NR2A, NR2B, NR2C, NR2D, NR3A, and NR3B) were expressed in the rat SGN. Through comparison of GABAAR and NMDAR subunit expression, possible GABAAR combinations, as well as highly expressed subunit combinations, were estimated, which provided information for pharmacological and electrophysiological characteristics of GABAAR in the auditory system. 展开更多
关键词 spiral ganglion neuron gamma-aminobutyric acid A receptor N-methyl D-aspartate receptor reverse transcription polymerase chain reaction neural regeneration
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结核分枝杆菌聚合酶螺旋反应检测方法的建立及效果评价 被引量:2
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作者 马晓光 石洁 +6 位作者 徐行勇 朱岩昆 王少华 郑丹薇 孙国清 孙定勇 苏茹月 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2020年第10期1121-1127,共7页
目的建立聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)检测结核分枝杆菌的方法并评价效果。方法针对结核分枝杆菌插入序列IS6110设计引物进行PSR检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,加入Bst DNA聚合酶的RM2X反应液中,在荧光定量PCR仪... 目的建立聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)检测结核分枝杆菌的方法并评价效果。方法针对结核分枝杆菌插入序列IS6110设计引物进行PSR检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,加入Bst DNA聚合酶的RM2X反应液中,在荧光定量PCR仪上于63℃反应45 min,通过荧光信号进行检测。通过对引物序列进行优化,筛选出最佳引物序列,并对其检测特异性和最低检出限进行评估。于2019年5—8月间从郑州市第六人民医院连续收集200例肺结核患者痰液样本(同一患者收集3份),对痰标本进行痰涂片、固体痰培养和PSR检测。以痰培养结果为参照,评价PSR对结核病患者的检测效能。结果通过引物序列优化,筛选出一套对结核分枝杆菌检测的PSR引物,使用该引物进行PSR的最低检出限可达到10~3菌落形成单位(CFU)/ml;检测特异性实验表明该方法与15株非结核分枝杆菌无交叉反应。200例肺结核患者中,痰涂片检测阳性48例,阳性检出率为24.0%(48/200);痰培养检测阳性83例,阳性检出率为41.5%(83/200);PSR方法检测阳性87例,阳性检出率为43.5%(87/200)。以痰培养结果为标准,PSR检测结核病的敏感度和特异度分别为96.4%(80/83)、94.0%(110/117),阳性预测值为92.0%(80/87),阴性预测值为97.3%(110/113),与痰培养检测方法基本一致(Kappa值为0.898)。结论PSR检测适用于结核分枝杆菌的快速筛查。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 聚合酶螺旋反应 诊断 实验室技术和方法
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猫细小病毒聚合酶螺旋反应检测方法的建立及应用 被引量:3
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作者 刘金波 魏衍全 +3 位作者 薛惠文 邢小勇 孙鹏 张勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1068-1073,共6页
为建立一种快速、简便检测猫细小病毒(FPV)的聚合酶螺旋反应(PSR)恒温扩增方法,本研究参考GenBank中登录的FPV基因序列(MG924893.1),以其保守基因NS1为靶基因设计并合成分别用于普通PCR和PSR方法的2对特异性引物,以及一对加速引物,经反... 为建立一种快速、简便检测猫细小病毒(FPV)的聚合酶螺旋反应(PSR)恒温扩增方法,本研究参考GenBank中登录的FPV基因序列(MG924893.1),以其保守基因NS1为靶基因设计并合成分别用于普通PCR和PSR方法的2对特异性引物,以及一对加速引物,经反应条件优化,建立了检测FPV的PSR方法。优化结果显示,体系内包含6 mmol/LMgSO_(4)、0.8 mol/L甜菜碱,67℃恒温反应45 min结束反应,然后加入终浓度为20×SYBRGreenI染料,肉眼在可见光下观察颜色变化即可判定检测结果。利用该方法检测猫冠状病毒(FCoV)、猫诺如病毒(FNoV)cDNA和FPV,结果显示除了FPV外,与其他病原均无交叉反应,特异性强;将提取的FPV基因组DNA 10倍倍比稀释,利用建立的PSR方法进行敏感性试验,结果显示,该方法对FPV基因组的最低检测限为6.75×10^(3)拷贝/μL,比普通PCR方法检测下限低10倍,敏感性可接受;利用本方法进行组内组间重复试验,结果显示组内与组间重复性试验检测结果一致,均为阳性,重复性好。利用建立的PSR方法对110份疑似感染FPV的猫粪便样品进行检测,结果显示PSR方法与常规PCR方法的检测结果基本一致,二者的总符合率为98.18%,表明本研究建立的PSR方法可用于检测临床样品。本研究首次建立的FPVPSR方法仅需2对引物在67℃下完成,无需复杂的变温仪器,反应后加入染料肉眼即可判定结果,整个过程在45 min内结束,设计引物简单,操作步骤少,用时较短,适合市县级宠物医院FPV感染的快速诊断。 展开更多
关键词 猫细小病毒 聚合酶螺旋反应 恒温扩增 快速诊断
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实时定量聚合酶螺旋反应定量检测变形链球菌方法的建立 被引量:1
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作者 丁良 李芝香 +2 位作者 汪慧渊 肖刚 郭青玉 《生物技术通讯》 CAS 2017年第4期519-523,共5页
目的:建立实时定量检测口腔内变形链球菌的实时定量聚合酶螺旋反应(PSR)方法。方法:针对变形链球菌的gtf B基因设计4套引物,通过实时浊度法和显色法两种方法判断结果。结果:从4套引物中筛选出最佳引物,并确定最佳温度为65℃;进一步实验... 目的:建立实时定量检测口腔内变形链球菌的实时定量聚合酶螺旋反应(PSR)方法。方法:针对变形链球菌的gtf B基因设计4套引物,通过实时浊度法和显色法两种方法判断结果。结果:从4套引物中筛选出最佳引物,并确定最佳温度为65℃;进一步实验表明采用最佳引物能特异性地检测变形链球菌,与13种其他病原核酸无交叉反应,敏感性达10拷贝/μL。结论:建立了实时定量检测变形链球菌的PSR方法,该方法具有简单快速、特异性强、敏感性高的特点,为实时定量检测变形链球菌提供了新技术。 展开更多
关键词 聚合酶螺旋反应 变形链球菌 龋病 实时定量
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猪源沙门氏菌聚合酶螺旋反应方法的建立与应用 被引量:2
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作者 胡瑞鸿 从秋实 李艳飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1227-1232,共6页
为建立一种快速、高效地检测猪源沙门氏菌的聚合酶螺旋反应(PSR)方法,本研究针对猪源沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因设计3套特异性扩增引物,通过优化孵育温度、dNTPs和Mg2+浓度、Bst聚合酶浓度和反应时间初步建立了猪源沙门氏菌PSR方法。... 为建立一种快速、高效地检测猪源沙门氏菌的聚合酶螺旋反应(PSR)方法,本研究针对猪源沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因设计3套特异性扩增引物,通过优化孵育温度、dNTPs和Mg2+浓度、Bst聚合酶浓度和反应时间初步建立了猪源沙门氏菌PSR方法。结果显示:该方法可以特异性扩增2株猪沙门氏菌,而对其它12株病原菌无扩增,特异性较强;以沙门氏菌标准株CMCC 50094为模板,并经一系列的稀释,对PSR、LAMP和qRCR方法的敏感性进行检测和比较,结果显示PSR方法和qPCR方法对菌液的最小检出量均为5×101 cfu/mL,敏感性为LAMP方法的10倍,敏感性较高;临床样品检测结果显示,经PSR方法在132份仔猪腹泻样本中共检测出猪源沙门氏菌阳性样品18份,与常规培养方法鉴定结果一致,检出率均为13.64%。本研究建立的PSR法为猪源沙门氏菌的快速检测提供了一种可行方法。 展开更多
关键词 沙门氏菌 聚合酶螺旋反应 等温扩增技术 临床检测
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食源性致病菌核酸检测技术研究进展 被引量:11
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作者 钟宜科 邹大阳 +4 位作者 赵彤 花晓丹 冯洋 刘威 王永霞 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2020年第12期218-224,共7页
近年来,食源性疾病的发病率逐年升高,已成为全球范围内的重大公共卫生问题。致病菌广泛存在于各种食品中,快速检测食源性致病菌,对提供安全的食物和预防食源性疾病具有重要的现实意义。由于传统食源性致病菌检测方法耗时耗力,因此建立... 近年来,食源性疾病的发病率逐年升高,已成为全球范围内的重大公共卫生问题。致病菌广泛存在于各种食品中,快速检测食源性致病菌,对提供安全的食物和预防食源性疾病具有重要的现实意义。由于传统食源性致病菌检测方法耗时耗力,因此建立食源性致病菌的快速检测技术尤为重要。食源性致病菌的核酸检测技术具有简便、耗时短、特异性强、灵敏度高等优点,已被广泛应用于食源性致病菌的检测。着重介绍近年来用于食源性致病菌检测的核酸检测技术,包括常规聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、多重聚合酶链式反应(multiplex-PCR,mPCR)、实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,qPCR)、环介导等温扩增反应(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)、重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA),并对其优缺点,以及适用范围进行总结,旨在为开发出简单、快速、有效、准确的检测方法提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 食源性致病菌 快速检测 聚合酶链式反应 环介导等温扩增反应 聚合酶螺旋反应 重组酶聚合酶扩增
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基于可视化聚合酶交联螺旋反应快速检测金黄色葡萄球菌方法的建立 被引量:2
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作者 冯瑜菲 袁超文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期737-742,共6页
为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌(S.aureus)的新型可视化方法,本研究以S.aureus耐热核酸酶基因(nuc)为靶序列设计特异性引物,对其反应条件进行优化,建立聚合酶交联螺旋反应(PCLSR)可视化检测方法,结果显示,PCLSR法在反应温度62℃,孵... 为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌(S.aureus)的新型可视化方法,本研究以S.aureus耐热核酸酶基因(nuc)为靶序列设计特异性引物,对其反应条件进行优化,建立聚合酶交联螺旋反应(PCLSR)可视化检测方法,结果显示,PCLSR法在反应温度62℃,孵育时间60 min、dNTPs浓度为3.0 mmol/L、Bst-DNA聚合酶浓度为10 U/管时扩增效果最佳。提取14株金黄色葡萄球菌和9株非金黄色葡萄球菌基因组为模板,利用该方法进行特异性试验,结果显示,PCLSR法能有效检测到14株S.aureus,而对其他9株非S.aureus检测结果均为阴性,特异性良好。10倍倍比稀释S.aureus菌液(1×10^(7)cfu/m L~1×10^(0)cfu/m L)后提取基因组作为模板,进行敏感性试验,结果显示,PCLSR法与荧光定量PCR法具有相同的敏感性,检测下限均达到1×10^(2)cfu/m L,而环介导等温扩增(LAMP)敏感性为1×10^(3)cfu/m L,可见该PCLSR敏感性较高。利用该PCLSR、LAMP、细菌培养法和荧光定量PCR法同时检测46份人工污染的生猪肉、灭菌纯牛奶样品中金黄色葡萄球菌,以评价该方法的检测性能,结果显示,PCLSR与荧光定量PCR检测结果与样品符合率为100%,而细菌培养法和LAMP法与样品的符合率仅均为91.67%,可见该PCLSR可以用于临床样品的检测。本研究为动物疾病预防和食品卫生检验等领域快速检测S.aureus提供了新型检测方法。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 聚合酶交联螺旋反应 可视化 快速检测
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逆转录聚合酶螺旋反应快速检测蜱传脑炎病毒方法的建立及初步评价 被引量:1
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作者 闫美田 郑雨桐 万楠 《国际检验医学杂志》 CAS 2022年第16期1935-1939,1944,共6页
目的建立一种等温条件下蜱传脑炎病毒(TBEV)的现场快速检测的方法。方法针对TBEV NS1基因设计一对特异性螺旋引物,在等温条件下建立逆转录聚合酶螺旋反应(RT-PSR)检测方法,优化反应条件,对特异性和灵敏性进行分析,应用全血模拟标本评价R... 目的建立一种等温条件下蜱传脑炎病毒(TBEV)的现场快速检测的方法。方法针对TBEV NS1基因设计一对特异性螺旋引物,在等温条件下建立逆转录聚合酶螺旋反应(RT-PSR)检测方法,优化反应条件,对特异性和灵敏性进行分析,应用全血模拟标本评价RT-PSR检测的符合率。结果成功建立并优化了TBEV的RT-PSR检测方法,RT-PSR法在61℃的温度下只需一种酶可一步实现逆转录和扩增,55 min可完成TBEV的检测,并可通过SYBR GreenⅠ直接肉眼判读结果,该方法特异性强,灵敏性高,最低检测限为107.341×10^(-6)ng/μL,是PCR的100倍。全血模拟标本符合率为100%,灵敏性比RNA标准品低10倍。结论RT-PSR方法具有良好的特异性和灵敏性,可用于基层对TBEV的现场快速检测。 展开更多
关键词 蜱传脑炎病毒 逆转录聚合酶螺旋反应 快速检测
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聚合酶螺旋反应检测肺炎克雷伯菌与临床样本评价
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作者 王泉 马瑞瑛 +4 位作者 杨婷 张亚丽 许苗 撒玉玲 陈清波 《生物化工》 2021年第4期38-42,共5页
目的:筛选聚合酶螺旋反应(Polymerase Spiral Reaction,PSR)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌的引物并进行初步应用。方法:基于肺炎克雷伯氏菌外膜蛋白基因设计PSR反应引物并进行筛选,对菌株特异性及最低检出限进行评估;于2019年9... 目的:筛选聚合酶螺旋反应(Polymerase Spiral Reaction,PSR)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌的引物并进行初步应用。方法:基于肺炎克雷伯氏菌外膜蛋白基因设计PSR反应引物并进行筛选,对菌株特异性及最低检出限进行评估;于2019年9—12月从新疆医科大学第八附属医院连续收集270份疑似呼吸道感染患者的痰液样本,对痰标本进行细菌培养鉴定,PCR及实时荧光定量PCR检测。分别以痰培养及实时荧光定量PCR检测结果为参考,评价PSR检测痰液样本中肺炎克雷伯菌的检测效能。结果:实验结果表明该方法最低检出限可达到10^(2) CFU/mL,与其他18种常见致病菌无交叉反应。270例疑似呼吸道感染患者的临床样本痰培养法检出肺炎克雷伯菌阳性54例,PSR方法检测阳性68例。对比痰培养结果,PSR检测痰液样本中肺炎克雷伯菌的敏感度和特异度分别为96.30%(52/54),92.59%(200/216)。结合测序结果,其阳性预测值与阴性预测值分别为97.1%(68/70)及99.01%(200/202),与痰培养检测结果一致性较好(Kappa值为0.81)。此外,对比荧光定量PCR法结果,其敏感度、特异度分别为100%(62/62)和96.63%(201/208)。结论:PSR在痰液样本呈现了较高的检测性能,适合使用在临床上对肺炎克雷伯菌的快速检测。 展开更多
关键词 呼吸道感染 聚合酶螺旋反应 肺炎克雷伯菌 快速检测
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聚合酶螺旋反应快速检测甲型H1N1流感病毒 被引量:6
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作者 马文 董德荣 +8 位作者 邹大阳 刘宁伟 贺晓明 敖大 杨展 黄思妺 徐雅晴 刘威 黄留玉 《军事医学》 CSCD 北大核心 2017年第6期449-452,共4页
目的建立利用聚合酶螺旋反应(PSR)快速检测甲型H1N1流感病毒的方法。方法针对甲型H1N1流感病毒的特异性HA基因设计了6套引物,通过实时浊度法和显色法两种方法判断结果。结果与结论从6套引物中筛选出了最佳引物,并确定最佳温度为65℃;进... 目的建立利用聚合酶螺旋反应(PSR)快速检测甲型H1N1流感病毒的方法。方法针对甲型H1N1流感病毒的特异性HA基因设计了6套引物,通过实时浊度法和显色法两种方法判断结果。结果与结论从6套引物中筛选出了最佳引物,并确定最佳温度为65℃;进一步实验表明最佳引物能特异性地检测H1N1病毒,与14种其他呼吸道病原核酸无交叉反应,敏感性达到100拷贝,与PCR敏感性一致。所建立的方法简单快速、特异性强、敏感性高,适合现场和基层单位应用推广。 展开更多
关键词 聚合酶螺旋反应 核酸恒温扩增 甲型H1N1流感病毒 快速检测
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基于聚合酶螺旋反应技术快速检测铜绿假单胞菌 被引量:3
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作者 朱渊 戴云山 +3 位作者 王俊虎 王萍 吕凤霞 顾秋琴 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1246-1256,共11页
【背景】铜绿假单胞菌是一种重要的水源和食源性致病菌,可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。加强铜绿假单胞菌的快速检测,对保障食品安全具有重要的意义。【目的】建立聚合酶螺旋反应(Polymerasespiralreaction,PSR)方... 【背景】铜绿假单胞菌是一种重要的水源和食源性致病菌,可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。加强铜绿假单胞菌的快速检测,对保障食品安全具有重要的意义。【目的】建立聚合酶螺旋反应(Polymerasespiralreaction,PSR)方法快速检测铜绿假单胞菌。【方法】针对铜绿假单胞菌外毒素A调控基因——ETA基因(toxA)设计引物,通过引入加速引物、优化反应条件和筛选颜色指示剂,建立快速检测铜绿假单胞菌的PSR方法,并研究方法的特异性、敏感性和可靠性。【结果】建立的方法在等温65°C条件下,40 min内可完成PSR反应,且可通过钙黄绿素和羟基萘酚蓝直接判读结果。方法特异性强、灵敏度高,最低检出限分别为20 CFU/mL细菌和1.011 5 pg/μL基因组DNA。可视化PSR方法检测包装饮用水来源的分离菌株与传统生化方法检测结果一致。【结论】研究建立的可视化PSR方法为铜绿假单胞菌DNA快速检测提供了一种可行的有效手段。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 聚合酶螺旋反应 等温扩增 DNA快速检测
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建立可视化甲型H1N1流感病毒的聚合酶螺旋反应检测方法 被引量:3
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作者 施琦 邹大阳 +6 位作者 杨宇 慈颖 张乔 聂聪 张永江 刘威 王静 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2021年第4期241-245,共5页
目的为了满足现场监测和实验室快速检测的需求,建立基于聚合酶螺旋反应(PSR)技术的甲型H1N1流感病毒核酸可视化检测方法。方法基于甲型H1N1流感病毒PSR反应体系,利用Bst DNA聚合酶链置换活性,通过添加p H指示剂、调整引物浓度,优化可视... 目的为了满足现场监测和实验室快速检测的需求,建立基于聚合酶螺旋反应(PSR)技术的甲型H1N1流感病毒核酸可视化检测方法。方法基于甲型H1N1流感病毒PSR反应体系,利用Bst DNA聚合酶链置换活性,通过添加p H指示剂、调整引物浓度,优化可视化PSR检测方法。结果可视化PSR方法可在60 min内得到结果,最佳反应温度为66℃,最低检测限为120拷贝/μl,其他常见的呼吸道病毒如呼吸道合胞病毒、人腺病毒、人偏肺病毒,以及甲型H3N2、H5N1、H7N9流感病毒均未发现特异扩增。结论可视化PSR扩增方法为甲型H1N1流感病毒的现场快速检测提供了新途径。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 聚合酶螺旋反应 等温扩增 可视化
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鼠疫菌聚合酶螺旋反应等温扩增方法的建立 被引量:4
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作者 张乔 刘威 +5 位作者 高玉峰 田丽 施琦 杨燕 张晓龙 王静 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2020年第2期77-81,共5页
目的用聚合酶螺旋反应(PSR)建立快速、灵敏、特异的鼠疫菌等温扩增方法。方法根据鼠疫菌F1基因设计引物,利用Bst DNA聚合酶链置换活性,通过添加pH指示剂和核酸荧光染料SYBR GreenⅠ,建立可视化PSR检测方法,并用于鼠脏器、血液、环境样... 目的用聚合酶螺旋反应(PSR)建立快速、灵敏、特异的鼠疫菌等温扩增方法。方法根据鼠疫菌F1基因设计引物,利用Bst DNA聚合酶链置换活性,通过添加pH指示剂和核酸荧光染料SYBR GreenⅠ,建立可视化PSR检测方法,并用于鼠脏器、血液、环境样本中鼠疫菌的检测。结果建立的PSR方法可在40 min内得到结果,最佳反应温度为64℃,最低检测限为100拷贝/μl,与14株非鼠疫菌无交叉反应。可成功检测模拟阳性样本。结论建立的PSR等温扩增反应为鼠疫菌的快速检测提供了新方法。 展开更多
关键词 聚合酶螺旋反应 鼠疫菌 等温扩增
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聚合酶螺旋反应双指示法检测结核分枝杆菌的研究
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作者 施琦 刘威 +5 位作者 张乔 贺晓明 慈颖 邹大阳 张永江 王静 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2021年第2期77-80,共4页
目的建立聚合酶螺旋反应双指示法检测结核分枝杆菌,满足现场监测和快速检测的需求。方法基于结核分枝杆菌聚合酶螺旋反应体系,利用Bst DNA聚合酶链置换活性,在同一反应体系中加入核酸荧光染料EveGreen和pH显色剂两种指示物,用实时荧光... 目的建立聚合酶螺旋反应双指示法检测结核分枝杆菌,满足现场监测和快速检测的需求。方法基于结核分枝杆菌聚合酶螺旋反应体系,利用Bst DNA聚合酶链置换活性,在同一反应体系中加入核酸荧光染料EveGreen和pH显色剂两种指示物,用实时荧光法和可视显色法同时判断反应结果,用于痰样本中结核分枝杆菌的检测。结果建立的双指示法对结核分枝杆菌核酸最低检测浓度均为10 pg/μl,可在65 min内得到结果,敏感性和特异性良好,与金黄色葡萄球菌、福氏志贺菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌均无交叉反应。结论建立的聚合酶螺旋反应双指示检测法为结核分枝杆菌的快速检测提供了新方法。 展开更多
关键词 聚合酶螺旋反应 双指示剂 结核分枝杆菌
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逆转录-聚合酶螺旋反应检测结核分枝杆菌的应用
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作者 于昌萍 于彬 +3 位作者 蔡为为 刘佰成 于淼 王东亮 《现代生物医学进展》 CAS 2020年第5期879-884,共6页
目的:建立并应用逆转录-聚合酶螺旋反应(RT-PSR)快速检测结核分枝杆菌(MTB)。方法:针对结核分枝杆菌16S rRNA基因设计特异性引物,通过反应条件的优化初步建立结核分枝杆菌的RT-PSR扩增方法;随后,用2株结核分枝杆菌和11株其他致病菌进行R... 目的:建立并应用逆转录-聚合酶螺旋反应(RT-PSR)快速检测结核分枝杆菌(MTB)。方法:针对结核分枝杆菌16S rRNA基因设计特异性引物,通过反应条件的优化初步建立结核分枝杆菌的RT-PSR扩增方法;随后,用2株结核分枝杆菌和11株其他致病菌进行RT-PSR、RT-LAMP和荧光定量PCR法的特异性与敏感性试验;利用RT-PSR法、罗氏培养法、RT-LAMP法和荧光定量PCR法对83名结核病患者的痰液标本进行诊断对比。结果:成功建立并优化了MTB的RT-PSR检测方法,与RT-LAMP法相比,两者特异性均为100%;RT-PSR法的检测灵敏性为1 CFU/mL,为荧光定量PCR法的10倍,且检测下限可达0.1 pg/μL;临床患者痰液样本检测结果表明,与罗氏培养法相比,RT-PSR法和RT-LAMP法的阳性率分别为98.80%(P<0.05)和96.39%(P<0.05),差异均具有统计学意义。结论:与传统检测法相比,RT-PSR法对于诊断临床样本中的MTB具有良好的特异性和敏感性,适合基层医疗单位防治MTB的推广和应用。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 聚合酶螺旋反应 临床样本 快速检测
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