人外周血白细胞雄激素受体基因表达的研究

目的 :研究雄激素受体 (AR)基因在正常人外周血白细胞中的表达。方法 :采用 RT- PCR和 Northern印迹方法检测健康成年人外周血白细胞 AR m RNA的表达。结果 :用 RT- PCR方法得到了 390 bp的 AR c DNA片段 ;用 Northern印迹方法检测出长约 9.4kb的 AR m RNA,与文献报道的人前列腺组织 AR m RNA大小相同。结论 :两种方法均证实了 AR在人外周血白细胞中的表达 ;该结果为研究雄激素影响白细胞功能的机制及探讨病理情况下

颈动脉硬化斑块环氧化物酶-2表达及其干预的实验研究

目的探讨通心络对兔颈动脉粥样硬化斑块环氧化物酶-2(COX-2)及Ⅰ型膜相关前列腺素E合成酶(mPGES-1)表达的影响。方法采用32只雄性新西兰大白兔,其中8只为正常对照组(1组),另24只建立兔颈动脉粥样硬化性狭窄的动物模型。将模型兔随机分为颈动脉狭窄无干预组(2组)、塞来昔布治疗组(3组)、通心络治疗组(4组),每组各8只。药物干预2周后取狭窄段颈动脉及对侧相应段的颈动脉,行逆转录聚合酶链反应及Western印记(Westernblot)检测颈动脉斑块药物干预后COX-2及mPGES-1表达。结果2、3、4组颈动脉粥样硬化模型兔斑块的COX-2mRNA、mPGES-1mRNA及蛋白表达上调水平,与1组比较差异有显著性意义(P<0.05),3组、4组较2组下调水平差异有显著性意义(P<0.05),3组较4组下调更显著(P<0.05)。结论通心络可能有益于抗颈动脉粥样硬化斑块形成的作用。

原发生精障碍者Y染色体AZF区域微缺失基因诊断

目的对男性不育患者Y染色体AZF区域微缺失进行基因诊断。方法采用多重PCR-凝胶电泳技术对23例原发性无精症患者、28例原发性少精症患者和7例正常生育男性对照进行Y染色体微缺失检测。结果23例原发性无精子症患者中,5例发生了Y染色体微缺失,缺失率为21.7%,在28例少精症患者中,有6例发生缺失,其缺失率为21.4%。其中无精症(AZFa)区sY86缺失1例(2.0%);AZFb区sY127缺失1例(2.0%),sY134缺失1例(2.0%),sY127和sY134同时缺失1例(2.0%);AZFc区sY254缺失1例(2.0%),sY254和sY255同时缺失4例(8.0%)。7例正常生育男性均未检测到Y染色体微缺失。结论男性不育患者Y染色体AZF区域6个STS位点微缺失与男性原发性无精症和少精症密切相关,采用多重PCR技术进行微缺失分析简便、快速、准确,值得推广应用。

分子信标荧光定量PCR在肺结核早期诊断及疗效评价中的初步应用

目的探讨分子信标荧光定量PCR在肺结核早期诊断及疗效评价中的应用价值。方法采集2010年3—7月间在彭州市CDC结核病防治所门诊就诊患者的痰标本382份,其中初诊疑似肺结核患者的痰标本305份,肺结核患者随访痰标本77份,用分子信标荧光定量PCR法和抗酸染色法检测Mtb。结果382份痰标本抗酸染色法、分子信标荧光定量PCR法检测总阳性率分别为12.6%(48/382)、42.4%(162/382),分子信标荧光定量PCR法阳性率显著高于抗酸染色法,差异有统计学意义(χ2=74.5,P<0.001)。结论分子信标荧光定量PCR较抗酸染色法具有更高的灵敏度,不仅提高了肺结核早期诊断的检出率,还能间接反映药物疗效,在肺结核防治工作中具有重要意义。

O_3浓度升高对麦田土壤氨氧化细菌、氨氧化古菌和硝化细菌数量的影响

硝化作用在氮循环过程中至关重要,包括氨氧化作用和亚硝酸盐氧化作用,通过氨氧化反应和亚硝酸盐氧化反应将N素转化为植物可利用的NO3-形态。利用开顶式臭氧气室(OTCs,open-top chambers)试验平台,通过大田模拟熏气试验,结合Real-timePCR探讨大气O3浓度升高对麦田土壤氨氧化细菌(AOB)、氨氧化古菌(AOA)及硝化细菌(NOB)数量的影响。结果表明,AOB、AOA和NOB对O3胁迫的反应不一样,AOB基因拷贝数基本上随着O3浓度的升高呈现出降低的趋势,而AOA和NOB基因拷贝数随O3浓度的升高变化不明显。冬小麦拔节期,当O3浓度为40、80、120nmol·mol-1时,20～40cm土层的AOB基因拷贝数分别比对照处理降低39.8%、51.2%和59.4%。AOB和NOB基因拷贝数灌浆期多于收获期,0～10cm土层多于10～20cm。AOA基因拷贝数随季节的变化不大。O3胁迫可通过影响AOB、AOA和NOB的数量和活性来影响土壤的硝化反应,从而影响土壤的氮素循环过程。

Galectin-3在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的研究Galectin-3在食管鳞癌中的表达情况,初步探讨其与食管鳞癌临床病理特征的关系。方法①用S-P免疫组化法检测80例食管鳞癌石蜡标本中Galectin-3蛋白的表达情况;②用RT-PCR法检测分析Galectin-3mRNA在36例胃镜下切取的新鲜食管鳞癌组织中的表达情况。结果①Galectin-3蛋白在食管癌组织、正常食管组织中的表达具有明显差异(P<0.05);在分化程度低、浸润程度深及发生淋巴结转移的食管鳞癌组织中的表达明显高于分化程度高、浸润程度浅及未发生淋巴结转移的食管癌组织(P<0.05)。②Galectin-3mRNA阳性表达率在食管鳞癌组织中为77.8%(28/36),在远癌正常组织中为13.9%(5/36),结果具有显著性差异(P<0.05);并且在分化程度低、浸润程度深及发生淋巴结转移的食管鳞癌组织中的表达明显高于分化程度高、浸润程度浅及未发生淋巴转移的组织,差异亦有显著性(P<0.05)。结论Galectin-3的差异表达,可能与食管鳞癌的发生、发展及转移有关。

TGF-β1、CTGF基因的过表达与早期糖尿病肾病关系的研究

目的:探讨转化生长因子(TGF)-β1、结缔组织生长因子(CTGF)在早期糖尿病肾病(DN)中的作用。方法:建立链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组(NC)和糖尿病组(DM)。每周测量体质量,每2周测定血糖,于实验第8周末处死大鼠后测定相关的生化指标及肾功能指标,同时留取肾皮质液氮冻存,应用实时定量PCR方法检测肾皮质TGF-β1、CTGF的mRNA水平,用免疫组化法检测肾小球中TGF-β1和CTGF的蛋白表达情况,并进行半定量分析。结果:与NC组相比,DM组血尿素氮、24h尿量及尿微量蛋白、肾脏肥大指数明显升高(P<0.01),但血肌酐明显下降(P<0.01)。实时定量PCR及免疫组化结果显示,DM组较NC组TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白表达量均明显增高。结论:TGF-β1与CTGF在肾病早期表达明显升高,对于评价DN进程具有重要意义。

水稻细菌性褐条病病原的鉴定

为明确从褐条病稻苗上分离出来的病原细菌并与西瓜果斑病菌相区分,对该病原特性进行了研究。分离获得6株褐条病致病菌,其中4株经主要细菌学特性、菌落形态、致病性、Biolog、脂肪酸分析(FAME)、电镜观察、Nested-PCR鉴定及与3株水稻细菌性褐条病标准菌株和2株西瓜果斑病标准菌株的比较,证实了该病是由单极鞭革兰氏阴性细菌Aci-dovorax avenae ssp.avenae引起的。FAME将水稻细菌性褐条病菌误鉴定为西瓜果斑病菌,而用Biolog和nested-PCR鉴定能得到准确的鉴定结果。

一种新型人TNF表达质粒的构建及在大肠杆菌中的高表达

在详细分析ＴＮＦ结构及前人有关ＴＮＦ结构与功能关系研究的基础上，应用ＰＣＲ技术构建了一种新型人肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）分子的编码基因，并将该编码基因插入表达质粒，转化大肠杆菌，通过温度诱导获得了高表达，活性测定的结果表明，新型人ＴＮＦ对Ｌ９２９细胞的细胞毒活性较原型人ＴＮＦ升高了１０￣３数量级．

内脂素基因多态性与2型糖尿病的关系

目的探讨内脂素(visfatin)rs11977021、rs12537455、rs2110385位点单核苷酸多态性与2型糖尿病易感性的关系。方法收集陕西西安地区汉族人群192例受试对象,其中106例单纯2型糖尿病(T2DM)患者和86例健康对照者,采用标准化的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RLFP)方法,分别检测内脂素(visfatin)rs11977021/DdeⅠ、rs12537455/AluⅠ和rs2110385/AluⅠ基因型并进行比较。结果 rs2110385位点的T等位基因频率和GT基因型频率在T2DM组均高于健康对照组(分别为28.3、14.0和14.2、7.0,P均<0.05);两组的rs11977021位点和rs12537455位点C、T等位基因及基因型频率分布均无统计学差异(P>0.05);单倍型分析显示T-C-T和T-T-T单倍型在T2DM组均显著高于健康对照组(分别为0.066、0.026和0.029、0.012,P均<0.05)。结论 Visfatin基因rs2110385位点在陕西西安汉族地区人群中存在遗传变异,其rs2110385多态性位点的T等位基因可能与T2DM的发病风险有一定的关系。

基质金属蛋白酶-9基因多态性与河南汉族人群慢性心力衰竭的相关性

目的：探讨基质金属蛋白酶－9（MMP－9）基因多态性与河南汉族人群慢性心力衰竭（CHF）发病的相关性。方法采用限制性扩增片段长度多态性的方法检测116例CHF患者（ CHF组）和100例健康体检者（对照组）MMP－9基因－1562C＞T（rs3918242）、R279Q（rs17576）、P574R（rs2250889）多态性，根据酶切后的片段数目和大小判读等位基因和基因型；病例对照分析并运用SHEsis软件分析实验数据，判断MMP－9基因上3个SNPs是否与CHF有关。结果 MMP－9基因－1562C＞T位点的等位基因频率两组间差异无统计学意义（ P＞0．05），携带T等位基因个体患CHF的风险是C等位基因的1．25倍（OR＝1．254）；CHF组MMP－9基因 R279Q的AG基因型频率增加（P＜0．05）。 MMP－9基因P574R位点等位基因及基因型频率在两组间差异无统计学意义（P＞0．05）；MMP－9基因3个SNPs组成的单体型共推断出7种，其中单体型ACT和GCT 频率在CHF组和对照组中差异有统计学意义（P＜0．05），CHF组和对照组比较，单体型ACT OR＝2．823（95％CI 1．062～7．501）＞1，说明单体型ACT更易增加CHF患病风险。结论在河南汉族人群中，MMP－9基因－1562C＞T位点的等位基因T和R279Q位点AG基因型以及3个SNPs组成的单体型ACT、GCT可能增加CHF患病的风险性，而P574R位点可能与CHF的易感性无关。

AGS细胞系中12-LOX的表达及其抑制剂对细胞增殖的影响

目的:探讨人胃癌细胞系AGS中12-脂肪氧化酶(12- lipoxygenase,12-LOX)的表达情况及其抑制剂黄芩甙元(baicalein)对AGS细胞增殖的影响. 方法:AGS在含100 mL/L小牛血清+100 kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中常规培养.用RT-PCR 检测12-LOX在AGS中的表达情况,分别以20,40, 80 μmol/L baicalein干预细胞,用四氮唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法在24,48,72 h 测量细胞吸光度,检测baicalein对细胞增殖的影响:用倒置显微镜和电子显微镜进行形态观察;通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色法检测细胞凋亡指数. 结果:AGS细胞中存在12-LOXmRNA表达;MTT显示baicalein大致呈时间、剂量依赖性抑制细胞增殖(各组间P<0.01,除外40 μmol/L 24 h组与48 h组);AGS细胞存活率最高为82.1%,最低为38.4%.倒置显微镜下可见baicalein干预后的细胞皱缩,部分细胞胞体变圆,脱离贴壁状态,成为悬浮细胞;电镜下可见baicalein干预后的细胞出现了凋亡的特征性改变:核染色质边集及凋亡小体形成;AO-EB染色法显示除0μmol/L组不同时间点细胞凋亡指数无显著差异外(P>0.05),其余各干预组细胞凋亡指数均有显著差异(P<0.01);TUNEL染色法显示48 h时,baicalein 80μmol/L细胞调亡指数为38.37±0.36%而0 μmol/L组细胞调亡指数为7.27±0.21%,两组间存在显著差异(P<0.01). 结论:人胃癌细胞AGS中存在12-LOXmRNA表达,其特异性抑制剂baicalein能抑制AGS细胞增殖并促进其凋亡.

小肠结肠炎耶尔森氏菌的随机扩增多态性DNA的分析

分别对从福建、浙江、沈阳等地分离到的18个血清型的115株小肠结肠炎耶尔森氏菌用随机扩增多态性DNA（RAPD）方法进行了分析，将其分为22个型别。结果提示RAPD方法比血清分型方法的优点是对于追踪传染源有更高的价值。

非小细胞肺癌组织中促红细胞生成素及其受体mRNA的表达及意义

目的探讨促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPO-R)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与临床病理参数的关系。方法采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测31例NSCLC组织、相应的癌旁组织及21例肺良性病变组织中EPO和EPO-R的mRNA水平,并分析其水平与NSCLC临床病理参数的关系。结果 EPOmRNA和EPO-RmRNA在NSCLC组织中的相对表达量分别为0.79±0.18和0.60±0.13,在癌旁组织中分别为0.23±0.09和0.17±0.09,在肺良性病变组织中分别为0.19±0.11和0.13±0.09。EPOmRNA和EPO-RmRNA在NSCLC组织中的表达高于癌旁组织和肺良性病变组织,差异有统计学意义(P<0.05)。EPOmRNA和EPO-RmRNA的表达与NSCLC的临床分期、病理分型及吸烟史均无关(P>0.05)。结论 NSCLC中EPO/EPO-RmRNA高表达,提示EPO/EPO-R可能参与肿瘤的发生过程,因此可将其表达水平作为NSCLC的辅助性诊断指标。

癌-睾丸抗原SSX基因在肝细胞癌中mRNA水平的表达及意义

目的观察癌-睾丸抗原SSX基因在肝癌组织和肝癌细胞株中mRNA水平的表达情况,探究该基因家族的表达与肝癌的诊断、治疗的关系,进而评价该基因家族作为肝癌免疫治疗靶点和多价肿瘤疫苗研制的可行性。方法对28例肝细胞癌和癌旁组织、3例肝硬化组织以及肝癌细胞株7404、HePG2、7721采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测癌-睾丸抗原SSX基因在mRNA水平的表达情况。结果 SSX-1、SSX-2、SSX-3在肝癌癌旁组织和肝硬化组织中均不表达。在收集的肝细胞癌组织中SSX-1、SSX-3基因表达阳性率较高(53.6%、57.1%),SSX-2表达阳性率相对较低(35.7%),其中SSX-1、SSX-2、SSX-3三种基因共同表达的有6例(21.4%),至少有两种SSX基因表达的有23例(82.1%)。结论癌-睾丸抗原某些SSX基因在肝细胞癌中高频率表达与肝癌的发生、发展有关,同时基因的共同表达结果又为多价瘤苗的研究提供了实验方向。

表皮生长因子受体蛋白和基因在口腔复发性阿弗他溃疡中表达的变化及意义

目的 观察表皮生长因子受体 (EGFR)在口腔复发性阿弗他溃疡 (RAU)组织中蛋白和基因表达变化。方法 用免疫组化和RT PCR技术检测EGFR在RAU中表达的变化。结果 RAU组织中EGFR的mRNA表达明显下降 (P <0 .0 5 )。EGFR在正常黏膜和RAU中表达水平较低 ,阳性表达位于细胞膜、胞质 ,正常黏膜中表达主要位于基底细胞层中。在RAU中该蛋白表达水平明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 RAU中的EGFR表达受抑 。

含Apoptin基因重组腺病毒的构建及鉴定

目的:构建携凋亡素(Apoptin)基因重组腺病毒,为进一步研究Apoptin基因抗肿瘤作用分子机制建立基础.方法:利用BamHⅠ和SpeⅠ双酶切质粒pVAX1-Apoptin,获得Apoptin片段并连接入pacAd5 CMV K-N pA,构建含Apoptin基因的穿梭质粒pacAd5-Apoptin.利用PacⅠ单酶切对pacAd5-Apoptin和腺病毒基因组质粒(pAd5)进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞,分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:所构建重组腺病毒中的Apoptin基因得到了正确转录,表达产物的相对分子质量约为13kDa,与CVA阳性对照一致;所获得重组腺病毒可有效表达Apoptin蛋白,该蛋白与CAV阳性血清具有反应原性,重组病毒滴度为1011PFU/L.结论:成功构建含Apoptin基因的重组腺病毒,所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求.

T细胞激活剂对Jurkat细胞重组激活基因表达的影响

目的:研究T细胞激活剂PHA,抗CD3mAb,PMA+A23187对人T细胞白血病细胞株Jurkat重组激活基因(RAGs)mRNA表达水平的影响.方法:采用RTPCR法检测不同T细胞激活剂作用不同时间后Jurkat细胞中RAG1,RAG2mRNA,以β肌动蛋白(βactin)的表达作为内参照进行灰度分析,比较不同组Jurkat细胞RAGsmRNA的表达水平.结果:三种T细胞激活剂刺激诱导的Jurkat细胞RAG1mRNA表达量明显低于对照组(P<0.05),且RAG1mRNA表达量的下降与刺激诱导作用时间有关;PHA刺激诱导后RAG2表达量显著低于对照组(P<0.05);PMA+A23187刺激诱导6,12h均未检测出RAG2mRNA的表达;而抗CD3mAb作用12h组RAG2mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05).结论:Jurkat细胞同时表达RAG1,RAG2mRNA,并在一定诱导下RAGs表达量发生改变,因此有可能成为研究外周T细胞RAGs表达调节的一个潜在的细胞模型.

双氯芬酸的抗增殖作用与细胞内环氧酶-2表达水平的关系

目的检测体外培养的人肝细胞癌HepG2、Hep3B细胞和正常肝细胞系L02、QSG7701细胞以及正常人皮肤成纤维细胞Fb环氧酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）mRNA的表达，观察环氧酶抑制剂双氯芬酸（diclofenac）对上述细胞增殖的影响，以探讨双氯芬酸抗增殖作用与细胞内COX-2表达的关系。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测各种细胞系COX-2mRNA的表达水平，采用cellcounting kit-8（CCK-8）细胞计数法测定药物作用72h后的细胞增殖活性，绘制生长曲线。结果肝细胞癌HepG2、Hep3B细胞和正常肝细胞L02均高表达COX-2mRNA，正常肝细胞QSG7701微弱表达COX-2mRNA，正常人皮肤成纤维细胞Fb不表达COX-2mRNA。双氯芬酸在10～200μmol·L^-1内呈浓度依赖性地抑制HepG2、Hep3B和L02细胞的增殖，作用72h的半数抑制浓度分别为76．41、35．21和87．44μmol·L^-1。双氯芬酸对QSG7701的抑制作用较弱，半数抑制浓度为170．23μmol-L^-1，对Fb细胞仅在浓度超过200μmol·L^-1时才表现出细胞毒性。结论环氧酶抑制剂双氯芬酸特异性地抑制COX-2mRNA高表达的肝细胞癌HepG2、Hep3B细胞和正常肝细胞L02的增殖．提示双氯芬酸通过COX-2途径起抗增殖作用。

甘露聚糖结合凝集素基因A/B位点与新疆维吾尔族结核病的相关性研究

目的探讨甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)基因的多态性是否与新疆维吾尔族人群结核病发病相关。方法通过使用引物序列特异性PCR(SSP-PCR)的方法分别对226例新疆维吾尔族活动性肺结核患者(简称病例组)及231例有结核分枝杆菌接触史的新疆同民族健康者(简称对照组)进行MBL基因的A/B多态性位点进行基因分型,统计学分析采用病例对照分析研究不同基因型与新疆维吾尔族结核病易感性的关系。结果在病例组中,MBL基因A/B位点AA基因型106例(占46.90%),AB基因型106例(占46.90%),BB基因型14例(占6.20%);对照组AA基因型则为146例(占63.20%),AB基因型80例(占34.63%),BB基因型5例(占2.17%)。病例组中MBL-AB突变基因频率显著高于健康对照组,两组的突变基因频率分别为6.20%、2.17%,差异有统计学意义(χ2=5.224,Pc<0.05)。结论新疆维吾尔族人群中MBL基因AA基因型可能为结核病的保护性因素,BB基因型可能为结核病发病的危险性因素。新疆维吾尔族人群中MBL基因A/B位点多态性与结核病易感性有明显相关性。