TNF-α对肠上皮细胞PIgR、NF-κB亚单位表达影响

目的:研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对Caco-2细胞表达多聚免疫球蛋白受体(pIgR)和核因子-κB(NF-κB)亚单位RelA/RelB的影响。方法:采用Real-time PCR方法检测肠上皮细胞表达pIgR、RelA和RelB的变化。结果:与无TNF-α刺激比较,用不同浓度TNF-α刺激后pIgR、RelA和RelB基因的表达明显增加(P<0.01)。结论:TNF-α促进肠上皮细胞表达pIgR、NF-κB亚单位基因表达,TNF-α通过NF-κB通路激活pIgR基因的转录。

半滑舌鳎多聚免疫球蛋白受体(pIgR)基因的克隆和表达分析

本研究根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)基因组数据库中预测的多聚免疫球蛋白受体(Polymeric immunoglobulin receptor, pIgR)序列,通过PCR和RACE技术获得了半滑舌鳎pIgR基因cDNA,全长为1419 bp,开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,5′UTR区域为109 bp,3′UTR区域为290bp。保守结构域分析显示,半滑舌鳎pIgR蛋白包含1个信号肽,2个免疫球蛋白功能域(Ig-like domain, ILD)和1个跨膜结构域。经蛋白序列同源比对和系统进化树分析,发现半滑舌鳎pIgR与大菱鲆(Scophthalmus maximus)和牙鲆(Paralichthy solivaceus)的pIgR亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析显示,pIgR基因在健康半滑舌鳎的不同组织中均有表达,在鳃中表达较高,在肌肉中表达最低。经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)病原感染刺激后,pIgR基因在半滑舌鳎的5个组织(肝脏、脾脏、肾脏、肠和鳃)中均呈先上升后下降的趋势,其中,在脾脏和鳃中48 h达到最高值,在肝脏、肾脏和肠中72 h达到峰值。与内脏组织不同的是,pIgR基因在皮肤中呈一直上升的趋势。上述结果表明,pIgR基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌的免疫应答中发挥重要作用。

NO对肠上皮Caco-2细胞表达分泌片的影响

目的研究NO对肠上皮Caco-2细胞表达分泌片(SC)的影响。方法采用MTT方法观察一氧化氮(NO)对Caco-2细胞的杀伤作用;采用免疫组化、Western blot、real-time PCR方法检测NO对肠上皮细胞表达SC的变化影响。结果高浓度NO对Caco-2细胞有直接杀伤作用。与无NO刺激组比较,用不同浓度NO刺激后SC阳性细胞、Caco-2细胞SC蛋白和SC基因的表达明显减少(P<0.01)。结论NO可直接引起Caco-2细胞损伤,抑制肠上皮细胞分泌SC,因此NO可能削弱肠道免疫防御。

TNF-α调节多聚免疫球蛋白受体和干扰素调节因子-1的表达

目的研究TNF-α对Caco-2细胞表达多聚免疫球蛋白受体(PIGR)和干扰素调节因子-1(IRF-1)的影响。方法用不同浓度的TNF-α刺激Caco-2细胞后,采用Real-time PCR方法检测Caco-2细胞表达PIGR和IRF-1的变化。结果 TNF-α浓度为50、100、200和400 ng/mL时,PIGR mRNA和IRF-1 mRNA的相对含量分别为(3.14±0.14)、(5.23±0.19)、(6.45±0.23)、(8.44±0.18)和(6.20±0.21)、(9.00±0.19)、(10.90±0.23)、(14.50±0.25),与无TNF-α刺激时比较,Caco-2细胞表达PIGR和IRF-1明显增加(P<0.01)。结论 TNF-α上调Caco-2细胞中PIGR和转录因子IRF-1的表达。

肿瘤坏死因子对肠上皮细胞分泌片的影响

目的:研究TNF-α对Caco-2细胞表达SC的影响。方法:采用免疫组化、ELISA、Western blot、Real-time PCR方法检测肠上皮细胞表达SC的变化。结果:与无TNF-α刺激比较,用不同浓度TNF-α刺激后SC阳性细胞、培养上清液中游离SC、Caco-2细胞SC蛋白和SC基因的表达明显增加(P<0.01)。结论:TNF-α上调Caco-2细胞内SC的表达。

多聚免疫球蛋白受体功能及其表达调节机制

黏膜免疫是机体免疫系统的重要组成部分,鱼类的皮肤、鳃、肠等黏膜免疫相关组织及黏液是机体免疫保护的第一道防线。分泌型抗体(SIgs)是黏膜免疫的主要组成成分,经多聚免疫球蛋白受体(pIgR)介导的转胞吞作用穿过上皮细胞转运至黏膜表面发挥免疫防御功能。目前,对哺乳动物pIgR介导SIgs的转运过程,pIgR功能及调节因子,以及细胞因子、微生物、激素等调节pIgR表达的信号通路已研究得较透彻,而鱼类pIgR研究多集中于基因克隆、组织差异表达等,对pIgR表达调节方面的研究较少。本文综述了哺乳动物pIgR的功能、调节机制以及硬骨鱼类pIgR的相关研究进展,为探究鱼类pIgR表达的调节机制提供参考资料。

用CODEHOP法设计简并引物克隆草鱼多聚免疫球蛋白受体基因片段

为克隆草鱼Ctenopharyngodon idellus多聚免疫球蛋白受体p IgR基因,本研究中借助于NCBI、Blast等数据库及Primer Premier 5.0、DNAMAN等生物软件,利用CODEHOP法设计了简并引物,并对克隆基因进行同源性比较和系统发生分析。结果表明:用CODEHOP法设计的简并引物特异性强,试验成功率高;草鱼p IgR基因属于整个脊椎动物的p IgR基因群,与鲤Cyprinus carpio同源性最高,为84%。

三硬骨鱼类多聚免疫球蛋白受体(pIgR)结构与功能研究进展

多聚免疫球蛋白受体(Polymeric immunoglobulin receptor,pIgR)是介导分泌型免疫球蛋白(Ig)多聚体跨过上皮细胞转运的I型跨膜糖蛋白,已在多种高等脊椎动物中得到克隆。2007年以来,陆续在红鳍东方鲀、斑马鱼及鲤鱼等多种硬骨鱼中克隆得到pIgR基因,并对其进行了表达分析。硬骨鱼类pIgR包含2个免疫球蛋白样功能域,含有4个保守的半胱氨酸(Cys)残基,能很好地结合Ig多聚体,进而介导其向皮肤或肠等黏液中的转运。但目前对pIgR基因功能及作用机制仍了解较少。本文拟对硬骨鱼中pIgR基因分子结构、转胞吞作用、功能及表达模式差异做简要概述,以期为今后深入研究pIgR在黏膜免疫中的功能及转运机制提供指导。