聚合人脐带血红蛋白增敏乳腺癌小鼠化学免疫疗法治疗效果的初步研究

目的探讨聚合人脐带血红蛋白氧载体(PolyCHb)增强小鼠4T1乳腺癌原位瘤化学免疫疗法敏感性的影响。方法构建4T1乳腺癌原位瘤模型,将15只小鼠随机均分为3组,空白组:无干预;对照组:多柔比星(DOX)+PD-1抑制剂(a-PD-1)治疗,腹腔注射DOX 5 mg·kg^(-1)、1次/周,腹腔注射PD-1抑制剂12.5 mg·kg^(-1)、1次/周;实验组:DOX+a-PD-1+PolyCHb治疗,DOX和a-PD-1用法同上,PolyCHb:尾静脉注射600 mg·kg^(-1)、3次/周;给药周期为4周。给药期间记录肿瘤体积3次/周,绘制各组肿瘤生长曲线并计算抑瘤率。29 d处死小鼠,剥瘤后称瘤重;免疫荧光法检测肿瘤组织中HIF-1α的含量;HE染色观察肿瘤组织病理变化;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况;免疫组化法检测肿瘤增殖指标Ki67表达情况。结果与空白组和对照组相比,实验组组肿瘤体积显著减小(P<0.05)、抑瘤率(%)显著提高(P<0.05);实验组肿瘤组织中HIF-1α含量降低(P<0.05);实验组肿瘤组织生长区减少,并伴坏死区增加;各组肿瘤组织细胞凋亡阳性率(%)分别为18.79±0.62、20.68±1.19、41.65±2.99(F=135.2,P<0.001);此外肿瘤增殖指标Ki67结果显示对照组与实验组比较有统计学差异(P<0.05)。结论PolyCHb可以增加乳腺原位瘤小鼠化学免疫疗法的敏感性,其作用机制可能与降低HIF-1α表达,促进细胞凋亡和坏死,抑制肿瘤细胞增殖有关。

携氧代血浆扩容及携氧功能初步动物实验研究

目的建立大鼠重度失血性休克模型和大鼠失血性休克-肠系膜微循环模型,用以探讨携氧代血浆的扩容和携氧功能。方法将20只SD大鼠失血至全身血容量的60%,造成重度失血性休克大鼠模型后,随机均分为6%羟乙基淀粉(HES)组和携氧代血浆组做相应样品的等容量输注复苏。分别在造模前、休克、输液末以及输液后1 h观测大鼠平均动脉压(MAP)、股动脉取血测定血气,检测组织氧分压(PtO_2)。另取20只大鼠建立失血性休克-肠系膜微循环模型,观察、记录大鼠造模前基础值、休克、输液末以及输液后1 h微血管直径的变化和血流状态。结果 HES组与携氧代血浆组比较,输液末微静脉直径(μm)与微动脉直径(μm)分别为:31.23±4.96 vs 31.86±5.43、19.46±1.47 vs19.40±2.10(P>0.05),输液后血流状态均得到恢复;输液后1 h的MAP(mm Hg)为:90.70±3.83 vs 98.90±9.18(P<0.05);组织氧分压(mm Hg)为:输液末7.03±1.47 vs 15.32±2.34(P<0.05),输液后1 h 5.53±2.39 vs 8.90±2.01(P<0.05);2组大鼠血气指标在各时间点相近(P>0.05)。结论携氧代血浆能够改善大鼠失血性休克所致的微循环障碍,具有与HES相似的血管扩容作用,并且在大鼠休克复苏初期恢复组织氧分压的效果优于HES。

羟乙基淀粉加多聚人胎盘血红蛋白对失血性休克大鼠肠缺血再灌注损伤的影响

目的探讨应用羟乙基淀粉(HES)溶液中添加多聚人胎盘血红蛋白(Poly Hb)对重度失血性休克大鼠模型肠缺血再灌注的影响。方法将32只SD大鼠失血至全身血容量(大鼠体重的6.5%)的60%,分别将大鼠股动静脉插管后,从股动脉端开始放血直至放血量达到大鼠全身血容量的60%,然后随机均分为4组(8只/组),包括3个人工胶体液组,即HES组:6%HES130/0.4氯化钠注射液;红细胞+HES(RBC+HES)组:将大鼠自身血液反复离心洗涤3次,留取红细胞,加入到HES溶液中,使Hb浓度达到20 g/L;Poly Hb+HES组:将Poly PHb加入到HES溶液中,使Hb浓度为20 g/L;1个假手术组:只做常规手术,不放血不复苏。将大鼠行等容量液体复苏,分别在各组大鼠休克前、后,输液末、输液后1 h、2 h观测大鼠平均动脉压(MAP)、乳酸(Lac)、氧分压(Pa O2)、二氧化碳分压(Pa CO2),并在复苏2 h取各组大鼠肠组织制备成10%组织匀浆,测定丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量。结果 HES、RBC+HES和Poly Hb+HES 3组大鼠输液后MAP(mm Hg)分别为88.00±9.90 vs 100.57±7.69vs 112.16±17.05(P"0.05);输液后2 h,乳酸(mmol/L)分别为3.71±0.91 vs 2.30±0.97 vs 2.50±0.65(P"0.05),Pa O2(mm Hg)分别为126.5±10.40 vs 111.16±9.64 vs 111.00±13.98(P"0.05),Pa CO2(mm Hg)分别为30.00±3.16 vs 42.66±5.31 vs 34.66±1.50(P"0.05);输液后2 h,RBC+HES、HES组MDA、MPO活性,分别为:0.47±0.34 vs 0.99±0.81,0.23±0.29 vs 0.57±0.32(P"0.05);Poly Hb+HES与HES组MPO活性、TNF-α分别为0.32±0.19 vs 0.57±0.32,89.42±21.03 vs 208.45±62.80(P"0.05)。结论 HES溶液添加多Poly Hb可以改善失血性休克大鼠组织氧供和酸中毒现象,减轻肠组织缺血再灌注损伤。

聚合人脐带血红蛋白复苏液对失血性休克大鼠肝脏影响初步探究

目的了解聚合人脐带血红蛋白(PolyCHb)复苏液对失血性休克大鼠肝脏组织的影响。方法用改良wiggers法建立大鼠失血性休克模型,将32只健康SD雄性大鼠随机均分为4组:麻醉后大鼠仅行股动/静脉插管的假手术(Sham)组,以及在行股动/静脉插管后分别用羟乙基淀粉(HES)、含20 g/L Hb(2%PolyCHb)、60 g/L Hb(6%PolyCHb)的HES做复苏液行液体复苏的3个实验组。用多通道生理记录仪监测大鼠放血前(基础值)、休克时、复苏后即刻(0 h)的平均动脉压(MAP)和心率(HR);复苏后6 h通过腹主动脉取血处死大鼠,立即检测血液中Hb、Hct、ALT和AST,并随即取右叶肝脏组织制备成10%组织匀浆,用商品化试剂盒测定活性氧簇(ROS)含量和总抗氧化能力(T-AOC),另取左叶肝脏组织固定于10%中性甲醛做病理切片并做病理损伤定性分析。结果2%及6%PolyCHb组与HES组大鼠失血性休克复苏后0 h:MAP(mmHg)分别为111±10.66 vs 132±6.09 vs 85.71±5.25(P<0.01),HR(b/min)分别为329.38±20.71 vs 282.75±48.03(P<0.05)vs 308.71±33.11(P>0.05);复苏后6 h:血液中Hb(g/L)分别为70.75±5.92 vs 84.13±9.33 vs 60.63±8.45(P<0.05),Hct(%)分别为18.75±1.68 vs 18.00±3.20 vs 18.15±2.42(P>0.05),ALT(U/L)分别为197.44±42.08 vs 162.75±44.06 vs 183.96±40.53(P>0.05),AST(U/L)分别为732.41±101.17 vs 737.86±113.90 vs 826.89±78.44(P>0.05),肝脏组织匀浆中ROS(U/ml)分别为419.84±17.76 vs 428.08±17.84(P>0.05)vs 396.21±3.72(P<0.05),T-AOC(mmol/L)分别为0.63±0.01 vs 0.60±0.02 vs 0.67±0.01(P<0.05);病理切片:2%PolyCHb组有中央内皮静脉和免疫细胞浸润方面的损伤,6%PolyCHb组有中央内皮静脉、肝窦和免疫细胞浸润方面的损伤,HES组有中央内皮静脉、内皮细胞、脂肪变性和免疫细胞浸润方面的损伤。结论中、低浓度PolyCHb复苏液和HES一样均能对危重失血性休克大鼠模型有效复苏;降低PolyCHb浓度能减轻肝脏组织在失血性休克液体复苏过程中的病理损伤。

聚合人脐带血红蛋白对复苏失血性休克大鼠肺组织的影响

目的探讨不同浓度聚合人脐带血红蛋白(PolyCHb)复苏对失血性休克大鼠肺组织的影响。方法建立Wistar大鼠失血性休克控压模型:将40只健康雄性Wistar大鼠随机均分为假手术(sham)组、生理盐水(对照)组、2%、4%及6%PolyCHb组(8只/组)。sham组:大鼠麻醉后仅行股动、静脉插管;后4组建立大鼠失血性休克控压模型,分别给予生理盐水、生理盐水加相应浓度的PolyCHb复苏。分别在大鼠放血前(基础值)、休克、液体回输后0 h(复苏后0 h)、6 h(复苏后6 h)观测各组大鼠平均动脉压(MAP)、动脉二氧化碳分压(PaCO_2)、肺氧合指数(PaO_2/FiO_2);复苏后6 h以放血法处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定蛋白含量,取肺组织,测定湿/干重比(W/D)值,另取肺组织制备成10%的组织匀浆,测定丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果 1)复苏后0 h,2%、4%、6%PolyCHb组与对照组的MAP(mmHg)为117.25±5.97 vs 132.00±5.98 vs 147.75±5.82 vs 101.13±6.15(P<0.05)。2)复苏后6 h,4%、6%PolyCHb组与对照组相比,MAP(mmHg)分别为114.75±5.26 vs 118.63±13.81 vs 88.38±8.00(P<0.05);2%、4%PolyCHb组和对照组的PaCO_2(mmHg)为37.62±3.62 vs 37.13±4.70 vs 25.38±4.10(P<0.05);2%PolyCHb组和对照组的PaO_2/FiO_2值为463.69±44.74 vs 403.57±59.73,BALF蛋白浓度值(mg/mL)为0.13±0.04 vs 0.23±0.06(P<0.05), MDA(nmol/mg protein)为1.17±0.11 vs 1.47±0.20,MPO(U/g tissue)为0.37±0.08 vs 0.76±0.23(均为P<0.05);2%、4%、6%PolyCHb组和对照组的SOD(U/mg protein)为2.04±0.27 vs 1.87±0.30 vs 1.63±0.10 vs 1.83±0.04(均为P>0.05)。结论具有携氧功能的低浓度PolyCHb可以减轻失血性休克大鼠肺损伤;但随着PolyCHb浓度的升高,大鼠氧化应激增强,反而加重肺损伤。

聚合人脐带血红蛋白氧载体对部分凝血指标影响的体外初步研究

目的比较聚合人脐带血红蛋白(polymerized human cord hemoglobin, PolyCHb)与游离血红蛋白(free hemoglobin, FHb)部分体外凝血指标的异同,以分析PolyCHb对凝血功能障碍的影响。方法使用生理盐水,2种浓度的FHb和PolyCHb及含36%高铁血红蛋白的PolyCHb分别与新鲜全血或富血小板血浆(PRP)等比混合,于37℃孵育30 min检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血因子Ⅱ活性(FⅡ∶C)、凝血因子Ⅴ活性(FⅤ∶C)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ∶C)、凝血因子Ⅸ活性(FⅨ∶C)、血管性血友病因子(vWF)以及血小板P选择素(CD62P)。结果 1)NaCl组:PT(22.68±1.76)s;APTT(59.58±7.52)s;FⅡ∶C(45.91±3.27)%;FⅤ∶C(30.86±4.43)%;FⅧ∶C(41.32±12.94)%;FⅨ∶C(23.96±5.10)%;vWF(2.14±0.54)mg/L;CD62P(7.44±4.47)%,该组结果作为稀释对照;2)2%FHb组与7%FHb组相比:FⅧ∶C(42.16±12.31)%vs(56.64±12.22)%(P<0.05),其余指标无差异(P>0.05);3)2%PolyCHb组与7%PolyCHb组相比无差异(P>0.05);4)2%FHb组与2%PolyCHb组相比无差异(P>0.05);5)7%FHb组与7%PolyCHb组相比:PT(23.31±1.34)svs(21.97±1.56)s(P<0.05);APTT(50.12±5.72)svs(55.43±5.43)s(P<0.05);FⅧ∶C(56.64±12.22)%vs(42.37±13.00)%(P<0.05);vWF(1.41±0.30)mg/Lvs(2.25±0.41)mg/L(P<0.05),其余指标无差异(P>0.05);6)7%PolyCHb组与Met-PolyCHb组相比:APTT(55.43±5.43)svs(46.33±4.86)s(P<0.05);FⅧ∶C(42.37±13)%vs(60.51±10.16)%(P<0.05),其余指标无差异(P>0.05)。结论 PolyCHb对部分凝血指标的影响与FHb不同,在本研究的浓度下不会造成凝血障碍。但Met-PolyCHb含量过高,会影响凝血功能。

聚合人脐带血红蛋白对大鼠心肌组织影响的初步探讨

目的探讨聚合人脐带血红蛋白(PolyCHb)对动物心肌组织的影响。方法取18只健康雄性SD大鼠随机均分为假手术(Sham)组:大鼠麻醉后仅行股动、静脉插管,颈静脉及右侧颈总动脉插管;NaCl组及PolyCHb组:除同Sham组一样麻醉、插管后,分别输注生理盐水或PolyCHb(800 mg/kg);连续监测基础值、输注后0、10、20、30、60 min 3组大鼠的平均动脉压(MAP)、心率(HR)、左心室收缩末期压力(pes)、左心室舒张末期压力(ped)、室内压最大上升速率(dp/dt max)、室内压最大下降速率(dp/dt min)、等容舒张时间常数(Tau)。另取18只大鼠同样分作3组,麻醉、插管后按分组做相应处理,取输后1、3、6 h血样于EDTA抗凝管中,离心取血浆,测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)含量,6 h时处死大鼠,取心脏做病理学检测。结果 PolyCHb组、 NaCl组与sham组比较:1)术(输)后0—60 min MAP(mmHg)及pes(mmHg)持续升高,至输注后60 min时,分别为128.50±7.26 vs 115.67±4.72 vs 106.5±14.84(P<0.05)与148.30±18.16 vs 122.83±13.57 vs 122.07±19.00(P<0.05);术(输)后HR(次/min):0 min时分别为302.83±20.76vs 371.00±43.36 vs 387.50±47.27 (P<0.05), 60 min时分别为391.50±34.26 vs 416.83±33.47 vs 431.50±33.76 (P>0.05); ped(mmHg):60 min时分别为11.34±11.58 vs 6.83±4.79 vs 8.14±4.25(P>0.05);2)dp/dt max(mmHg/s)与dp/dt min(mmHg/s)术(输)注0 min分别为6 530.50±418.63 vs 8 341.50±1 095.00 vs 8 242.17±1 579.38与5 352.83±449.02 vs 7 687.00±1 111.87 vs 7 799.50±2 246.39(P<0.05),至术(输)后60 min分别为8 139.00±758.26 vs 10 083.33±1 256.59 vs 10 032.17±1 779.30与7 457.33±915.62 vs 9 192.00±892.90 vs 9 069.50±2 104.49(P<0.05);3)Tau术(输)后0 min分别为17.01±3.72 vs 12.69±3.32 vs 12.57±2.07(P<0.05);4)CK-MB(pg/mL)术(输)后1、3 h术(输)后1、3 h时分别为63.41±13.15 vs 49.67±20.10 vs 38.20±6.02与101.88±28.08 vs 37.80±18.21 vs 37.94±10.71(P<0.05);5)cTnI(pg/mL)术(输)后3 h分别为14.61±7.03 vs 5.32±2.96 vs 5.72±2.90(P<0.05)。PolyCHb组大鼠术(输)后6 h病理检查未见心肌损伤。结论输注PolyCHb可影响心肌功能,酶学水平升高,但不会造成病理损伤。

聚合人脐带血红蛋白氧载体增强乳腺癌裸鼠皮下移植瘤化疗敏感性的初步研究

目的探讨聚合人脐带血红蛋白氧载体(PolyCHb)对人乳腺癌MCF-7细胞裸鼠皮下移植瘤化疗敏感性的影响及其机制。方法收集处于指数生长期的MCF-7细胞,制成密^度为5×10^(7)个/mL的悬浮细胞,按0.2 mL/只接种于18只BALB/c-nu裸鼠右肢皮下,建立裸鼠移植瘤模型,待肿瘤体积达到100 mm^(3)左右时,随机均分为化疗组:多柔比星(DOX)5 mg·kg^(-1),1次/周;化疗+PolyCHb治疗组:除给药(DOX)(同化疗组)外,PolyCHb 600 mg·kg^(-1),3次/周;对照组:生理盐水90 mg·kg^(-1),1次/周;均为经尾静脉连续注射4周。自注射当天(d0)起,每3 d 1次测量各组裸鼠肿瘤体积,据此绘制其各自(组)肿瘤生长曲线。38 d结束肿瘤生长观察,剥瘤并称取瘤重,计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤组织病理变化,免疫组化检测肿瘤组织中HIF-1α表达,采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况,荧光染色测定各组肿瘤组织活性氧(ROS)的含量。结果化疗+PolyCHb组、化疗组和对照组至d38时的肿瘤体积(mm^(3))分别为:196.35±103.45 vs 316.29±62.88 vs 519.42±177.33(P<0.05);化疗+PolyCHb组与化疗组抑瘤率(%)分别为62.20 vs 39.11;HE染色和TUNEL检测:化疗+PolyCHb组肿瘤组织生长区域细胞坏死和凋亡增多;免疫组化:化疗+PolyCHb组HIF-1α表达水平降低;荧光染色:化疗+PolyCHb组[活性氧(ROS)]含量增多。结论PolyCHb增加了乳腺癌裸鼠皮下移植瘤化疗的敏感性,其作用机制可能与其提高肿瘤组织内ROS含量,促进肿瘤细胞的凋亡有关。

冻干工艺对聚合人胎盘血红蛋白质量影响的研究

探讨冻干处理对聚合人胎盘血红蛋白质量的影响。设计适宜的实验条件对聚合人胎盘血红蛋白(PolyPHb)溶液进行冻干处理后,检测冻干前后的血红蛋白浓度、高铁血红蛋白(MetHb)含量、氧结合量、游离三价铁离子(Fe3+)含量、pH值、紫外线(UV)光谱扫描、平均分子量及其分布、圆二色谱扫描、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、氧饱和曲线等指标的变化以及冻干品的外观、残余含水量、复溶时间等是否符合要求。结果表明:5批冻干处理样品的各项检测指标在冻干前后均无显著变化。这说明冻干处理对PolyPHb溶液理化性质及生物活性无显著影响,因此可以将PolyPHb溶液按本工艺进行冻干保存。