毛木耳种质资源的RAPD分析

利用22个随机引物对来源不同的56个木耳菌株进行了RAPD分析。结果表明,所有引物的扩增产物DNA片段均表现出明显的多态性,供试菌株总共扩增出164条多态性片段,占总扩增片段的99%;供试菌株两两间的遗传相似系数变化较大(平均GS值0.2143￣0.8764)。采用系统聚类法中的类平均法,对供试的所有菌株两两间相似系数进行聚类,可将它们分为四大类,各大类的类间和类内菌株的遗传变异程度较大,以IV类内各菌株间的最高(平均GS值0.3891),II和III类间的最低(平均GS值0.5887),表明遗传变异也较丰富(总平均GS值0.4918)。将RAPD技术应用于不同菌株间遗传差异的研究,具有反应迅速、不受外界环境条件影响、能从DNA分子水平上揭示菌株间遗传差异等优点,是一种快速准确评估木耳种质资源的有效方法。

PTPN11基因及幽门螺杆菌与广西柳州地区胃癌易感性关系的研究

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型11(PTPN11)基因的多态性及幽门螺杆菌(Hp)感染与广西柳州地区人群胃癌易感性的关系。方法胃癌组(238例)及健康对照组(112例)均来自广西柳州地区。运用聚合酶链反应(PCR)及两步法聚合酶链反应(PCR-CTPP)技术对Hp的尿素酶B亚单位(UreB)基因及PTPN11基因第3内含子2460位点的单链构象多态性进行分析。结果胃癌组Hp阳性率高于健康对照组(59.7%vs 48.2%,P<0.05)。胃癌组等位基因A频率低于对照组,等位基因G频率高于对照组(P<0.05)。2组间PTPN11基因第3内含子2460位点各基因型(G/G型、G/A型和A/A型)频率差异无统计学意义(P>0.05)。与G/G型比较,A/A型和G/A型胃癌易感性在2组间差异无统计学意义(A/A型:OR=0.399,95%CI 0.097～1.641;G/A型:OR=0.642,95%CI 0.397～1.039);但A/A型和G/A型合并后再与G/G型比较,含A基因者胃癌易感性显著降低(OR=0.620,95%CI 0.388～0.992)。结论广西柳州地区的人群中PTPN11第3内含子2460位点携带A基因者胃癌易感性低,而该位点为G/G型及Hp感染者胃癌的易感性高。

23-plex Y-SNPs复合扩增体系在法医学应用的研究

【目的】应用SNaPshot技术建立23-plexY-SNPs的复合扩增体系,研究其在法医学中的应用价值。【方法】从Y染色体单体群命名树上选择23个Y-SNP位点:P164、P203、P148、P145、M89、P151、M216、P128、P157、P149、P131、P199、P123、P191、P201、M111、M9、P132、P200、P197、M119、P136和M134,进行复合PCR扩增,PCR产物纯化后利用荧光标记单碱基延伸技术(SNaPshot试剂盒)结合毛细管电泳技术对单核苷酸多态性进行检测,应用该体系调查了290名广东地区无亲缘关系的男性个体。【结果】所建立的23个Y-SNPs检测体系,各位点均具有遗传多态性,基因多样性范围为0.0137～0.4912。在290名男性中检测到143个单体型,单体型多样性为0.9907。【结论】该23个Y-SNPs检测体系能快速而准确的对样本进行SNP分型,在法医学、人类学和相关学科的研究中具有较高的应用价值。

血管紧张素转化酶基因多态性与Ⅱ型糖尿病肾病的关系

目的:探讨血管紧张素转化酶(ACE)基因插入/缺失多态性及活性与Ⅱ型糖尿病肾病的关系。方法:应用聚合酶联反应方法检测157例Ⅱ型糖尿病患者和50例健康对照的ACE基因型,同时检测血浆ACE水平。结果:糖尿病肾病组的DD基因型频率及D等位基因频率都高于对照组的相应频率,差异有统计学意义(P<0.05)。DD基因型ACE水平高于II基因型。结论:ACE基因的DD基因型与血浆ACE活性有关,ACE基因缺失多态性可能为Ⅱ型糖尿病肾病的遗传因素。

线粒体DNA np16519和D310区多态性与乳腺癌遗传易感性研究

目的探讨mtDNA(mitochondrial DNA)np16519和D310区多态性及其单倍型与乳腺癌遗传易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restricted fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术对195例乳腺癌患者和196例对照的mtDNA np16519和D310区基因型进行检测,分析其与乳腺癌的相关性。结果 mtDNA np16519基因型频率在两组中的分布差异无统计学意义(P>0.05);mtDNA D310区野生型和突变型频率在两组中的分布差异无统计学意义(P>0.05);异质型频率在两组中的分布差异有统计学意义(χ2=4.784,P=0.036),携带异质型的个体发生乳腺癌的危险性增高,OR值为3.846,95%CI为1.065~14.006;mtDNA np16519和D310区构建的单倍型频率在两组中的分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论 mtDNA np16519多态性与宁夏汉族乳腺癌无相关性。mtDNA D310区异质型可能是宁夏汉族乳腺癌的易感因素。

Ⅰ型胶原α_1链基因-1997G→T突变对成骨细胞生物学性能的影响

目的研究Ⅰ型胶原α1链(COLⅠA1)基因-1997G→T突变对成骨细胞生物学性能的影响,初步探讨COLⅠA1基因-1997G/T多态性影响骨矿物密度(BMD)的病理机制。方法取行髋、膝关节置换患者的松质骨原代培养成骨细胞,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对成骨细胞进行基因型鉴定,筛选出GG、GT、TT三个基因型的细胞株,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测COLⅠA1 mRNA表达量;ELISA法测其合成Ⅰ型胶原的量;并测成骨细胞增殖率、骨碱性磷酸酶(BALP)的活性、细胞基质钙含量以及钙结节数量。结果成功筛选出GG、GT、TT三个基因型的成骨细胞株。TT型成骨细胞的COLⅠA1 mRNA表达量、Ⅰ型胶原含量、细胞基质钙含量以及钙结节数量均低于GG、GT型(P<0.01),GT型与GG型之间差异无统计学意义(P>0.05)。而年龄、细胞增殖率、BALP活性三个基因型的成骨细胞之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 COLⅠA1基因-1997G→T突变可减少成骨细胞COLⅠA1 mRNA表达量、Ⅰ型胶原的含量、细胞基质钙含量以及钙结节数量。TT型成骨细胞Ⅰ型胶原合成的减少导致细胞外基质减少,钙质沉着部位不足可能是-1997G/T患者BMD降低的原因。