美洲大蠊多肽PAE_(2)逆转耐药细胞株多药耐药性的研究

目的:探讨美洲大蠊多肽PAE2逆转人肝细胞癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU多药耐药性的作用及机制。方法:以人肝细胞癌敏感细胞株BEL-7402和人肝细胞癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU为研究对象。采用噻唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞活力;荧光定量聚合酶链式反应(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫细胞化学染色法检测细胞中谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione S-transferase-π,GST-π)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(topo-isomerase typeⅡ,TopoⅡ)和蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的mRNA和蛋白的相对表达量。结果:美洲大蠊多肽PAE2能有效逆转人肝细胞癌耐药细胞BEL-7402/5-FU的多药耐药性,能下调多药耐药相关酶PKC、GST-π、TopoⅡ的mRNA和蛋白表达水平。结论:PAE2在体外逆转多药耐药的作用机制可能与下调多药耐药相关酶有关。

美洲大蠊多肽PAP-2对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

目的:探讨美洲大蠊多肽PAP-2对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法:通过小鼠腋窝皮下注射H22肝癌小鼠腹水构建荷瘤小鼠模型。将70只小鼠随机分为模型组(生理盐水)、5-氟尿嘧啶组(阳性药对照,20 mg/kg)以及美洲大蠊提取物的脱脂膏组(200 mg/kg,以提取物量计)、CⅡ-3组(从浸膏中提取的以多肽为主要活性成分的组分,200 mg/kg,以提取物量计)和多肽PAP-2高、中、低剂量组(从CⅡ-3中分离得到,200、100、50 mg/kg,以单体量计),每组10只。5-氟尿嘧啶组小鼠隔天腹腔注射给药1次,其余各组小鼠均每天灌胃给药1次,给药周期均为10 d。给药结束后,观察小鼠瘤块变化并测定其脏器(脾、胸腺、肝)指数,苏木精-伊红染色后观察其瘤组织病理变化,并采用酶联免疫吸附试验法测定其血清中血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-4的含量。结果:脱脂膏、CⅡ-3和不同剂量的PAP-2均能不同程度地抑制荷瘤小鼠瘤块的生长并升高其脏器指数,且PAP-2的作用具有一定的量效关系。其中,PAP-2高剂量组的抑瘤率(38.95%)显著高于脱脂膏组和CⅡ-3组(P<0.05),并与5-氟尿嘧啶组(40.87%)接近(P>0.05);PAP-2高剂量组小鼠脾指数、胸腺指数、肝指数较模型组均显著升高(P<0.05),并显著高于CⅡ-3组(P<0.05),且其肝指数显著高于脱脂膏组(P<0.05)。此外,PAP-2还可降低荷瘤小鼠血清中VEGF和IL-4含量、升高其血清中IL-1β含量,其中PAP-2高剂量组与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05);并且PAP-2高剂量组小鼠血清中IL-1β含量显著高于脱脂膏组和CⅡ-3组(P<0.05),IL-4含量显著低于脱脂膏组和CⅡ-3组(P<0.05),但是其血清中VEGF含量显著低于脱脂膏组和CⅡ-3组(P<0.05)。结论:美洲大蠊多肽PAP-2对H22荷瘤小鼠具有一定的抑瘤作用,可升高其脏器指数,降低其血清中VEGF、IL-4含量并升高其血清中IL-1β含量。

美洲大蠊多肽PAP-2对Balb/c小鼠肝癌原位移植瘤免疫微环境的影响

目的探讨美洲大蠊多肽PAP-2对肝癌免疫微环境的影响,及其作用机制。方法通过给昆明种小鼠注入H22细胞悬液构建Balb/c小鼠肝癌原位移植瘤模型,将原位移植瘤小鼠随机分为10组:模型组,5-氟尿嘧啶组(20 mg·kg^(-1)5-FU),美洲大蠊多肽PAP-2低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg^(-1)PAP-2),5-氟尿嘧啶(20 mg·kg^(-1)5-FU)+PAP-2低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg^(-1)PAP-2),美洲大蠊CⅡ-3组(200 mg·kg^(-1)CⅡ-3),脱脂膏组(200 mg·kg^(-1)脱脂膏),5-Fu组隔天给药1次,其余各药物组每天1次,腹腔注射。通过检测抑瘤率、胸腺指数及脾指数,检测肿瘤组织中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和IL-1β的表达水平,检测小鼠脾细胞中相关淋巴细胞的变化水平。结果模型组、5-氟尿嘧啶组、美洲大蠊多肽PAP-2高剂量组、5-FU+PAP-2高剂量组、美洲大蠊CⅡ-3组、脱脂膏组的瘤质量分别为(0.96±0.15)、(0.33±0.19)、(0.30±0.23)、(0.12±0.04)、(0.35±0.12)和(0.41±0.06)g,IL-1β含量分别为(18.93±2.68)、(28.88±1.14)、(23.20±2.79)、(24.47±1.79)、(21.65±3.09)和(21.25±2.78)pg·mL^(-1),TNF-α含量分别为(12.32±1.12)、(25.71±0.98)、(14.25±1.94)、(23.06±1.71)、(13.49±1.38)和(14.34±2.18)pg·mL^(-1),巨噬细胞比例分别为(0.94±0.64)%、(3.19±1.12)%、(3.13±1.15)%、(5.45±3.49)%、(2.03±0.59)%和(3.76±0.44)%,B细胞比例分别为(35.53±9.84)%、(61.30±2.57)%、(59.63±3.36)%、(47.20±12.61)%、(53.60±5.68)%和(54.88±4.48)%。模型组的上述指标与其余各组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论美洲大蠊多肽PAP-2能够提高肝癌原位移植瘤小鼠的免疫功能,一定程度上改善其免疫微环境。

美洲大蠊多肽PAE_(2)对人肝癌BEL-7402和BEL-7402/5-FU裸鼠皮下移植瘤侵袭转移的影响

目的 基于腺苷酸活化蛋白激酶靶点在动物水平上探讨美洲大蠊多肽PAE;逆转肝癌多药耐药细胞BEL-7402/5-FU的机制研究。方法 以Balb/c-nude裸鼠为实验对象,建立裸鼠皮下人肝癌BEL-7402和BEL-7402/5-FU细胞瘤模型(敏感肝癌细胞模型和耐药肝癌细胞模型)。将裸鼠分为正常组、敏感组(敏感肝癌细胞模型)、耐药组(耐药肝癌细胞模型),索拉菲尼组(耐药肝癌细胞模型,给予30 mg·kg^(-1)阳性药索拉菲尼)和高、中、低剂量实验组(耐药肝癌细胞模型,分别给予200,100,50 mg·kg^(-1)多肽PAE_(2))。计算裸鼠抑瘤率及脏器指数;以生化分析仪检测裸鼠生化指标;以苏木精-伊红(HE)染色法观察肿瘤组织及肝组织的病理学变化;以实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测肿瘤组织中侵袭转移相关因子mRNA表达水平。结果 敏感组、耐药组、索拉菲尼组和高、中、低3个剂量实验组MMP2表达水平分别为0.01±0.00,1.00±0.00,0.02±0.01,0.01±0.01,0.07±0.02和0.00±0.00;这6组的MMP9表达水平分别为0.01±0.02,1.00±0.00,0.18±0.08,0.01±0.00,0.04±0.01和0.00±0.00;这6组的4EBP1表达水平分别为0.23±0.08,1.00±0.00,1.80±0.30,0.20±0.06,0.66±0.16和0.12±0.06。PAE;组与耐药组相比,各项mRNA表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 美洲大蠊多肽PAE_(2)可通过腺苷酸活化蛋白激酶靶点影响裸鼠肿瘤细胞的侵袭转移因子,降低肿瘤组织中MMP2等mRNA的侵袭,从而抑制裸鼠肿瘤的生长。

美洲大蠊多肽PAP-2对Balb/c裸鼠肝癌原位移植瘤缺氧微环境的影响

目的探讨美洲大蠊多肽PAP-2对肝癌缺氧微环境的影响,及其作用机制。方法BALb/c裸鼠用腋下接种HepG2肝癌细胞的方法构建肝癌原位移植瘤模型。将造模成功的裸小鼠随机分为模型组、阳性对照组(20 mg·kg^(-1)5-氟尿嘧啶)、CⅡ-3组(200 mg·kg^(-1)美洲大蠊提取物CⅡ-3)、脱脂膏组(200 mg·kg^(-1)美洲大蠊脱脂膏)和低、中、高剂量PAP-2组(50、100和200 mg·kg^(-1)美洲大蠊多肽PAP-2)及低、中、高剂量联合组(20 mg·kg^(-1)5-氟尿嘧啶+50、100和200 mg·kg^(-1)美洲大蠊多肽PAP-2),每组10只。各组小鼠均按0.1 mL·10 g^(-1)的剂量腹腔注射给药,除模型组和阳性对照组隔天1次外,其余各组每天1次,共计10 d。检测裸鼠移植瘤的抑瘤率和脏器指数,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测肿瘤组织中缺氧诱导因子(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平。结果高剂量PAP-2组、高剂量联合组、CⅡ-3组、脱脂膏组和阳性对照组的抑瘤率分别为62.19%、78.07%、52.14%、51.11%和53.73%。高剂量PAP-2组、高剂量联合组、CⅡ-3组、脱脂膏组、阳性对照组和模型组的脾指数分别为(129.98±3.97)、(139.98±14.18)、(66.48±6.93)、(64.90±5.31)、(108.61±11.32)和(45.47±6.42)mg·g^(-1),肝指数分别为(843.10±59.41)、(1112.62±37.28)、(720.68±77.70)、(709.77±51.80)、(927.66±69.19)和(497.21±59.81)mg·g^(-1),HIF-1αmRNA表达量分别0.96±0.09、0.55±0.22、0.97±0.29、0.86±0.22、0.88±0.32和1.28±0.22,VEGF mRNA表达量分别为0.75±0.29、0.23±0.07、0.84±0.18、0.90±0.21、0.69±0.21和1.12±0.12。高剂量联合组、高剂量PAP-2组、CⅡ-3组、脱脂膏组和阳性对照组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论美洲大蠊多肽PAP-2通过抑制相关血管生成因子的表达水平,抑制肿瘤血管生成和肿瘤细胞迁移,改善肝癌缺氧微环境。

美洲大蠊多肽提取物对SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:研究美洲大蠊多肽提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其分子机制。方法:采用不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物作用于SMMC-7721,以Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞抑制率;Hoechst33342/PI与Annexin V-FITC/PI双染法相结合检测SMMC-7721细胞的凋亡;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物可抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡,呈一定的量效关系;Western Blot法显示Bax表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值降低。结论:美洲大蠊多肽提取物可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡,抑制其增殖,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,降低Bcl-2/Bax比值有关。

美洲大蠊多肽PAE2对HepG2/ADM移植瘤裸鼠凋亡蛋白表达及血管生成的影响

目的 探究美洲大蠊多肽PAE_(2)对HepG2/ADM移植瘤裸鼠凋亡蛋白表达及血管生成的影响。方法 将HepG2或HepG2/ADM细胞株接种于裸鼠皮下构建裸鼠肝癌皮下移植瘤模型。接种HepG2细胞的8只模型鼠为敏感组;接种HepG2/ADM细胞的模型鼠随机分为耐药组、阳性对照组和低、中、高剂量实验组,每组8只;另取8只正常裸鼠作为正常组。阳性对照组灌胃给予30 mg·kg^(-1)索拉非尼;低、中、高剂量实验组分别灌胃给予50,100和200 mg·kg^(-1)多肽PAE_(2);正常组、敏感组和耐药组均灌胃给予等量0.9%NaCl。7组裸鼠每天给药1次,连续给药14 d。测定肝指数及脾指数,用蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,用免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达水平。结果 敏感组、耐药组、阳性对照组及低、高剂量实验组的肝指数分别为(73.37±0.08),(54.78±12.62),(49.88±6.54),(44.54±4.83)和(53.39±2.55)mg·g^(-1),脾指数分别为(10.87±1.08),(7.72±2.53),(5.43±0.99),(5.72±1.07)和(6.37±1.32)mg·g^(-1),Bax相对表达量分别为0.65±0.06,0.62±0.04,0.68±0.01,0.85±0.14和0.81±0.12,Bcl-2相对表达量分别为0.80±0.22,0.96±0.32,0.37±0.16,0.54±0.15和0.14±0.05,VEGF表达量分别为0.05±0.01,0.07±0.01,0.06±0.01,0.07±0.01和0.05±0.01。与耐药组相比,低剂量实验组的肝指数、脾指数、Bcl-2和VEGF表达量均显著降低,Bax表达量显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 多肽PAE_(2)可通过促进移植瘤细胞凋亡及抑制肿瘤血管生成来逆转肝癌的多药耐药。