PESV对荷Lewis肺癌小鼠血流变学的影响的实验研究

目的观察蝎毒多肽提取物(PESV)抑制荷Lewis肺癌C57／B16小鼠肺癌生长及对荷瘤小鼠血流变学的影响。方法将0．2mL Lewis肺癌细胞悬液给C57／B16小鼠尾静脉注射,8d后将小鼠随机分组,治疗组用PESV腹腔注射,对照组用0． 9％生理盐水腹腔注射,隔日1次,共10次。第30d取全血做血流变学分析,并处死小鼠,取小鼠肺脏,进行分析。结果 PESV抑制荷Lewis肺癌小鼠肺转移作用明显(治疗组和对照组肺肿瘤数为3．2±1．2和13．5±5．3,P<0．01),血流变学分析显示,与对照组相比,PESV组血流变学指标均有不同程度的降低,尤其是全血低切表观粘度、全血高切表观粘度、 Casson粘度、Casson屈服应力,其指标明显低于对照组(P<0．01)。结论 PESV对荷Lewis肺癌的C57／B16小鼠肺转移具有抑制作用,可能通过降低血液粘度实现对Lewis肺癌的抑制作用。

蝎毒多肽提取物体外抑制胰腺癌细胞侵袭转移及相关机制

目的研究蝎毒多肽提取物PESV对人高转移胰腺癌细胞MIA-PaCa2-3转移相关能力的影响及其作用的机制。为PESV在临床上治疗胰腺肿瘤提供理论根据。方法以高转移的人胰腺癌细胞系MIA-PaCa2-3为研究对象,通过细胞增殖实验(MTT法)观察在PESV影响下肿瘤细胞活性及增殖情况,通过细胞黏附实验、细胞划痕实验及Transwell体外侵袭实验检测PESV干预后细胞的黏附、侵袭及运动能力变化。免疫细胞化学实验及Western blot检测胰腺癌细胞的E-钙粘蛋白、纤粘蛋白和基质金属蛋白酶-9的表达。结果细胞增殖实验结果显示,PESV对胰腺癌细胞呈明显剂量及时间效应关系的增殖抑制作用,与对照组比较细胞增殖抑制作用明显(P<0.05);黏附实验表明PESV可降低胰腺癌细胞的黏附力,侵袭实验及划痕实验的结果表明PESV可以使细胞的侵袭力和运动能力下降,PESV(40mg.L-1)干预8h后,黏附力、侵袭力和运动能力的抑制率分别为(30.3±4.7)%、(42.1±3.7)%、(47.6±3.3)%,与对照组比较差异均有显著性(P<0.05);免疫细胞化学及Western blot实验检测均显示,PESV干预后,胰腺癌细胞E-钙粘蛋白阳性表达细胞数量上升,灰度值明显上调(P<0.05),FN及MMP-9蛋白阳性表达数量减少,灰度值明显下调(P<0.05)。结论PESV能够明显抑制胰腺癌细胞的增殖、黏附力、侵袭及运动能力,其机制可能是通过提高E-cad表达、降低FN和MMP-9表达而实现的。

蝎毒多肽提取物对肺癌荷瘤裸鼠血流变学的影响

目的观察蝎毒多肽提取物(PESV)对肺癌荷瘤裸鼠血流变学的影响。方法移植肺癌荷瘤裸鼠随机分为PESV组(皮下注射PESV)与对照组(皮下注射生理盐水)。采用FA SCO-300型全自动表观黏度快测仪对两组的全血黏度进行检测。结果与对照组相比,PESV组血流变学指标均有不同程度的降低,尤其是全血低切表观黏度、全血高切表观黏度、C asson黏度、C asson屈服应力均明显低于对照组(P<0.01)。结论PESV可降低荷瘤裸鼠血液黏度,对肺癌荷瘤裸鼠肿瘤转移能力有明显的抑制作用。

蝎毒多肽提取物抑制DU-145细胞COX-2和MMP-9表达的研究

目的:研究蝎毒多肽提取物(peptide extract from scorpion venom,PESV)对雄激素非依赖性人前列腺癌细胞株DU-145COX-2和MMP-9表达的影响,进一步探讨其抗血管生成的分子机制,为抗前列腺癌骨转移提供有效的治疗手段。方法:采用免疫组只化学方法检测PESV对COX-2、MMP-9蛋白表达的影响,应用RT-PCR检测PESV对MMP-9在mRNA水平表达的影响。结果:蝎毒多肽提取物(40μg/mL)作用于前列腺癌细胞后,COX-2、MMP-9蛋白表达水平明显下调(P<0.05),进一步检测发现MMP-9在mRNA水平亦明显下降(P<0.05)。结论:蝎毒多肽提取物(PESV)通过抑制前列腺癌细胞血管生成因子COX-2的表达而发挥其抗血管生成作用,具有临床应用价值。

蝎毒多肽提取物对前列腺癌细胞增殖的影响

目的观察蝎毒多肽提取物（PESV）对非激素依赖性前列腺癌DU-145和PC-3细胞的生长与增殖、细胞周期及cyclinE和p27蛋白表达的影响。方法采用噻唑蓝（MTT）法检测PESV对前列腺癌细胞PC-3和DU—145生长与增殖的影响，流式细胞术观察药物对细胞周期的影响，免疫组织化学法检测药物干预后，cyclinE和p27蛋白水平表达的变化。结果MTT显示，PBSV在浓度40-200μg／ml时对前列腺癌细胞毒性作用明显（40μg／ml时，DU—145细胞抑制率为30．5％，PC-3细胞抑制率为33．1％，与阴性对照组相比，P〈0．05），且随剂量加大作用增大，浓度在200μg／ml时，100％抑制，呈明显剂量效应关系；流式细胞术显示，PESV干预后G0／G1细胞的百分比增多，S期的前列腺癌细胞减少（DU-145细胞和PC-3细胞S期的比例分别为34．1％和17．1％，与阴性组比较，P〈0．01）；免疫组化显示，PBMV干预后，DU-145和PC-3细胞cyclinE蛋白表达水平下调，p27蛋白表达水平上调。结论PESV对前列腺癌细胞增殖具有抑制作用。对前列腺癌治疗具有潜在价值。

蝎毒多肽对慢性粒细胞白血病细胞Hh通路下游活化因子Gli1表达的影响

目的探讨蝎毒多肽对慢性粒细胞白血病细胞Hedgehog通路(Hh通路)下游活化因子Gli1表达的影响。方法将慢性粒细胞白血病细胞K562接种于24孔板,随机分为蝎毒多肽1、2、3组和伊马替尼组、空白对照组。蝎毒多肽1、2、3组分别加入10、20、40μg/m L的蝎毒多肽20μL,伊马替尼组加入2 mg/m L的伊马替尼20μL,空白对照组加入生理盐水20μL,继续培养48 h。采用实时荧光定量PCR法检测各组Gli1 mRNA相对表达量,Western blotting法检测各组Gli1蛋白相对表达量。结果蝎毒多肽1、2、3组和伊马替尼组、空白对照组Gli1 mRNA相对表达量分别为1.983±0.091、1.355±0.093、1.279±0.105、1.302±0.074、2.745±0.188;Gli1蛋白相对表达量分别为0.902±0.057、0.722±0.074、0.693±0.097、0.701±0.067、0.981±0.063。蝎毒多肽1组Gli1 mRNA和蛋白相对表达量与空白对照组比较P均>0.05;蝎毒多肽2、3组及伊马替尼组Gli1 mRNA和蛋白相对表达量明显低于蝎毒多肽1组及空白对照组(P均<0.05);蝎毒多肽2、3组及伊马替尼组Gli1 mRNA和蛋白相对表达量比较P均>0.05。结论 20~40μg/m L的蝎毒多肽可明显抑制慢性粒细胞白血病细胞Gli1基因表达。

蝎毒提取物抑制Lewis肺癌化疗期间再增殖实验研究

目的观察转移性Lewis肺癌在5-Fu化疗期间再增殖加速现象及蝎毒提取物(PESV)对再增殖的抑制作用。方法 C57BL/6小鼠尾iv Lewis肺癌细胞,从第7天开始,每隔7天ip 5-Fu 1次,建立Lewis肺癌化疗期间再增殖模型,以PESV干预,每隔7天处死6只动物,统计肺转移灶数目和肺质量,并以免疫组织化学方法检测Lewis肺癌增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平和微血管密度(microvessel dentity,MVD)。结果模型组从第21天到第28天,大肿瘤转移灶数目平均增加2.5个,而从第14～21天仅平均增加0.8个;模型组肺质量增加在第21～28天显著大于第14～21天;模型组PCNA表达在第21天表达最低,在第28天最高,但第28天与第14天差异无显著性,PESV高、低剂量组在第28天表达水平皆低于模型组,以PESV高剂量组作用显著。模型组VEGF表达在第28天显著上调(与模型组第21天相比,P<0.01)。与模型组相比,PESV高剂量组在第21、28天肿瘤组织VEGF表达下调,尤其是在第28天表达显著下调(P<0.01),而PESV低剂量组仅在第28天与模型组差异存在显著性(P<0.05)。MVD计数显示,模型组在第21天最低,在第28天最高,但在第28天和第14天差异无显著性。而在PESV高剂量组,第14天高于第21天,第21天高于第28天,差异均有显著性。在PESV低剂量组,第14天高于第21天,但第21天与第28天差异无显著性。结论在5-Fu对Lewis肺癌化疗期间存在再增殖加速现象,PESV可有效抑制此Lewis肺癌再增殖,作用机制之一是通过抑制肿瘤新生血管生成来抑制肿瘤细胞再增殖。

蝎毒多肽提取物对卵巢癌SKOV_3细胞增殖抑制作用的实验研究

目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用及机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)方法检测PESV对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用,流式细胞术观察PESV对细胞周期的影响,免疫组织化学方法(IHC)检测PESV干预后,Survivin,Capase-12及p27蛋白水平表达的变化,Westernblot检测survivin蛋白含量水平。结果:MTT结果显示,PESV在40 mg.L-1以上对卵巢癌SKOV3细胞增殖有抑制作用(浓度为40 mg.L-1时,增殖抑制率为34.66%),且随剂量加大作用增大,呈现剂量效应关系;流式细胞术检测细胞周期显示,PESV干预后,处于S期的细胞减少,处于G0/G1期的细胞增多;免疫组织化学检测显示:PESV干预后,SKOV3细胞p27表达上调,表达Survivin的肿瘤细胞减少,而表达Caspase-12的细胞显著增加。DDP干预后,仅发现Caspase-12的细胞表达增加。Western blot检测结果显示,PESV组survivin蛋白表达量下降。结论:PESV对卵巢癌SKOV3细胞增殖具有抑制作用,其机制是通过抑制细胞增殖周期进行及促进细胞凋亡。

蝎毒多肽提取物对卵巢癌SKOV3细胞HPA与VEGF抑制作用的实验研究

目的:研究蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)对卵巢癌SKOV3细胞HPA与VEGF表达的影响,进一步探讨其抗血管生成的分子机制。方法:卵巢癌SKOV3细胞分为对照组、PESV组,免疫组织化学方法检测各组HPA、VEGF的表达,western-blot方法检测各组HPA在蛋白水平的表达。结果:与对照组相比,PESV组HPA、VEGF表达明显降低(P<0.05),进一步检测发现PESV组HPA在蛋白水平表达亦明显下调(P<0.05)。结论:PESV能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长,其机制可能与抑制HPA、VEGF的表达有关。