苦丁茶多糖抗氧化活性研究

采用清除超氧阴离子自由基、清除羟自由基、清除DPPH自由基、双氧水诱导红细胞氧化溶血、红细胞自氧化溶血实验,对A、K_1、K_3三个苦丁茶多糖组分的抗氧化活性进行了研究,并与Vc进行了比较,结果表明:苦丁茶多糖对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基具有一定的清除作用;对H_2O_2诱导红细胞氧化溶血反应、对红细胞自氧化溶血反应都有显著的抑制作用。

苦丁茶冬青叶多糖KPS Ⅲa的热分析研究

采用热重、热重-红外联用及差示扫描量热法研究苦丁茶冬青叶多糖KPSⅢa的热稳定性。结果表明,苦丁茶冬青叶多糖在225℃以下只失去吸附水,在225～625℃间发生剧烈的裂解反应,产生水和二氧化碳;与肝素、淀粉、半乳糖及甲壳素的热分析比较,含有硫酸酯的苦丁茶冬青叶多糖和肝素的热稳定性较低,含氨基的甲壳素的热稳定性最好。说明苦丁茶冬青叶多糖在225℃以下相对稳定,不同的基团对多糖的热稳定性有很大影响。

土壤pH、Eh对土壤-苦丁茶树系统中铅分布的影响

以苦丁茶冬青(Ilex kudingcha C.J.Tseng)扦插苗(15个月生)进行盆栽实验,通过土施H2SO4、Ca(OH)2和复合肥,改变土壤pH和氧化还原电位(Eh),研究土壤pH、Eh条件对土壤-苦丁茶树系统中铅分布的影响。结果表明:在所研究的土壤pH范围内,从酸性到碱性变化,铅在土壤中含量分布趋于减少,在苦丁茶树根、茎、叶中的含量分布趋于增多,呈现出酸性增大有利于降低铅对苦丁茶树的污染风险。随pH的变化,铅在土壤各层中含量改变较大的是中层,在苦丁茶树的根、茎、叶中含量变化较大的是根。随pH增大,苦丁茶树中铅含量增大,但铅主要被富集在茶树根部。改变土壤的Eh条件,对苦丁茶树及其土壤中铅的分布均有明显影响,其中以土壤的表层和茶树的根、叶影响较大。从减少铅污染的角度,存在适宜的土壤Eh值,如在Eh=260.5时茶树土壤将铅富集在表层,从而降低铅在茶树叶中的含量,对茶叶的安全性有利。

苦丁茶多糖活性成分动态累积及其抑菌活性

目的:研究苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng.)中主要抑菌活性成分多糖在不同采收月份的动态累积规律。方法:将不同采收期的苦丁茶叶水浴回流提取3次,用杯碟法分别测定其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌3种菌的抑菌圈直径,比较不同采收期苦丁茶水提物抑菌圈直径大小,确定最佳采收期。通过苯酚硫酸法测定不同采收期苦丁茶提取物中多糖含量,分析多糖含量与苦丁茶抑菌能力之间相关性;同时采集不同采收期红外光谱,分析与多糖相关的特征峰强度变化规律及其与抑菌活性之间的相关性。结果:在一年的不同月份生长期内,苦丁茶多糖含量在1—3月份逐渐增加,4月份达到最大值96.6 mg/g,然后呈缓慢下降的趋势,7—10月变化不大,11月份后含量显著降低,12月达到全年最低值47.7 mg/g。苦丁茶水提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌3种菌的抑制作用在4月份最大,12月份最小,与苦丁茶多糖含量的变化规律基本一致。结论:苦丁茶抑菌活性多糖成分4月份含量最高,为最佳采收期;苷类和多糖为苦丁茶抑菌活性成分。

苦丁茶多糖的提取分离纯化及部分理化性质研究

以多糖提取率为指标,采用单因素实验和正交实验对苦丁茶多糖的提取工艺条件进行优化,确定最佳提取工艺为:水料比20:1、80℃、提取50 min。在此条件下,苦丁茶多糖提取率为2.43%,先后采用Sevag法脱蛋白、分级醇沉法、DEAE—52纤维素离子交换柱层析法对其进行分离纯化,最后得到K_1和K_22个组分。同时对各苦丁茶多糖进行理化性质分析,结合Sevag法预实验所得出的结果,推测苦丁茶多糖可能为以某种方式结合蛋白的糖缀合物。

脱蛋白工艺对苦丁茶冬青叶多糖提取率的影响

采用乙醇对苦丁茶冬青叶进行脱脂,水提醇沉方法得到苦丁茶冬青叶粗多糖。采用Sevag法去除多糖中的蛋白质,研究了除蛋白次数对多糖及蛋白质含量的影响。结果表明,苦丁茶冬青叶多糖采用Sevag法脱蛋白3次以后再继续脱蛋白意义不大。

应用RAPD技术探讨苦丁茶冬青种质材料的起源

以15份原产地明确的苦丁茶冬青野生种质材料作为参照，利用RAPD—PCR技术对26份苦丁茶冬青栽培材料的原产地进行了分析．从40个10bp引物中筛选出16个多态性良好的引物，用该16个引物对上述41份苦丁茶冬青种质材料进行PCR扩增，共得到238条DNA谱带，其中多态性带190条，占扩增出的总带数之79．8％．根据扩增结果计算了各份材料之间的Jaccard遗传相似系数，并用UPGMA法构建了聚类树状图．供试的41份种质材料在聚类图中明显地分为两个类群，即海南岛类群和广西南宁类群．26份原产地待查的种质材料有12份归聚于海南岛类群，说明它们的起源地在海南岛境内；另14份原产地待查的种质材料分布归聚于广西南宁类群，说明它们的原产地在广西南宁地区或毗邻区域内．所有供试的41份苦丁茶冬青材料其遗传相似系数在0．5654～0．9813之间，表明这些种质材料具有比较丰富的遗传多样性．不同苦丁茶冬青种质材料其不同的起源地域可以从聚类图中清楚地反映出来．RAPD分子标记的结果可以作为判断苦丁茶冬青起源地域的重要参考依据，并可用于探讨苦丁茶冬青不同种质材料的遗传差异和亲缘关系．

苦丁茶不同采收期多糖含量的动态累积分析

评价广西苦丁茶不同生长期多糖含量的动态累积。在单因素考察基础上,通过响应面法优化得出最佳提取条件;采用紫外-可见分光光度法,以葡萄糖为对照品,于482 nm波长处,采用苯酚-硫酸法测定广西苦丁茶不同月份的多糖含量。多糖在5.83 mg/m L^38.54 mg/m L范围内呈良好线性关系(R2=0.997 9),平均加样回收率为98.618%,RSD为1.96%(n=5);样品的多糖含量在4月份、5月份最高,分别为96.6、82.4 mg/g,随后有所下降,12月份含量最低为47.7 mg/g。4月份苦丁茶多糖含量最高,如果以苦丁茶多糖生物活性作为标准,4月份是苦丁茶最佳采收期。

不同方法提取苦丁茶黄酮及其抗氧化活性研究

采用超声波提取法、微波辅助提取法、索氏提取法、回流提取法和浸渍提取法分别提取苦丁茶黄酮,以DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、还原能力为抗氧化能力的评价指标,比较不同提取方法对黄酮含量和抗氧化活性的影响。结果表明,5种提取方法所得黄酮提取物都有强于维生素C的抗氧化活性,其强弱顺序是:索氏提取法>超声波提取法>微波辅助提取法>浸渍提取法>回流提取法。超声波法提取苦丁茶黄酮溶剂用量少、提取效率高,可作为制备抗氧化剂的首选方法。

响应面法优化苦丁茶多糖提取工艺研究

应用响应面分析法对广西苦丁茶总多糖的提取工艺进行研究。在单因素试验基础上选择试验因素与水平,根据Box-Benhnken设计原理采用3因素3水平的响应面分析法,得到多元二次线性回归方程,以多糖提取量为响应值作响应面和等高线。确定苦丁茶总多糖的最佳提取工艺为:提取温度98℃、液料比65︰1(mL/g)、提取时间2h、提取3次,在此情况下多糖提取量最大。多元回归分析结果显示,提取温度、物料比、提取时间与苦丁茶多糖提取率之间的回归模型极显著,可用于实际生产预测。