白术多糖提取分离、结构表征及生物活性研究进展

白术作为我国一味补虚中药材在临床上应用广泛,现代研究发现其主要含挥发油、多糖、内酯类、氨基酸等化学成分,其中白术多糖含量较高,具有广泛的药物开发和研究价值。近年来,针对白术多糖开展了大量研究,包括白术多糖提取、分离、结构鉴定以及药理作用等。目前,白术多糖含量测定方法主要有蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法,提取多糖的方法可采用煎煮法、超声辅助提取法、复合酶提取法、微波辅助提取法等;分离方法主要有柱色谱分离法、乙醇分步沉淀法、超滤法等。且发现其提取、分离、测定方法不同对白术多糖含量具有较大影响。此外,白术多糖结构研究尚处于起步阶段,仅解析了部分精制多糖结构,大部分结构尚未明确。目前发现的白术多糖的生物活性主要有抗肿瘤活性、免疫调节活性、神经保护作用、胃肠功能调节作用、肝脏保护作用以及生长促进等作用,这些研究只存在于简单的药效学评价,具体的作用机制和构效关系的研究还未广泛地展开。研究就近10年来有关白术多糖的提取分离方法、化学结构研究及其主要生物活性研究相关文献进行梳理总结,为其进一步的研究、开发、利用提供参考。

基于白术内酯及总多糖结合外观性状评价白术饮片等级质量

目的通过对不同等级白术饮片进行研究,完善白术质量评价方法,为传统白术饮片等级划分提供理论依据。方法根据传统分级依据,将白术饮片分为3个等级。采用HPLC及UV法,测定36批白术饮片不同等级中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及总多糖的含量,结合2020版《中国药典》,将白术不同等级饮片的外观性状与内在质控指标进行相关性分析。结果根据外观性状及多个质控指标的含量测定,通过主成分分析、聚类分析等,白术一级饮片质量明显优于二级、三级饮片(P<0.05),且二级、三级饮片之间无显著性差异(P>0.05),表明白术饮片可分为2个等级,不同等级饮片与白术内酯及总多糖含量高低呈正相关。结论基于多个质控指标结合外观性状的白术饮片等级划分,可为该饮片质量控制与等级研究提供一定科学依据。

白术多糖对益生菌的促生长作用及结构分析

对白术、枸杞、太子参、五味子、党参、地黄、陈皮、灵芝的筛选结果表明,白术浸提液对婴儿双歧杆菌体外促生长效果最为明显。白术经水提(1:20)、醇沉(1:3)、透析(3500D)、脱蛋白(Saveg法)后经DEAE阴离子交换柱层析分离得到中性白术多糖(AMP)。AMP对两大类益生菌的促生长结果表明:AMP具有良好的促生长效果,其中对婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolesentis)、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的促生长效果最佳,且AMP的促生长作用与其添加浓度有关。AMP经红外光谱分析具有多糖特征吸收峰;经多角度激光散射仪结合凝胶渗透色谱(GPC-MALLS)法测得其重均分子质量(Mw)为5527g/mol,分子质量分布(Mw/Mn)为1.726;酸水解法及高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测(HPAEC-PAD)分析表明:AMP为杂多糖,单糖组成为阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖,其物质的量比为13.8:11.8:70.2:4.1。

白术各化学拆分组分及其配伍对大鼠肾病综合征的影响

目的确定白术治疗肾病综合征的最佳有效组分及其与桑白皮配伍的最佳比例,并初步探讨其有效组分发挥疗效的机制。方法采用阿霉素大鼠肾病模型,以大鼠24 h尿蛋白、血清白蛋白(Alb)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TCH)、大鼠血清肌酐(Cre-S)和尿素氮(BUN)的水平为评价指标筛选白术治疗肾病综合征的最佳有效部位以及配伍的最佳比例;采用ELISA法检测各化学拆分组分的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平,观察各化学拆分组分HE染色的肾组织切片,初步探讨其有效组分发挥疗效的机制;通过检测尿量、精氨酸加压素(AVP)、水通道蛋白2(AQP2)、水通道蛋白1(AQP1)的水平,初步探讨其配伍疗效后优于单味药的作用机制。结果给药3 w后,低剂量(2.8 g·kg^(-1))组大鼠24h尿蛋白、Cre-S、BUN、TG、TCH、Alb水平均有明显改善(P<0.05),为最佳给药剂量;白术多糖组分组大鼠24h尿蛋白、Cre-S、BUN、TG、TCH水平均有明显改善(P<0.05),为最佳有效组分;同时白术多糖组分能够降低IL-6和TNF-α水平,升高SOD水平,改善肾组织损伤;桑白皮加白术的最佳配伍比例1∶1,与单味药桑白皮组相比,1∶1配伍组能够显著提高大鼠尿量、降低AVP和AQP2水平(P<0.05)。结论白术治疗肾病综合征的最佳有效组分为多糖组分。可能是通过抗氧化抗炎改善肾组织损伤,从而发挥疗效;同时桑白皮与白术最佳配伍比例为1∶1,二者合用能够降低AVP相关水平,增强利尿的作用。

白术多糖的提取、纯化和活性研究

[目的]提取和纯化白术多糖,并探讨多糖中蛋白对小鼠脾淋巴细胞转化的影响。[方法]采用醇沉分级、脱蛋白和Sephadex G-75制备柱从中药白术中提取分离得到cPAM、zPAM和PAM 3种多糖,并对这3种多糖进行体外淋巴细胞转化试验。[结果]3种白术多糖对ConA诱导的T淋巴细胞增殖均有促进作用;浓度为5μg/ml的zPAM对小鼠脾淋巴细胞增殖有明显的促进作用;浓度为5和10μg/ml的PAM对小鼠脾淋巴细胞增殖有明显的促进作用。[结论]白术多糖的纯化程度与脾淋巴细胞增殖有一定关系;纯化程度高的多糖对小鼠脾淋巴细胞的增殖有促进作用;白术粗多糖中的蛋白对小鼠脾淋巴细胞的增殖没有影响。

不同产地白术的多糖含量测定

目的:对不同产地共8批白术的多糖含量进行了测定。方法:苯酚-硫酸比色法。结果:不同产地白术的多糖含量差异较大。结论:该法为白术的质量评价及质量控制提供了研究基础。

白术及白术多糖在动物生产中的研究应用

白术多糖是白术这一传统中药的活性提取物,具有抗肿瘤、抗衰老、调节免疫功能、增强免疫力、促生长、降血糖等方面的作用,综述白术及白术多糖在动物生产中的应用.参25.

白术多糖对育成期蛋鸡生长性能和血清免疫指标的影响

试验旨在研究白术多糖对育成期蛋鸡生长性能和血清免疫指标的影响。选用160只健康、体重相近78日龄海兰灰蛋鸡,随机分成4组,每组4个重复,每个重复10只鸡。试验1组蛋鸡饲喂基础日粮,试验2、3组和4组分别在基础日粮中添加0.2%、0.4%和0.6%的白术多糖。饲养试验预试期7 d,正式期42 d。结果表明,日粮中添加白术多糖后,试验2、3、4组育成期蛋鸡的平均日增重分别比对照组提高18.04%(P<0.05)、12.59%(P>0.05)和7.41%(P>0.05);平均料重比分别比对照组降低7.56%(P<0.05)、7.84%(P<0.05)和4.36%(P<0.05)。在血清免疫指标方面,试验2、3组和4组的免疫球蛋白A(IgA)含量与试验1组相比分别提高了0.96%(P>0.05)、8.76%(P<0.05)和6.42%(P<0.05);免疫球蛋白G(IgG)的含量较对照组分别提高了12.86%(P<0.05)、14.25%(P<0.05)和5.50%(P>0.05);免疫球蛋白M(IgM)的含量较对照组分别提高了9.88%(P<0.01)、13.10%(P<0.01)和4.99%(P<0.05)。结果表明,白术多糖能促进育成期蛋鸡的生长发育,提高血清免疫球蛋白含量,增强免疫力。在本试验条件下,育成期蛋鸡日粮中白术多糖的适宜添加量为0.4%。

白术多糖的免疫佐剂作用

采取水提醇沉、Sevage法除蛋白、D101大孔树脂柱分离、透析等方法提取纯化白术多糖,用苯酚硫酸法测定其多糖含量;白术多糖经三氟乙酸高温水解,醋酸酐乙酰化后进行气相色谱分析其单糖组成。将35只ICR小鼠随机分成7组,每组5只。以卵清白蛋白(OVA)为模式抗原,分别设含150、300或600μg白术多糖或黄芪多糖组,对照组仅免疫OVA。抗原和佐剂混合均匀后,腹部皮下注射疫苗,共免疫2次,间隔2周。二次免疫后2周摘除眼球采血,间接ELISA法检测血清抗OVA抗体及亚类水平。结果显示,白术多糖得率为4.2%,多糖含量为86.2%,由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成;OVA疫苗中添加白术多糖能显著提高ICR小鼠血清中抗OVA特异性抗体及抗体亚类水平,表明白术多糖皮下注射后具有免疫佐剂作用。

不同产地白术抗疲劳作用研究

为比较分析湖南龙山、安徽亳州和浙江磐安3个产地白术抗疲劳作用的差异,分别测定3个产地白术中的白术多糖、挥发油和白术内酯含量,通过水提醇沉法提取白术多糖,分别灌胃ICR小鼠,2周后测定体质量、小鼠力竭游泳时间以及血清中MDA和SOD的含量。结果表明,产自浙江磐安的白术中白术多糖含量最高,粗多糖得率为50.5%,浸出物含量高于湖南龙山和安徽亳州白术;产自湖南龙山的白术中挥发油含量显著高于安徽亳州白术(P<0.05),白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ含量均最高,显著高于浙江产和安徽产白术(P<0.05);与生理盐水组相比,产自浙江磐安和湖南龙山的白术中白术多糖可以显著延长小鼠负重游泳时间(P<0.05),同时还能显著提高小鼠血清中SOD活力,降低MDA含量(P<0.05)。产自浙江磐安和湖南龙山的白术具有较好的抗疲劳效果。

白术多糖在饲料中的应用

本文就白术多糖的提取、分离与纯化及其在饲料中的应用进行综述。

白术不同提取物对非酒精性脂肪肝模型小鼠的作用研究

目的:观察白术不同提取物(多糖和挥发油)对高糖高脂饲料喂养致非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型小鼠的作用。方法:将C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照依折麦布片1 mg/kg组、白术多糖提取物150、300、600 mg/kg组,白术挥发油提取物6.3、12.5、25 mg/kg组,除正常对照组给予普通饲料外,其余各组每天给予高糖高脂饲料喂养,并同时灌胃给药,连续6 w。观察小鼠体质量、口服糖耐量(OGTT);测定血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、葡萄糖(GLU)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量或活力;解剖取肝脏,测定肝脏中TC、乳酸脱氢酶(LDH)含量;测定肝脏免疫炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;称肝脏湿质量;HE染色观察肝脏组织形态学变化;油红O染色观察肝脏脂质沉积状况;免疫组化染色观察肝脏Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、髓样分化因子88(MyD88)、TNF-α、IL-6蛋白阳性表达情况。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠体质量、ALT活力、血脂代谢指标及肝脏LDH、肝脏湿质量、OGTT显著升高,肝脏脂质沉积、炎性浸润,肝脏TC、LDH、IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显升高(P<0.05或P<0.01),肝脏TLR4、MyD88、NF-κB、IL-6、TNF-α蛋白阳性表达明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,白术不同提取物组小鼠体质量、OGTT、肝脏湿重、血清TC、GLU、ALT含量或活力明显降低,肝脏TC、LDH、IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显降低,肝脏TLR4、MyD88、NF-κB、IL-6、TNF-α蛋白阳性表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:白术不同提取物(多糖和挥发油)均具有改善NAFLD的作用。

白术炒制过程中多糖和还原糖含量变化规律研究

目的研究白术炒制过程中多糖和还原糖含量的变化规律,为阐述白术炮制原理、制定合理的白术炮制工艺和提高白术饮片质量标准提供参考依据。方法采用四川新荷花饮片公司稳定的炮制工艺制备白术炮制样品,炮制过程中每隔2min取样一次,共炮制2批麸炒样品和1批清炒样品。以葡萄糖为对照品,分别采用苯酚-浓硫酸法和3,5-二硝基水杨酸法（DNS法）测定白术饮片在炒制过程中多糖和还原糖含量的变化。结果白术在炒制过程中,随炮制时间延长,多糖含量逐渐增加,12min之后开始下降;还原糖含量整体呈增加的趋势,且12~16min之后增长率明显提高。结论白术在炒制过程中多糖和还原糖会发生转化和分解作用;炮制适当有利于白术多糖和还原糖的溶出。

白术多糖通过靶向miR-34a抑制食管癌细胞免疫检查点PD-L1表达的机制研究

免疫检查点PD-L1介导的机体免疫抑制是肿瘤发病的重要特征,PD-L1作为重要的免疫抑制分子,可通过与PD-1结合诱导T细胞衰竭,抑制PD-L1的表达是恢复T细胞功能的关键。中药白术有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、降血糖等多种药理学作用,其中白术的多糖类成分对机体的免疫调节起着至关重要的作用,然而其对与免疫抑制密切相关的免疫检查点的作用未见报道。与正常组织相比,microRNA-34a(miR-34a)在食管癌组织中表达明显降低。该研究意在探究白术多糖对食管癌细胞的抑制作用,及其对PD-L1表达的抑制作用与miR-34a的关系,阐释白术多糖抗肿瘤的部分分子机制。首先筛选不同的人食管癌细胞株(EC9706细胞、EC-1细胞、TE-1细胞、EC109细胞),检测各细胞株PD-L1的表达水平,选取PD-L1高表达细胞株EC109细胞进行后续实验。细胞增殖实验结果显示白术多糖对EC109细胞具有抑制作用;荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blot实验发现白术多糖在基因和蛋白水平上均能显著降低PD-L1的表达,同时促进肿瘤抑制因子miR-34a的表达;通过共聚焦成像和荧光素酶分析发现,PD-L1受miR-34a的密切调控,阻断miR-34a的功能后,可逆转白术多糖对PD-L1蛋白表达的抑制作用,说明白术多糖对PD-L1蛋白的抑制作用可能是通过增加miR-34a的表达并调控其下游靶基因实现的。通过上述实验结果,得出靶向miR-34a并增加其表达是白术多糖抑制PD-L1发挥抗肿瘤作用的关键机制。