超声波法提取柳蒿芽多糖及其工艺优化

柳蒿芽是长白山地区常见的药食同源植物,活性成分多样。为了优化柳蒿芽多糖的超声波提取过程,本研究采用响应面法(RSM)进行实验设计和数据分析,探究了料液比、提取温度、提取时间、超声功率这四个因素对柳蒿芽多糖得率的影响,并优化确定了柳蒿芽多糖的最佳提取工艺。结果表明:在料液比(mg/L)1∶78、提取温度78℃、提取时间62 min、超声功率400 W条件下,多糖得率达28.9%。超声波法提取柳蒿芽多糖具有快速、高效和环境友好的特点,为今后柳蒿芽多糖的应用研究提供理论基础和指导。

柳叶蒿地上部分中酚酸类成分的分离与结构鉴定

目的对柳叶蒿地上部分的化学成分进行研究。方法应用硅胶、ODS及高效液相等多种色谱法对提取物进行分离纯化,并通过核磁共振和质谱技术鉴定化合物的结构。结果从柳叶蒿地上部分的70%乙醇提取物中分离鉴定了14个酚酸类成分,分别为苯甲醇-7-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、金盏菊苷A(2)、对羟基苯甲酸(3)、原儿茶醛(4)、原儿茶酸(5)、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸(6)、丁香酸(7)、丁香酸葡萄糖苷(8)、云杉苷(9)、scolochinenoside B(10)、2,6-羟基-4-甲氧基苯乙酮-2'-O-β-葡萄糖苷(11)、2-甲氧基-4-(2-烯丙基)苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(12)、4-烯丙基-2,6-二甲氧基苯基葡萄糖苷(13)和二氢丁香苷(14)。结论所有化合物均为首次从柳叶蒿中分离得到,其中化合物1、2、10、13和14为首次从蒿属植物中分离得到。

栽培一枝蒿粗多糖混合口蹄疫疫苗乳化方法及稳定性分析

旨在探究栽培一枝蒿粗多糖(cultivated Artemisia rupestris L.crude polysaccharides,CARCP)协同ISA-206油乳剂通过比较不同乳化方法与口蹄疫灭活抗原(inactivated foot-and-mouth disease viral antigen,FMD-Ag)制备FMD疫苗的效果异同,并观察不同储存条件对FMD疫苗稳定性的影响。通过搅拌和超声乳化分别制备不同疫苗组合,皮下免疫ICR小鼠后检测FMD特异性抗体及T细胞亚群比例。将搅拌乳化的不同疫苗组合在4、25℃条件下放置30、180 d后免疫ICR小鼠,检测体液和细胞免疫水平分析其稳定性。结果显示:与商品化FMD疫苗相比,搅拌和超声乳化制备的CARCP单独或协同ISA-206油乳剂的FMD疫苗组的特异性IgG水平和CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)T细胞比例无显著性影响(P>0.05)。4℃放置30、180 d后,与商品化FMD疫苗相比,CARCP单独或协同ISA-206油乳剂的FMD疫苗组的IgG水平和CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)CD44^(+)、CD8^(+)CD44^(+)T细胞比例无显著性差异(P>0.05)。25℃放置30、180 d后,与商品化FMD疫苗相比,免疫动物后FMD-Ag+ISA-206抗体水平及T细胞亚群比例显著降低(P<0.05),而FMD-Ag+ISA-206+CARCP抗体水平及T细胞亚群比例无显著性差异(P>0.05)。搅拌和超声乳化制备的不同FMD疫苗组合的抗体水平和T细胞水平的免疫效果没有差异;不同储存条件下,CARCP能够增强FMD疫苗的稳定性,这些研究结果为CARCP多糖佐剂的研究提供试验依据。

柳蒿芽总多酚的提取及其工艺优化的研究

本试验采用超声波辅助溶剂提取法提取了柳蒿芽总多酚,通过单因素实验探究了料液比、乙醇浓度、超声时间、超声功率这四个因素对总多酚得率的影响,并利用正交试验优化确定了柳蒿芽总多酚得最佳提取条件。结果表明:在料液比(mg/L)1∶30,乙醇浓度80%、超声时间30 min、超声功率300 W条件下,总酚得率最大为5.247%,该提取工艺操作简便,安全可靠。

柳蒿芽对小鼠免疫功能的影响

目的:定性分析柳蒿芽主要有效成分,并研究柳蒿芽对小鼠免疫功能调节的效应。方法:通过中草药经典的定性实验方法,用不同极性的溶液浸提后进行试管反应,确定柳蒿芽中大致含有的有效成分。采用BABL/C小鼠,不同剂量的柳蒿芽提取物干预后,通过碳粒廓清实验、鸡红细胞免疫、刀豆蛋白A诱导淋巴细胞增殖实验,评价柳蒿芽调节的免疫功能。结果:柳蒿芽中主要化学粗成分有生物碱、有机酸、蛋白质、多糖、黄酮类等物质。正常对照组比较,柳蒿芽提取物高剂量组可以提高小鼠碳粒廓清指数κ(p<0.01)和吞噬指数α(p<0.01),提示柳蒿芽提取物可增强正常小鼠巨噬细胞吞噬能力,表明它能够增强小鼠的非特异性免疫功能。柳蒿芽提取物中、高剂量干预下的小鼠血清溶血素水平、淋巴细胞增殖能力明显高于正常对照组(p<0.01),提示柳蒿芽提取物可以通过提高血清溶血红素水平和增强淋巴细胞增殖能力来增强小鼠的特异性免疫功能。结论:柳蒿芽提取物有增强小鼠非特异性免疫应答和特异性免疫应答的作用,可增强小鼠的免疫系统功能。

酶法提取柳蒿芽多糖的工艺条件

采用纤维素酶和果胶酶提取柳蒿芽中的多糖,通过单因素试验和正交试验分析了料液比、时间、酶加量、温度、pH值5个因素对提取柳蒿芽多糖的影响。结果表明:酶法提取多糖的适宜条件是纤维素酶为底物质量的0.5%、果胶酶为底物质量的2.0%,加热时间为0.5h,温度55℃,溶液pH值为5.5,料液比(m(柳蒿芽):V(提取液))为1g:20mL,此时的提取率为5.37%。

柳蒿芽多糖的提取及分离纯化

联合采用热水浸提法和微波处理方法提取柳蒿芽多糖,结果表明:当功率480W,液固比25∶1,微波处理15min后,于90℃热水浴,提取时间为4h条件下的提取率最高,可达到8.63%。利用Cellulose-DEAE-52柱进行分离纯化,得到了3个组分多糖PSWP-1、PSWP-2和PSWP-3。

新疆野生及栽培一枝蒿多糖对树突状细胞免疫功能的影响

研究和比较新疆野生与栽培一枝蒿多糖对骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟和功能的影响。超声法制备野生及栽培一枝蒿粗多糖;Sevage法除蛋白;蒽酮-硫酸法测定多糖含量;流式细胞术检测DCs的成熟;ELISA法检测IL-12和TNF-α的表达水平。结果显示,野生及栽培一枝蒿多糖含量分别为26.18%和22.14%,去除蛋白质后多糖含量分别为30.94%和27.06%;野生及栽培一枝蒿多糖均可以显著增强小鼠骨髓来源CD11c+DCs表面分子CD40,CD86及CD80的表达(P<0.05);显著促进IL-12和TNF-α的表达(P<0.05);显著降低DCs吞噬FITC-Dextran的能力;且相同剂量对DCs的免疫活性无显著性差异(P>0.05);除蛋白和不除蛋白的野生及栽培一枝蒿多糖的免疫活性均无显著差异(P>0.05)。新疆野生和栽培一枝蒿多糖含量差异较小,并均可以促进小鼠骨髓来源DCs的成熟和功能,且差异不大。

新疆野生一枝蒿粗多糖对流感疫苗小鼠免疫增强效果的分析

用新疆野生一枝蒿粗多糖(wild Artemisia rupestris L.crude polysaccharides,WARCP)通过肌肉注射免疫小鼠,研究其作为流感病毒疫苗(influenza virus vaccine,IVV)的佐剂效果和节约流感疫苗抗原用量的作用。WARCP与不同剂量(0.05、0.1、0.5μg)的IVV配伍,肌肉注射免疫小鼠,观察小鼠的生长状态,通过ELISA法检测血清中抗体IgG及IgG1、IgG2a的水平;MTT法检测脾淋巴细胞的增殖;流式细胞术检测细胞因子CD4^+ IL-4和CD8^+ IFN-γ以及CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞的表达水平。结果表明WARCP对小鼠的生长状态没有显著的影响(P>0.05);WARCP能够显著提高不同剂量IVV特异性IgG及其IgG_1、IgG_(2a)的抗体水平(P<0.05);增强淋巴细胞的增殖(P<0.05);显著提高IL-4和IFN-γ的分泌水平(P<0.05);降低Treg细胞的表达水平(P<0.05);尤其可以提高低剂量IVV的体液和细胞免疫反应,至少减少抗原用量91%。因此,WARCP作为IVV的佐剂通过降低Treg细胞的水平,显著增强了IVV的免疫效果,尤其是Th1型的免疫反应,能够很好地节约抗原用量,具有良好的安全性。

柳蒿多糖的提取及抑菌作用研究

目的:从柳蒿中提取多糖,并考察多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用.方法:采用超声提取并结合Sevag除蛋白等方法提取柳蒿多糖,以苯酚-硫酸法显色,在波长490nm处测定吸光度值,并应用固相扩散法研究柳蒿多糖溶液对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抑菌作用.结果:柳蒿中多糖含量为8.58%,加样回收率97.06%,柳蒿多糖对大肠杆菌的抑制作用强于金黄色葡萄球菌.结论:柳蒿多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有一定的抑制活性,同时,本方法简便,灵敏度高,重复性好,可作为柳蒿多糖的提取方法.

青蒿多糖的抗肿瘤作用实验研究

目的研究青蒿多糖(HQG)的抗肿瘤作用。方法考察HQG的急性毒性实验,考察HQG对移植性肿瘤Eac,Heps,S180的抑制作用。结果HQG的急性毒性为347.769 8,HQG100 mg/kg剂量组对小鼠移植瘤Eac,Heps和S180的抑瘤率分别可达到51.19%,56.75%,46.41%。结论HQG的急性毒性小,HQG可显著抑制小鼠移植瘤Eac,Heps和S180的生长,具有明显的抗肿瘤作用。

新疆一枝蒿多糖的提取、纯化及其结构分析(英文)

【目的】采用响应面法优化超声波法提取新疆一枝蒿多糖(ARP)的工艺条件,对其进行分离纯化和结构分析,这为ARP的结构分析及药理活性研究奠定基础。【方法】以新疆一枝蒿为原料,采用超声波法提取,Sevag法除蛋白,经DEAE纤维素-52柱和Sephadex G-100凝胶色谱柱纯化得ARP。利用紫外光谱扫描、红外光谱法对其化学结构进行分析。【结果】提取ARP的优化工艺条件为超声功率716 W、液料比36∶1和超声时间25 min,在此条件下,ARP的得率为3.92%±0.065%。ARP-2的红外吸收峰出现在917、1 100、1 147、1332、1 423、1 611、1 742、2 939和3 410 cm^(-1)。【结论】优化的ARP制备工艺合理、可行,紫外光谱扫描结果显示ARP-2无明显的核酸和蛋白质吸收峰,ARP-2含有多糖类物质的特征吸收峰。

柳蒿不同溶剂萃取物抑菌活性研究

目的考察柳蒿不同溶剂提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果。方法采用滤纸片固相扩散法和二倍稀释法研究了柳蒿水提取物、95%乙醇提取物、乙酸乙酯提取物对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抑菌活性及最低抑菌浓度(MIC)。结果由抑菌直径可知,各提取液抑菌活性顺序为:乙酸乙酯提取液>乙醇提取液>水提取液,不同提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的MIC分别为:乙酸乙酯提取液为50 mg/m L、3.125 mg/m L;乙醇提取液为100 mg/m L、12.5 mg/m L;水提取液为100 mg/m L、25 mg/m L。结论不同提取液抑菌效果不同,其中乙酸乙酯提取液抑菌效果最好。

柳蒿芽营养成分及生物活性成分研究进展

柳蒿芽是一种纯天然、野生可食用的野菜,具有较高的营养价值和生物活性。本文就柳蒿芽的主要营养成分、生物活性成分及其提取分离现状进行了综述,并对生物活性成分的研究利用进行了展望,为柳蒿芽资源的开发利用提供参考和依据。

黄花蒿多糖的酶法提取工艺优化研究

试验旨在优化黄花蒿多糖的酶法提取工艺。以酶的种类(纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶)、酶添加量、酶解温度、酶解时间为试验因素,以黄花蒿多糖得率为考察指标,在单因素试验基础上进行正交试验。结果显示,用纤维素酶酶解处理的黄花蒿多糖得率最高,最佳工艺条件为酶添加量1.5%、酶解温度45℃、酶解时间2h。此条件下,黄花蒿多糖得率为14.65%。

不同采收时期黄花蒿多糖体外抗氧化活性的研究

试验旨在研究不同采收时期黄花蒿多糖体外抗氧化活性。选取了3个不同时期的黄花蒿,采用酶提醇沉法制备多糖并测定其含量,通过体外测定其对DPPH·、·OH、·O_(2)^(-)等自由基的清除率以及总还原能力、总抗氧化能力(ABTS法)评价黄花蒿多糖的抗氧化活性。结果显示,不同采收时期黄花蒿多糖体外抗氧化活性均随多糖浓度增加呈极显著的一次线性或二次曲线升高(P<0.01)。7月份采收的黄花蒿多糖含量最高,体外抗氧化能力也最强;5月与6月份采收的黄花蒿多糖的体外抗氧化能力次之。研究表明,黄花蒿多糖是一种具有较强抗氧化活性的纯天然抗氧化剂,其抗氧化活性因采收时期的不同而有一定差异;与5、6月份相比,7月份采收的黄花蒿多糖抗氧化能力最强。

柳蒿芽多酚的提取纯化及其抗氧化活性

以柳蒿芽为原料,在单因素试验的基础上通过Plackett-Burman试验和Box-Behnken试验确定最优提取方案,并利用D101大孔吸附树脂进行纯化,最终得到柳蒿芽多酚。结果表明:柳蒿芽多酚的最佳提取工艺为乙醇浓度70%、酶解温度60℃、酶解pH 5.5、加酶量50 mg/g、酶解时间2 h、料液比1∶30(g/mL)、超声时间30 min、超声功率400 W,在此条件下,柳蒿芽多酚得率为9.41%,纯化后的柳蒿芽多酚纯度为76.2%。体外抗氧化试验结果表明,柳蒿芽多酚质量浓度为1.2 mg/mL时,Fe3+还原力和DPPH+清除力最强,分别为1.09和94.20%,且高于维生素C对照组,说明柳蒿芽多酚抗氧化活性较强。

栽培一枝蒿粗多糖佐剂增强口蹄疫疫苗的皮下免疫效果

旨在评价新疆栽培一枝蒿粗多糖(cultivated Artemisia rupestris L.crude polysaccharides,CARCP)对口蹄疫灭活疫苗(foot and mouth disease vaccine,FMDV)的免疫佐剂活性,确定多糖佐剂的有效性。选用不同剂量的CARCP与FMDV配伍,通过皮下途径免疫ICR小鼠。采用间接ELISA检测FMDV特异性抗体水平,流式细胞仪检测免疫后小鼠脾和淋巴结中T细胞亚群,以及脾中树突状细胞表面分子和调节性T细胞的表达情况。每周称量小鼠体重,观察免疫后小鼠的生长状况。结果表明,与FMDV单独免疫对照组相比,中剂量和高剂量的CARCP可以诱导产生更高水平的FMDV特异性IgG、IgG1和IgG2a(P<0.01)。中剂量的CARCP显著增加小鼠脾和淋巴结中CD4、CD8、CD44 T细胞百分比(P<0.05)。同时,中剂量的CARCP可以显著促进脾树突状细胞CD86和MHC-II分子的表达(P<0.05),并显著下调CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)T细胞水平(P<0.05)。CARCP对免疫后小鼠生长和体重无显著影响(P>0.05)。综上表明,CARCP作为FMDV佐剂可以促进DC成熟,抑制调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)表达,增强FMDV特异性的体液和细胞免疫应答,具有良好的佐剂效果,为口蹄疫灭活疫苗多糖佐剂的开发提供一定的研究基础。

新疆栽培与野生一枝蒿粗多糖对口蹄疫疫苗免疫小鼠的佐剂活性比较

基于总物质量和多糖含量比较栽培/野生一枝蒿粗多糖(cultivated/wild Artemisia rupestris L.crude polysaccharides,CARCP/WARCP)作为口蹄疫灭活疫苗(foot-and-mouth disease inactivated vaccine,FMDV)佐剂对小鼠抗体水平及T细胞亚群的影响,探究CARCP/WARCP的佐剂活性和安全性。CARCP/WARCP配伍FMDV肌肉途径免疫ICR小鼠,检测免疫后小鼠血清中FMDV特异性抗体及分型,脾中T细胞亚群比例,血清中IgE水平,观察临床症状和注射部位反应以及小鼠体重。结果显示,总物质量一致时,CARCP1/WARCP1均能极显著提高FMDV特异性IgG、IgG_(2a)反应(P<0.01),极显著促进脾T细胞CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)CD44^(+)、CD8^(+)CD44^(+)CD62L^(+)百分比(P<0.05),显著提高IgG_(1)、IgG_(2a)/IgG_(1)比值,显著促进CD3^(+)CD8^(+)、CD8^(+)CD44^(+)、CD8^(+)CD44^(+)CD62L^(-)比例(P<0.05),且除28 d IgG和IgG_(1)指标外,CARCP1的佐剂活性显著高于WARCP1(P<0.05)。多糖含量一致时,与FMDV相比,CARCP2/WARCP2均极显著增强了28 d IgG水平、IgG_(2a)/IgG_(1)比值(P<0.01),显著提高了21 d IgG、28 d IgG_(2a)及CD4^(+)CD44^(+)(P<0.05),且CARCP2/WARCP2之间差异不显著(P>0.05)。CARCP/WARCP没有引起小鼠脱毛等临床症状,也没有产生肉芽肿、肿胀等注射部位不良反应;CARCP/WARCP免疫后各组小鼠体重之间差异不显著(P>0.05);各组小鼠血清均没有检测到IgE抗体(P>0.05);这些结果表明CARCP/WARCP有一定的安全性。综上,当总物质量一致时,CARCP/WARCP均能增强FMDV免疫小鼠体液和细胞免疫反应,且CARCP的佐剂活性优于WARCP;多糖含量一致时,CARCP/WARCP作为FMDV佐剂的免疫增强效果相当,是安全佐剂候选物。

柳蒿芽多糖的制备及抗氧化活性研究

目的:从柳蒿芽中分离、纯化多糖,对其抗氧化活性进行研究。方法:采用响应面法优化超声波辅助酶法提取柳蒿芽多糖的工艺条件。结果:最佳提取工艺为:超声功率300 W,料液比1∶30 g/mL,超声时间46 min,纤维素酶添加量2.0%,果胶酶添加量3.0%,此条件下多糖得率为7.67%。采用DEAE-52层析柱分离、纯化共得到6个多糖组分。对AIP-2和AIP-3两个组分进行抗氧化活性的研究表明,不同质量浓度AIP-2和AIP-3处理对H_(2)O_(2)诱导的HepG2细胞氧化损伤均有较强的浓度依赖性保护作用。与模型组相比,高质量浓度AIP-2和AIP-3(50μg/mL)处理使细胞存活率提高了54.35%和60.26%,SOD活力提高了35.86%和38.98%,CAT活力提高了173.02%和205.42%,GSH-PX活力提高了50.24%和50.78%,MDA含量降低了46.13%和53.87%。结论:柳蒿芽多糖具有良好的抗氧化活性。