Extraction,Physiochemical Properties and Antibacterial Activities of Polysaccharides from Auricularia auricular

[Objective] To explore the optimal conditions for extracting polysaccharide from Auricularia auricular, and to study its physiochemical properties and antibacterial activities. [ Method] The extraction conditions for Auricularia auricular polysaccharides were optimized by orthogonal test, and its physiochemical characteristics and antagonistic activities on bacteria and molds were tested. I-Result] The optimized condition was with sample to liquid ratio of 1 ： 50, temperature of 90 ℃ and extraction time of 2.5 h. Under the optimized condition, the yield of pelysaccharide was 7.3%, with polysaccharide content of 77.81%. Containing aldose and amylase, the polysaccharides of Auncu/aria auricular was soluble in water. The inhibitory effect on bacteria was significantly stronger than on molds that the minimum diameter of inhibition zone for bacteria is 12.7 mm, while 7.9 mm for the molds. [ Conclusion] This study provides scientific basis for the development and utilization of Auricularia auricular polysaccharides.

忍冬木层孔菌多糖的提取工艺优化及其体外抗氧化活性研究

忍冬木层孔菌(Phellinus lonicerinus(Bond.) Bond.et Sing)为湖北等地习用的桑黄品种,也是土家族常用药,多糖是其主要活性成分。为了研究忍冬木层孔菌子实体多糖(Phellinus lonicerinus polysaccharide, PLP)的提取工艺及其体外抗氧化活性,采用冷凝回流提取法在单因素实验结果的基础上,进行Box-Behnken响应面分析,确定PLP的最佳提取工艺,并通过测定忍冬木层孔菌多糖(PLP30、PLP60、PLP85、PLPA1和PLPA2)的还原能力、对DPPH、ABTS、羟基自由基的清除能力、对酪氨酸酶活性的抑制能力。结果显示PLP最佳提取工艺的参数为:料液比1∶20 g/mL、提取时间120 min、提取温度100℃,此条件下PLP提取率为(3.16±0.05)%;五种多糖对DPPH、ABTS和羟基自由基均具有较强的清除作用,且具有较强的还原力,其对ABTS自由基清除作用和还原力均与浓度呈量效关系。表明忍冬木层孔菌子实体多糖具有良好的体外抗氧化和一定的酪氨酸酶活性抑制能力。

冬荪多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

冬荪是一种珍稀食用菌,为高值化利用冬荪资源,探究冬荪菌托多糖和子实体多糖对免疫抑制小鼠免疫功能和肠道菌群的影响,综合评价其免疫调节活性。结果表明,不同剂量冬荪菌托多糖组和子实体多糖组小鼠全血白细胞数和脾脏指数均升高(P<0.05,P<0.01或P<0.001);血清中肿瘤坏死因子α、干扰素γ水平和乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶活力显著提高(P<0.05,P<0.01或P<0.001);脾脏丙二醛含量显著降低(P<0.05或P<0.001),过氧化氢酶活力显著升高(P<0.01或P<0.001);脾脏组织中淋巴细胞数量增多,淋巴细胞排列得到改善。冬荪菌托多糖和冬荪子实体多糖可促进短链脂肪酸生成,改变免疫抑制小鼠肠道菌群的组成,增加拟杆菌门(Bacteroidetes)相对丰度,减少厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度。

灵芝子实体多糖提取工艺优化及对哮喘小鼠改善作用

为优化灵芝子实体多糖提取工艺并初步研究其对哮喘小鼠的改善作用,以灵芝子实体多糖提取率为响应值,在单因素试验基础上,采用响应面法优化多糖提取工艺条件。通过卵清蛋白诱导哮喘小鼠模型,以地塞米松(5 mg/kg)为阳性对照,考察低、中、高剂量灵芝多糖(50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg)对哮喘小鼠肺组织病理形态、肺泡灌洗液白细胞及细胞分类计数以及白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。结果表明,灵芝多糖最优提取工艺为:超声功率400 W,超声时间40 min,料液比1∶15(g∶mL)。在此最佳工艺条件下,多糖提取率为(3.22±0.04)%。与模型组相比,高剂量灵芝多糖组可显著改善哮喘小鼠肺组织血管和支气管壁明显增厚、大量炎性细胞浸润等病理变化,肺泡灌洗液中白细胞总数、淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞数量以及IL-6、TNF-α的水平分别降低至(34.96±5.81)×10^(4) CFU/mL、(25.61±3.59)×10^(4) CFU/mL、(4.67±1.59)×10^(4) CFU/mL、(3.06±1.131)×10^(4) CFU/mL、(82.62±14.07)pg/mL、(208.16±19.60)ng/L。结果显示灵芝多糖提取物可改善哮喘小鼠的炎症反应。

不同LED光质对莞香灵芝子实体生长发育的影响

目的研究5种LED光质对莞香灵芝子实体生长发育及其主要活性成分的影响。方法将不同光质的LED光源设为光照条件(红、蓝、黄、绿、白光为处理组,黑暗为黑暗组),对灵芝子实体进行培养,观察其生长速率、形态、多糖含量及三萜含量。结果红、绿、黄、白、蓝5种光质处理组的灵芝子实体菌盖直径和干重均大于黑暗组(P<0.01或0.05),黄光组的子实体干重最大(P<0.01或0.05),灵芝子实体出芝数和菌盖厚度与黑暗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。在灵芝的5个生长时期,蓝光组的多糖含量均明显高于其他各组(P<0.01);现蕾期、开伞期、弹孢前期,黄光组多糖含量高于除蓝光组外的其他各组(P<0.01);弹孢后期,白光组的多糖含量显著高于除蓝光组外的其他各组(P<0.01)。芝盖形成期,红光组的灵芝三萜含量低于其他各组(P<0.01);弹孢前期,绿、白、红和蓝光组的灵芝三萜含量高于黑暗组(P<0.01或0.05)。现蕾期、开伞期和弹孢后期,各组灵芝三萜含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论5种LED光质均影响莞香灵芝子实体的生长发育及其主要活性成分的生成,应根据各光质对灵芝子实体影响效果不同的特点合理安排光照。

沪农系列灵芝新品种活性成分及免疫活性对比研究

以相同条件下栽培获得的沪农系列7个不同品种的灵芝(Ganoderma lucidum)子实体作为研究材料,分析比较其总多糖、核苷、三萜和糖醇的含量、多糖重均分子量分布特征差异以及刺激RAW 264.7巨噬细胞释放NO的活性。结果表明:不同品种灵芝总多糖含量在1.15%~5.11%之间,含量较高的3个品种由高到低为‘沪农芝7号’(5.11%)、‘沪农芝8号’(2.36%)、‘沪农灵芝4号’(2.07%)。不同灵芝品种粗多糖分子量分布存在差异,‘沪农灵芝4号’主要含有重均分子量为3.38×10^(6)、4.24×10^(6)、4.38×10^(3)g·mol^(-1)的三个多糖组分,‘沪农灵芝1号’主要含有重均分子量为1.01×10^(7)和8.03×10^(3)g·mol^(-1)的两类多糖组分,‘沪农芝7号’主要含有重均分子量为4.50×10^(5)、6.20×10^(3)g·mol^(-1)的两个多糖组分,其余4个品种均含有重均分子量为(4.56×10^(3)~5.47×10^(3))g·mol^(-1)的多糖组分。7个灵芝新品种子实体中均含有胞苷、尿苷、鸟苷,其中‘沪农灵芝4号’的总核苷含量最高(1456.5μg·g^(-1));总三萜的含量为2241.93~5123.54μg·g^(-1),最高的为‘沪农灵芝1号’(5123.54μg·g^(-1));不同灵芝品种的糖醇含量存在一定差异,主要含有阿拉伯糖醇和甘露糖醇,赤藓糖醇含量较低,均低于0.9 mg·g^(-1)。七种灵芝子实体的粗多糖浓度在50~500μg·mL^(-1)范围内均能增强RAW 264.7巨噬细胞NO的释放量,其中‘沪农灵芝5号’的活性最强。研究结果将为沪农系列灵芝新品种的开发利用和推广应用提供参考。

桑黄子实体多糖的提取工艺优化、结构解析及免疫活性分析

以桑黄子实体为原料,优化桑黄子实体多糖的提取条件,对其结构进行解析并评价其免疫调节活性。以提取温度、提取时间、料液比、提取次数为因素,采用单因素实验及正交试验优化桑黄子实体多糖提取条件,利用酶解法和透析法纯化多糖,通过相对分子质量测定、傅里叶红外光谱、单糖组成和甲基化分析其化学结构,并采用RAW-Blue^(TM)细胞实验初步研究其免疫活性。结果表明,桑黄子实体多糖提取的最优工艺条件为:料液比为1:40(g/mL),提取温度为100℃,提取时间为2.0 h,提取次数为3次,该条件下多糖得率为6.71%,总糖纯度为81.69%±0.19%,分子量为10.77 kDa,其主要由(1→4)-Glc组成,并含有少量的(1→6)-Glc和(1→3)-Glc;多糖可以增强RAW-BlueTM细胞分泌胚胎碱性磷酸酶的活性,并能增强RAW-Blue^(TM)巨噬细胞的吞噬能力。研究结果可为桑黄子实体多糖在食品和药品中的开发与应用提供理论依据。

迷宫栓孔菌子实体提取物的抗氧化活性研究

[目的]探究水和乙醇对迷宫栓孔菌(Trametes gibbosa)的提取效果及其提取物的抗氧化活性,并分析其主要抗氧化成分。[方法]以水和60%乙醇为溶剂提取迷宫栓孔菌子实体,以DPPH自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率以及铁离子还原力进行抗氧化活性评价,福林酚法测定多酚含量,硫酸蒽酮法测定多糖含量,将抗氧化指标与多酚和多糖含量之间进行Pearson相关性分析。[结果]水提取物的得率为10.60%,60%乙醇提取物得率为4.27%;水提取物的多酚含量较高,60%乙醇提取物的多糖含量较高;所有处理均表现出良好的DPPH自由基清除能力和铁离子还原力,以及一定程度的超氧阴离子自由基清除能力,且水提取物的前2项指标均显著高于60%乙醇提取物;3项抗氧化指标均与多酚和多糖含量呈极显著正相关。[结论]迷宫栓孔菌的水提取物和60%乙醇提取物均具有抗氧化活性,水提取物的抗氧化活性更强,多酚及多糖都是其提取物的重要抗氧化活性成分,多酚的活性更强。

灵芝子实体多糖发酵工艺条件优化及抗氧化活性

为更好辅助和研究灵芝多糖,并进一步提高灵芝孢子亚门实体细胞壁基质(灵芝子实体)中灵芝多糖的抗氧化活性,选取产朊假丝酵母(Candida utilis)和扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)作为灵芝混合多糖发酵菌种。以灵芝子实体多糖中的DPPH自由基清除率为响应值,结合单因素试验,并通过Box-Behnken设计的响应面法来进一步优化分析灵芝子实体多糖的发酵工艺。结果表明,最优的液态发酵反应条件:发酵时间60 h、接种菌量3%、pH4、发酵温度26℃。灵芝子实体多糖在此最佳发酵工艺参数下,DPPH自由基清除率为90%。说明了灵芝子实体多糖经过发酵加工后,具有较强的天然抗氧化活性。

加压辅助碱法提取蝉花子实体多糖工艺优化及体外免疫活性研究

目的优化加压辅助碱法提取蝉花子实体(人工培植)多糖的工艺,并研究其免疫活性。方法以多糖提取率为指标,在单因素基础上,经正交实验优化其提取工艺。同时以小鼠体重增长率、脏器指数,血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量、免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)的含量以及小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数作为指标来评价免疫活性。结果最佳提取工艺条件为:氢氧化钠浓度0.2 mol/L、提取压力1.0 MPa、提取温度80℃、提取时间40 min,在此条件下多糖提取率为8.68%,该方法提取效果优于单一提取法。体外免疫活性实验表明,蝉花子实体多糖能有效增加模型小鼠的体重增长率及脏器指数,细胞因子(TNF-α、IL-2和IL-6)、免疫球蛋白(IgA、IgG和IgM)的含量和脾淋巴细胞增殖刺激指数,表明其具有明显的提高免疫力作用。结论优化后的提取条件能够有效提取蝉花子实体多糖,所得多糖具有明显的提高免疫力作用。该研究可为蝉花子实体多糖的提取及开发应用提供科学依据。

超声辅助提取桑黄子实体多糖及其单糖组分分析

以桑黄子实体为原料,采用超声波辅助法提取桑黄子实体多糖。以多糖得率为考核指标,在单因素试验的基础上通过响应面法优化提取工艺,并分析桑黄子实体多糖的单糖组分。结果表明:最佳提取工艺条件为超声时间30 min、料液比1∶42(g/mL)、超声温度60℃,在此条件下桑黄子实体多糖得率为8.12%。桑黄子实体多糖主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖组成,含量分别为60.3%、14.4%、12.1%、6.2%。

灰树花子实体多糖和菌丝体多糖的比较分析

从灰树花 (Grifolafrondosa)子实体和菌丝体中提取分离得到子实体多糖F -D和菌丝体多糖M -D ,得率分别是 0 .5 9%、0 .31% ;F -D的糖、蛋白质含量为 6 4 .8%、15 .6 % ,M -D糖、蛋白质含量是 6 5 .9%、7.37% ;气相色谱分析单糖组成 ,F -D由岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖组成 ,各单糖的摩尔比为 0 .9:0 .5 :1.3:5 .0 :2 .9:10 0 .0 ;M -D由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖组成 ,各单糖的摩尔比为 5 .9:8.5 :3.2 :2 3.2 :6 .5 :11.7:10 0 .0 ;红外光谱图显示F -D和M -D约在 890cm- 1处有吸收 ,1H -NMR谱显示两者在 5mg/L以上均无吸收 ,13C -NMR谱显示两者在 10 5× 10 - 6 、86× 10 - 6 、和 71× 10 - 6 处均有吸收 ,提示F -D和M -D多糖中均存在 β(1→ 3)和 (1→ 6 )糖苷键。

黄伞子实体多糖的提取及免疫功能

以黄伞子实体为原料,采用水提醇沉法提取黄伞子实体多糖,通过响应面优化和SAS软件分析确定最佳提取工艺,比较了Sevag法和中性蛋白酶与Sevag法联合两种方法除蛋白的效果,并初步探讨了黄伞子实体多糖的免疫调节作用。结果表明,水提醇沉法提取黄伞子实体多糖最佳工艺条件及得率为:提取次数2次、料液比1g:24mL、提取时间2h、提取温度90℃,多糖得率为16.05%。中性蛋白酶与Sevag法联合除蛋白得到多糖纯度为72.88%,比仅用Sevag法提高44.71%。动物试验结果表明,黄伞子实体多糖有显著提高小鼠免疫功能的作用。

猴头菌子实体和菌丝体多糖的分离纯化与理化特征的比较

人工栽培的猴头菌子实体和固体培养的菌丝体分别经热水提取，浓缩、醇析后得子实体粗多糖（HFP）和菌丝体粗多糖（HMP），HFP的得率和多糖含量均高于HMP；两者再经透析、Sevag法脱蛋白、乙醇分级沉淀、SephadexG-100柱层析纯化，得子实体纯多糖hfp-1和菌丝体纯多糖 hmp-2，经HPLC检测hfp-1和hmp-2为单一均匀多糖。气相色谱分析表明hfp-1的单糖组成为阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖，摩尔比为：0.12：0.04：1.00：0.71；hmp-2的单糖组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖，摩尔比为：0.25：0.41：0.31：1.00：0.29。紫外光谱分析表明组成中不含核酸和蛋白质，红外光谱分析二者均有多糖特征吸收峰，hfp-1有β-型连接的吸收峰，hmp-2无明显的β-型连接的吸收峰；经HPLC进行分子量测定，hfp-1的分子量为54000，hmp-2的分子量为68000。猴头菌子实体多糖和菌丝体多糖在化学组成上有一定的差异。

粗毛纤孔菌子实体多糖的提取及免疫功能研究

以粗毛纤孔菌子实体为原料,采用水提醇沉法提取粗毛纤孔菌子实体多糖,通过响应面优化和Design-Expert7.1软件分析确定最佳提取工艺,并初步探讨了粗毛纤孔菌子实体多糖的免疫调节作用。结果表明,水提醇沉法提取粗毛纤孔菌子实体多糖最佳工艺条件及得率为:水浴时间为5.2h,水浴温度80℃,料液比为1∶29g/mL,多糖得率为9.65%。动物实验结果表明,粗毛纤孔菌子实体多糖有显著提高小鼠免疫功能的作用。

蒙古口蘑及其多糖提取物对小鼠免疫功能的影响

研究蒙古口蘑及其多糖对小鼠免疫功能的影响。小鼠经灌胃给药,测定小鼠免疫器官指数、血清中抗体水平、单核-巨噬细胞吞噬功能和溶菌酶含量。结果显示,低剂量菌丝体粉能显著增加小鼠胸腺指数,高剂量子实体粉和低剂量菌丝体多糖能显著提高小鼠脾脏指数;子实体粉与菌丝体粉及其多糖均能提高小鼠血清平均溶血素和溶菌酶的含量,同时也能增强单核-巨噬细胞吞噬功能,提示蒙古口蘑及其多糖均能明显提高小鼠机体的免疫功能。

猴头菇子实体中的主要多糖成分

目的对猴头菇子实体中的多糖进行分离、纯化和组成分析。方法猴头菇依次经过水提取和碱提取,所得粗多糖以DEAE-celluose色谱、Sephadex凝胶滤过色谱和Fehling试剂沉淀等方法进一步分离纯化,高效凝胶滤过法(HPGPC)鉴定纯度及相对分子质量,气相色谱和IR光谱分析多糖的比旋光度和化学组成。结果从猴头菇子实体中提取得3部分粗多糖CPW、CPB1和CPB2,经分离纯化得到5种多糖HEP-1～HEP-5,其中HEP-1和HEP-4为杂多糖,HEP-3和HEP-5为葡聚糖,HEP-2为酸性多糖。结论猴头菇子实体分到的5种多糖主要含以D-葡萄糖为主的中性糖,以葡聚糖含量最多,其中HEP-1、HEP-2为新类型的真菌多糖。

黄伞子实体多糖的提取纯化及单糖组成分析

从黄伞子实体中提取粗多糖,并经Sevage法脱蛋白、活性炭脱色得精制黄伞多糖;用气相色谱法分析黄伞子实体多糖的单糖组成,结果表明:黄伞子实体多糖主要由木糖、葡萄糖和半乳糖组成;各单糖质量分数分别为1.03%,2.30%,96.7%。

蛹虫草多糖的酶法修饰及其抗氧化活性

为了提高蛹虫草多糖的抗氧化活性,采用α-淀粉酶对蛹虫草多糖进行酶法修饰。以DPPH自由基清除率为响应值,运用响应面分析法对α-淀粉酶修饰蛹虫草多糖的工艺进行优化,研究酶修饰后蛹虫草多糖清除DPPH自由基、螯合Fe2+和还原力等抗氧化活性,并对其三螺旋体结构进行分析。结果表明:对修饰多糖抗氧化活性的影响因素从大到小依次为:加酶量、酶解温度、酶解pH值;α-淀粉酶修饰蛹虫草多糖的最优工艺条件为:酶解温度48.5℃、酶解pH 5.8、加酶量259.5U/g,在此条件下,酶修饰后蛹虫草多糖对DPPH自由基的清除率预测值为81.4%,验证值为(81.6±1.6)%,结果重现性好,可用于实际预测。抗氧化实验表明,α-淀粉酶法修饰后,蛹虫草多糖清除DPPH自由基和螯合Fe2+的EC50值分别为:0.0247、1.0120mg/mL,分别比酶法修饰前提高了55.1%和39.8%;同时,蛹虫草多糖的还原力也得到了显著提高(P<0.05)。三螺旋体结构分析表明,蛹虫草多糖经α-淀粉酶修饰后,其三螺旋体结构有轻微破坏,但仍然保持三螺旋体结构。

人工培育蝉花孢梗束分级多糖的抗氧化活性及对果蝇寿命的影响

对人工培育的蝉花孢梗束采用不同浓度乙醇进行分级醇沉,对获得的分级多糖以DPPH自由基清除能力、还原力、铁离子螯合能力为指标进行了体外抗氧化活性分析;将各分级多糖按照1%的比例添加到野生黑腹果蝇基础培养基中,以不添加多糖饲喂的果蝇为对照组,以果蝇平均寿命、半数死亡时间和最高寿命为指标评价分级多糖对果蝇寿命的影响;以果蝇体内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)酶活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量为指标评价分级多糖的体内抗氧化活性。试验结果表明,蝉花孢梗束的各分级多糖均具有体外抗氧化活性,且多糖的抗氧化能力与其质量浓度呈正相关。其中P40、P60、P70的DPPH自由基清除活性较强,其EC50依次分别为0.278、0.326、0.385 mg/m L;P60、P70、P30的还原能力较强;P60、P70、P80的铁离子螯合能力较强。在果蝇寿命实验中,P60可显著提高雌雄果蝇的平均寿命、半数死亡时间和最高寿命(p<0.05);P60分级多糖显著提高了雌、雄果蝇体内SOD酶的活性(p<0.05),P70、P90分级多糖显著降低了雄果蝇体内MDA的含量(p<0.05),其次是P60多糖,但各分级多糖对雌果蝇体内MDA含量的影响差异不显著。总之,蝉花孢梗束各分级多糖均具有抗氧化活性,P60分级多糖的活性相对最强。