草药补充剂PC SPES组分碎米桠中具抗血管生成活性的ponicidin和oridonin

PC SPES是一种饮食补充剂，由一种北美植物(锯齿棕)和7种中草药(菊花、灵芝、甘草、菘蓝、三七、碎米桠和黄芩)的提取物组成。由于其显著的临床疗效和改善前列腺癌患者生活质量的作用，该剂作为晚期前列腺癌的替代疗法受到人们的普遍欢迎。作者已证实PCSPES的抗血管生成活性是由碎米桠Rabdosia tubescens(Hemsl．)Hara产生的，现又以一新开发的以人皮肤微血管内皮细胞血管生成体外试验为导向，从该植物分得2个二萜类成分ponicidin(1)和oridonin(2)，研究了它们的抗血管生成活性。

显脉香茶菜化学成分的研究

从江西省宜丰地区产显脉香茶菜的嫩茎、叶中分得３种二萜化合物，根据光谱解析及理化鉴别，分别确定为ｌａｓｉｏｋａｕｒｉｎ，ｐｏｎｉｃｉｄｉｎ和冬凌草素（ｏｒｉｄｏｎｉｎ），系首次从该植物中分得。

稀土元素镧和铈对冬凌草再生植株生长及次生代谢产物的影响

以冬凌草无菌苗为材料,在冬凌草再生植株时期,添加不同浓度的稀土元素镧和铈,用重量法测定其单株平均鲜重及干重,用高效液相法测定冬凌草甲素、乙素、迷迭香酸的含量,参考农作物、园艺作物种质评比的方法,根据冬凌草生产中各项指标的重要性,设置权重,计算加权后得到综合评分对其进行综合评价,探讨稀土元素镧、铈对冬凌草再生植株产量及次生代谢产物冬凌草甲素、乙素、迷迭香酸含量的影响。结果表明:空白对照组综合评分为62.99分,添加稀土元素铈的条件下,1μmol·L-1Ce Cl3·7H2O评分最高为87.96分,添加稀土元素镧的条件下,5μmol·L-1La Cl3·6H2O评分最高为74.44分,这表明Ce Cl3·7H2O对冬凌草再生植株生长及次生代谢产物积累的促进作用优于La Cl3·6H2O;适宜浓度的镧、铈能促进冬凌草再生植株的生长及次生代谢产物冬凌草甲素、冬凌草乙素、迷迭香酸的合成,而高浓度10μmol·L-1La Cl3·6H2O具有抑制的情况。该研究结果将对进一步研究稀土元素对冬凌草再生植株生长的促进作用机制奠定基础,为植物组织培养中如何科学合理地使用稀土元素提供理论依据。

2D NMR方法研究抗癌药物冬凌草乙素的结构与谱线归属

用异核化学位移相关谱、远程异核化学位移相关谱和同核化学位移相关谱等现代核磁共振技术对抗癌中草药冬凌草中分离出的抗癌、抗菌有效成分冬凌草乙素分子的^(13)C和~1H化学位移进行了完全归属,为冬凌草乙素分子溶液中的三维空间结构研究提供了可靠的结构参数。

TLC测定冬凌草叶中冬凌草甲、乙素的含量

目的：研究冬凌草叶中冬凌草甲、乙素的含量测定。方法：采用薄层扫描法进行测定。结果：冬凌草甲素浓度在９．５０μｇ～４７．５０μｇ之间线性关系良好，相关系数ｒ＝０．９９９，回收率为９８．５４％，测定的ＲＳＤ＝１．４１％。冬凌草乙素浓度在９．９８μｇ～４９．９０μｇ之间线性关系良好，相关系数ｒ＝０．９９９，回收率为９８．０７％，测定的ＲＳＤ＝１．３５％。结论：本法简便、准确、灵敏，重现性好，可用于冬凌草的质量控制。由本法测定结果表明，生长在济源太行山区８月份的冬凌草叶中冬凌草甲。

高效液相色谱法测定冬凌草中冬凌草甲素及冬凌草乙素的含量

目的 :建立冬凌草的质量控制方法。方法 :高效液相色谱法同时对冬凌草中冬凌草甲素、冬凌草乙素进行了含量测定。采用 C1 8柱 ,以甲醇 -水 (5 5∶ 4 5 )为流动相 ,检测波长 2 38nm。结果 :冬凌草甲素的浓度在 0 .15 2～ 1.5 2 μg/ ml,冬凌草乙素的浓度在 0 .2～ 2 μg/ ml范围内 ,线性关系良好 (冬凌草甲素 r=0 .9998,n=5 ;冬凌草乙素 r=0 .9992 ,n=5 ) ,平均回收率冬凌草甲素为 99.1% ,RSD为 0 .4 % ;冬凌草乙素为 98.0 % ,RSD为 0 .6 %。结论 :该法准确、灵敏、可靠 ,可用于冬凌草的质量控制。

大鼠灌胃冬凌草乙素的药代动力学研究

建立冬凌草乙素血药浓度的高效液相色谱测定方法,并探讨其在大鼠体内的药代动力学特点.大鼠灌胃冬凌草乙素20 mg/kg后,于不同时间点采血,利用HPLC测定血药浓度,并求算药动学参数.冬凌草乙素在50～5 000μg/L浓度范围内线性关系良好(r=0.998 1),样品在血浆中的绝对回收率大于80%,日内、日间的RSD均小于15%,灌胃后其主要动力学参数AUC0-t,AUCt-∞,ke,T1/2,CL/F,Cmax,Tmax分别为(9.85±2.89)mg.h/L,(11.81±3.45)mg.h/L,(0.11±0.04)h-1,(3.52±1.16)h,(1.08±0.10)L/(kg.h),(3.07±2.30)μg/L,(0.67±0.33)h.所建立的定量分析方法精密、准确、选择性强,可用于冬凌草乙素在大鼠体内的药动学研究.根据药动学参数,可以得知冬凌草乙素在大鼠体内消除较快,不易蓄积.

冬凌草叶中冬凌草甲、乙素的含量测定

采用薄层扫描法测定了冬凌草叶中冬凌草甲、乙素的含量.结果表明:线性范围内冬凌草甲素的相关系数r=0.999,回收率为98.54%,RSD=1.41%;冬凌草乙素的相关系数r=0.999,回收率为98.07%,RSD=1.35%.本研究表明,生长在济源太行山区8月份的冬凌草叶中冬凌草甲、乙素的含量相对最高.

冬凌草乙素联合放疗对肺癌A549细胞凋亡的协同作用及miR-16-5p/WEE1信号轴的影响

目的:探讨冬凌草乙素联合放疗对肺癌A549细胞凋亡的协同作用及微小RNA-16-5p(miR-16-5p)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(WEE1)信号轴的影响。方法:设A549细胞组、放疗组(6 Gy·min^(-1)的固定剂量率发射,照射孵育24 h)、冬凌草乙素组(20 mg·L^(-1))、放疗+冬凌草乙素组(冬凌草乙素浓度为20 mg·L^(-1),并以6 Gy·min^(-1)的固定剂量率发射,照射孵育24 h);培养结束后,CCK-8法测定细胞增殖水平,Transwell腔室系统测定细胞侵袭水平,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法测定细胞miR-16-5p、WEE1 mRNA和蛋白水平。结果:与A549细胞组比较,放疗组、冬凌草乙素组、放疗+冬凌草乙素组光密度(OD)值、存活率、穿膜数、WEE1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、miR-16-5p表达显著升高(P<0.05);与放疗组、冬凌草乙素组比较,放疗+冬凌草乙素组OD值、存活率、穿膜数、WEE1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、miR-16-5p表达显著升高(P<0.05)。结论:冬凌草乙素联合放疗对肺癌A549细胞凋亡具有协同作用,其机制可能与冬凌草乙素促进miR-16-5p的表达进而抑制WEE1表达有关。

冬凌草甲素和冬凌草乙素与谷胱苷肽的迈克尔加成反应

采用紫外光谱动力学方法测定了抗肿瘤对映贝壳杉烯二萜冬凌草甲素和冬凌草乙素与谷胱苷肽迈克尔加成反应的级数、速率常数和平衡常数.结果表明,冬凌草甲素和冬凌草乙素与与谷胱苷肽迈克尔加成反应符合二级动力学方程,25℃下的速率常数分别为16.196 0L·(mol·s)-1和7.480 5L·(mol·s)-1,平衡常数分别为177.98L/mol和85.60L/mol.冬凌草甲素与谷胱苷肽迈克尔加成反应速率和反应程度均比冬凌草乙素的大得多,反应活性更好.对映贝壳杉烯二萜通过与机体发生迈克尔加成反应而产生抗肿瘤作用;因此,冬凌草甲素可能比冬凌草乙素具有更好的抗肿瘤活性.

迈克尔加成反应预测冬凌草活性成分及其乙酰化产物抗肿瘤活性（英文）

为了快速、简便地评价冬凌草(Isodon rubescens(Hemsley)H.Hara)活性成分的抗肿瘤活性,以冬凌草活性成分冬凌草甲素和冬凌草乙素及其乙酰化产物与对硝基苯甲酰乙酸乙酯(ENBA)进行迈克尔加成反应,以反应动力学得出迈克尔加成反应的反应活性,首次以反应活性预测了对冬凌草甲素(1)、冬凌草乙素(2)、1,14-二乙酰基冬凌草甲素(1a)和1,6-二乙酰基冬凌草乙素(2a)4个对映-贝壳杉烯的抗肿瘤活性。结果表明:4种活性成分的迈克尔加成反应均符合二级动力学方程,反应活性1>1a>2>2a,根据阿伦尼乌斯公式,测得冬凌草甲素活化能(Ea)为(38.7±5.8)kJ/mol,冬凌草乙素Ea为(46.8±7.1)kJ/mol。采用~1H NMR和^(13) C NMR等波谱技术鉴定冬凌草甲素与ENBA经迈克尔加成反应得到的新化合物为1α,6β,7β,14β-四羟基-7α,20-环氧-17-(2-(3-(4-硝基苯基))-3-氧-丙酸乙酯)-对映贝壳杉烷-15-酮,命名为nitrobenoridonin(1b)。4个对映-贝壳杉烯具有较强的体外抗肿瘤活性,经测定它们的抗肿瘤活性大小依次为1>1a>2>2a,与其迈克尔加成反应活性排序一致,表明迈克尔加成反应活性与抗肿瘤活性之间存在较好的相关性,可以通过测定迈克尔加成反应活性预测对映-贝壳杉烯的抗肿瘤活性。

有部分峰重叠时NOESY谱的全弛豫矩阵分析

采取用理论计算的NOESY峰强度代替NOESY谱中重叠的对角峰或交叉峰强度,用理论计算值和实验数据相结合的方法解决峰强度矩阵的完整化问题,用全弛豫矩阵分析法定量分析了谱中有部分峰重叠的天然有机化合物冬凌草乙素的相敏NOESY谱,计算出冬凌草乙素分子中各质子间的交叉弛豫速率,根据1/r_(ij)~6ocσ_(ij)计算出相应的质子间距离,结果表明:用全弛豫矩阵分析法计算出的质子间距与分子力学计算得到的质子间距离完全一致。该方法能够用于谱中有部分峰重叠的天然有机化合物的NOESY谱的定量处理。

冬凌草乙素对U937细胞的生长抑制作用及β-catenin表达水平的影响

目的:探讨冬凌草乙素对U937细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法:以不同浓度的冬凌草乙素作用于体外培养的U937细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡;采用RT-PCR对细胞凋亡前后β-catenin的表达水平进行检测。结果:冬凌草乙素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系。在冬凌草乙素抑制细胞增殖过程中β-catenin的表达水平显著下降。结论:冬凌草乙素能抑制U937细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低β-catenin的表达水平可能是其重要作用机制之一。这为冬凌草乙素抗白血病的进一步研究提供了有力的实验依据。

冬凌草乙素通过Wnt/β-catenin信号通路对裸鼠K562细胞移植瘤的抑制作用

目的探讨单体化合物冬凌草乙素抑制K562细胞裸鼠皮下移植瘤的作用效果及可能的作用机制。方法建立K562皮下移植瘤裸鼠动物模型20只,将其随机分为模型对照组、冬凌草乙素低、高剂量(40、80 mg/kg)组、阳性对照组(羟基脲120 mg/kg),每组5只,腹腔连续给药18 d。每周测量各组裸鼠体质量和肿瘤体积,给药结束后处死动物并迅速取出肿瘤分析其抑瘤率。比较各组肿瘤组织中肿瘤细胞的凋亡和坏死情况;比较各组肿瘤组织中β-链蛋白(β-caterin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、c-myc癌基因的信使RNA表达水平及蛋白的表达情况。结果冬凌草乙素能明显抑制裸鼠肿瘤生长体积,呈剂量依赖性并具有统计学意义(P<0.01)。冬凌草乙素组肿瘤细胞出现明显的凋亡和坏死现象。与模型对照组相比,冬凌草乙素组肿瘤组织β-链蛋白、cyclin D1和c-myc信使RNA的表达下调(P均<0.05)。与模型对照组相比,冬凌草乙素各剂量组均能下调肿瘤组织中的β-链蛋白、cyclin D1和c-myc蛋白的表达(P均<0.05)。结论冬凌草乙素能够抑制K562细胞裸鼠移植瘤,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号传导通路实现的。

冬凌草滴丸大鼠体内药动学研究

目的建立在大鼠血浆中同时测定冬凌草甲素与冬凌草乙素的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),研究不同给药剂量冬凌草滴丸中冬凌草甲素与冬凌草乙素在大鼠体内的药动学特征。方法冬凌草滴丸以小(0.3 g·kg^(-1))、中(0.9 g·kg^(-1))、大(2.7 g·kg^(-1))剂量以及累积剂量(0.9 g·kg^(-1),连续给药7 d)对大鼠灌胃给药,以苯海拉明作为内标物,采用LC-MS/MS分析方法检测血浆中冬凌草甲素、冬凌草乙素的浓度,绘制药物浓度-时间曲线。采用DAS3.0版软件计算药动学参数。结果冬凌草滴丸以小、中、大剂量给药后,冬凌草甲素的峰浓度(C_(max))分别为(74.25±29.93),(197.67±38.09),(346.03±34.87)ng·mL^(-1),药物浓度-时间曲线下面积(AUC_(0-t))分别为(85.46±36.06),(187.21±44.27),(654.66±88.50)ng·mL^(-1)·h;冬凌草乙素的C_(max)分别为(30.33±16.15),(37.88±11.95),(60.92±36.60)ng·mL^(-1),AUC_(0-t)分别为(17.44±4.16),(70.77±33.31),(136.25±3.65)ng·mL^(-1)·h。冬凌草滴丸中剂量单次给药与中剂量多次给药后,冬凌草甲素消除半衰期(t_(1/2β))分别为(2.24±1.17),(2.85±0.82)h,冬凌草乙素t_(1/2β)分别为(2.56±0.45),(2.73±0.62)h。结论大鼠给予冬凌草滴丸小、中、大剂量给药后,冬凌草甲素AUC_(0-t)呈线性动力学特征,中剂量单次给药与多次给药后,体内均无蓄积。

不同激素对冬凌草花瓣愈伤组织的诱导及其次生代谢产物的影响

目的:研究不同激素对冬凌草花瓣愈伤诱导及次生代谢产物含量的影响。方法:以冬凌草花瓣为外植体,在1/2 MS附加不同激素配比的培养基上诱导愈伤组织,HPLC法测定冬凌草甲素、乙素的含量,研究不同处理对愈伤组织诱导及次生代谢产物的影响。结果:当NAA的浓度过高时将会引起冬凌草花瓣愈伤组织的褐化。在一定浓度范围的6-BA可以促进冬凌草花瓣愈伤组织中冬凌草乙素的生物合成。1/2 MS+6-BA 2.0 mg·L-1+2,4-D 0.5 mg·L-1为冬凌草花瓣愈伤组织诱导最佳培养基。结论:不同激素对冬凌草花瓣愈伤组织的诱导及冬凌草乙素的含量影响不同,为进一步研究冬凌草愈伤组织的培养提供了依据。

HPLC-PDA指纹图谱结合主成分分析评价不同产地冬凌草药材的质量

目的研究并建立不同产地冬凌草药材的HPLC-PDA指纹图谱,并结合主成分分析法（PCA）评价不同产地的冬凌草药材质量,为科学评价与有效控制冬凌草药材质量提供可靠的方法。方法采用HPLC-PDA法构建冬凌草药材的指纹图谱,同时应用PCA和相似度分析法对实验数据进行处理,以找出4个不同产地18批冬凌草样品间的相似性及差异性。色谱柱为Diamonsil^TMC18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,柱温为30℃;检测波长为238 nm,流动相为乙腈-0.05%磷酸水进行梯度洗脱,体积流量0.8m L/min。结果标定了冬凌草药材HPLC指纹图谱的19个共有峰,并指认了其中的4个共有峰,分别为冬凌草甲素、冬凌草乙素、拉西多宁和迷迭香酸,18批冬凌草药材的相似度为0.421-0.984。PCA结果表明,前3个因子的累积贡献率达到87.3%,选择这3个因子对冬凌草药材进行综合评价。结论 HPLC指纹图谱结合PCA可以快速、客观地评价冬凌草药材的质量差异。

UPLC法同时测定冬凌草中5种有效成分的含量

目的:建立超高效液相色谱法同时测定冬凌草药材中冬凌草甲素、冬凌草乙素、迷迭香酸、齐墩果酸和熊果酸5个主要有效成分的含量。方法:采用WATERS UPLC色谱系统,ACQUITY BEH Shield RP18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相为0.1%甲酸甲醇溶液(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0～9 min,70%A→57%A;9～10 min,57%A→48%A;10～11 min,48%A→48%A;11～14 min,48%A→14%A;14～22 min,14%A→14%A),流速0.2 mL·min-1;检测波长为250 nm(0～12.40min测定冬凌草甲素、冬凌草乙素和迷迭香酸)和210 nm(12.41～22.00 min测定齐墩果酸和熊果酸);柱温23℃。结果:本方法可在22 min内完成5个成分的色谱分析,且各成分色谱峰之间具有良好的分离度;冬凌草甲素、冬凌草乙素、迷迭香酸、齐墩果酸和熊果酸的线性范围分别为0.110～0.990μg(r=0.9997),0.012～0.108μg(r=0.9991),0.030～0.270μg(r=0.9993),0.011～0.099μg(r=0.9991),0.011～0.099μg(r=0.9996);平均加样回收率(n=9)分别为100.9%,95.4%,102.1%,97.1%,99.0%。结论:所建立的超高效液相色谱法简便快速,结果准确可靠,重复性好,可用于冬凌草药材的质量控制与评价。

高效液相色谱法同时测定冬凌草中冬凌草甲、乙素的含量

目的 研究冬凌草中冬凌草甲、乙素的含量测定。方法 采用高效液相色谱法进行测定。结果 冬凌草甲素进样量在0 .196～ 0 .980 μg之间线性关系良好 ,相关系数r =0 .9999,回收率为 99.2 9% ,测定的RSD =2 .1%。冬凌草乙素进样量在0 .1712～ 0 .85 6 0 μg之间线性关系良好 ,相关系数r=0 .9999,回收率为 98.6 3% ,测定的RSD =1.9%。 结论 本法简便、准确、灵敏 ,重现性好 ,可用于冬凌草及其制剂的质量控制。

超滤法测定冬凌草乙素的血浆蛋白结合率

目的:建立大鼠血浆中冬凌草乙素的高效液相色谱(HPLC)分析方法,测定冬凌草乙素的血浆蛋白结合率,为临床安全用药提供参考。方法:采用超滤法结合HPLC法测定冬凌草乙素与大鼠血浆蛋白的结合率。结果:当冬凌草乙素在大鼠血浆中浓度为100,600,3 200 ng·mL-1时,冬凌草乙素与大鼠血浆的蛋白结合率分别为(70.9±3.4)%,(71.0±3.0)%,(69.6±2.9)%。结论:冬凌草乙素与大鼠血浆蛋白具有中等强度的结合,并且在考察浓度范围内血浆蛋白结合率无浓度依赖性。