期刊文献+
共找到385篇文章
< 1 2 20 >
每页显示 20 50 100
清眩润目饮对干眼模型鼠眼表炎性因子IFN-γ、IL-17、MMP3、MMP9的影响
1
作者 刘悦 王佳娣 +2 位作者 韩其琛 赵珊珊 姚靖 《中国中医急症》 2024年第8期1336-1339,共4页
目的 对雌性C57BL/6J小鼠进行干眼造模,给予中药清眩润目饮治疗,观察其对眼表炎性因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-17(IL-17)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的影响。方法 将健康雌性C57BL/6J小鼠随机分为A组(空白... 目的 对雌性C57BL/6J小鼠进行干眼造模,给予中药清眩润目饮治疗,观察其对眼表炎性因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-17(IL-17)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的影响。方法 将健康雌性C57BL/6J小鼠随机分为A组(空白对照组)、B组(模型组)、C组(中药组)、D组(玻璃酸钠组),每组20只。B、C、D组进行干眼造模,C组给予18 mg/(kg·d)的中药灌胃处理,每天2次;D组给予0.1%玻璃酸钠滴眼液,每天2次。实验结束后取小鼠的泪腺、角膜,采用免疫组化法检测IFN-γ、IL-17、MMP3、MMP9水平。结果 在小鼠泪腺组织中,与B组比较,C组IFN-γ及IL-17蛋白表达水平降低(P <0.05),MMP3蛋白表达水平显著降低(P <0.01);与B组比较,D组IFN-γ蛋白表达水平显著降低(P <0.01),MMP9蛋白表达水平降低(P <0.05)。在小鼠角膜组织中,在小鼠角膜组织中,与B组比较,C组MMP3蛋白表达水平降低(P <0.05),MMP9蛋白表达水平显著降低(P <0.01);与B组比较,D组MMP9蛋白表达水平显著降低(P <0.01)。结论 清眩润目饮能够有效下调干眼模型鼠眼表炎性因子IFN-γ、IL-17、MMP3、MMP9水平,减轻干眼眼表损伤。 展开更多
关键词 干眼 干扰素-γ(ifn-γ) 白细胞介素-17(IL-17) 基质金属蛋白酶3(MMP3) 基质金属蛋白酶9(MMP9) 清眩润目饮 小鼠
下载PDF
IFN-α对山羊副流感病毒3型的抗病毒活性 被引量:4
2
作者 孙敏 郝飞 +5 位作者 张纹纹 李文良 杨蕾蕾 毛立 程子龙 刘茂军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期736-743,共8页
旨在探讨原核表达纯化的山羊α干扰素(IFN-α)对山羊副流感病毒3型(CPIV3)的抗病毒活性。通过分析山羊IFN-α的序列特点,比对不同种属IFN-α的同源性,进而构建山羊IFN-α成熟蛋白编码基因(去除信号肽基因序列)的原核表达载体pET-30a-gI... 旨在探讨原核表达纯化的山羊α干扰素(IFN-α)对山羊副流感病毒3型(CPIV3)的抗病毒活性。通过分析山羊IFN-α的序列特点,比对不同种属IFN-α的同源性,进而构建山羊IFN-α成熟蛋白编码基因(去除信号肽基因序列)的原核表达载体pET-30a-gIFN-α,将其转化至感受态细胞Rosetta(DE3),IPTG诱导后镍柱及亲和纯化获得山羊IFN-α。利用RT-qPCR测定山羊IFN-α作用于牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney cell,MDBK cell)后6种干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)的相对表达水平;同时,利用TCID50及Western blot测定其对CPIV3的抗病毒活性。结果表明,原核表达的山羊IFN-α蛋白含量为0.20 mg·mL^(-1),Western blot结果表明表达产物相对分子质量约为20 ku,与预期结果相符。RT-qPCR结果显示,山羊IFN-α孵育MDBK细胞后,可显著刺激RSAD2、STAT1及ISG15等6种ISGs基因的转录上调。与对照组细胞相比,山羊IFN-α显著下调MDBK细胞中CPIV3的病毒滴度,Western blot结果显示,山羊IFN-α孵育显著下调CPIV3非结构蛋白C的表达水平。山羊IFN-α对CPIV3在MDBK细胞中的增殖具有显著抑制作用。本研究扩展了I型干扰素的研究范围,为CPIV3等反刍动物疫病的防控提供新的思路。 展开更多
关键词 山羊ifn-α 原核表达 ISGs 山羊副流感病毒3 抗病毒活性
下载PDF
鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究
3
作者 赵雪丽 闫若潜 +8 位作者 王华俊 王淑娟 马震原 谢彩华 柴茂 杨海波 王翠 刘影 王东方 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期165-173,共9页
建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性... 建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法。结果显示:该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3%以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量。对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2、PCV3基因测序结果符合率100%。本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10 copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用于临床PCV2/PCV3感染的快速鉴别检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 rep基因 猪圆环病毒3 cap基因 双重TaqMan MGB FQ-PCR
下载PDF
Genetic Variation Analysis of 3D Gene and Molecular Detection of Porcine Kobuvirus in 2013-2014
4
作者 倪艳秀 何孔旺 +10 位作者 茅爱华 俞正玉 李彬 郭容利 吕立新 祝昊丹 周俊明 温立斌 张雪寒 王小敏 汪伟 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2015年第3期442-446,共5页
[Objective] This study aimed to investigate the prevalence and variation of porcine kobuvirus (PKV) in suckling piglets in China. [Method] In 2013-2014, 224 feces samples from suckling piglets with diarrhea in 27 pi... [Objective] This study aimed to investigate the prevalence and variation of porcine kobuvirus (PKV) in suckling piglets in China. [Method] In 2013-2014, 224 feces samples from suckling piglets with diarrhea in 27 pig farms of five provinces in China were collected to detect 3D genes of PKV with RT-PCR method; the sequences and genetic variation of 29 PKV 3D genes were analyzed. [Result] Total positive rate of PKV in feces samples from suckling piglets with diarrhea was 65.18% (146/224); total positive rate of PKV in pig farms was 85,2% (23/27); nucleotide sequences and the deduced amino acid sequences of 29 PKV 3D genes shared 87.0%-100% and 92.7%-100% homologies with six PKV-related 3D sequences, respectively. [Conclusion] PKV infection is prevalent in suckling piglets in China; PKV 3D genes exhibit high diversity. 展开更多
关键词 porcine kobuvirus Molecular detection 3D gene Genetic variation analysis
下载PDF
2020-2022年华中地区部分猪场猪圆环病毒3型的分子流行特征与遗传变异分析 被引量:2
5
作者 李博天 李春琪 +8 位作者 刘国平 谢军 曾攀 赵润泽 李桐 裴洁 郭利伟 伍锐 谭磊 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期613-626,共14页
【目的】通过系统性试验方案摸清我国华中部分地区猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3)流行病学及遗传变异特点,为PCV3疫苗研究提供数据基础。【方法】对华中地区(湖北、湖南和河南)15个规模化养猪场的3500份临床采集样品进行real-time... 【目的】通过系统性试验方案摸清我国华中部分地区猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3)流行病学及遗传变异特点,为PCV3疫苗研究提供数据基础。【方法】对华中地区(湖北、湖南和河南)15个规模化养猪场的3500份临床采集样品进行real-time PCR检测,分析不同猪群、不同组织器官、不同排毒量和对应流行病学症状特点关系。对部分阳性样本PCV3全基因组进行扩增、测序和分析。【结果】50.86%(1780/3500)被检样本为PCV3核酸阳性,不同发育阶段猪群PCV3均易感,保育猪、哺乳仔猪、生长育肥猪PCV3阳性率较高,分别为70.44%(498/707)、67.19%(596/887)、41.75%(177/424)。在不同组织器官和样品中,淋巴结、肺脏、产后胎盘样本PCV3阳性率为67.05%(59/88)、63.79%(74/116)、49.11%(55/112),血液、初乳样本PCV3阳性率分别为56.09%(502/895)、44.20%(278/629),且鼻拭子和唾液中均检出PCV3。出现猪繁殖障碍症状、厌食症状和呼吸障碍症状的猪群PCV3阳性率高,分别为44.43%(399/898)、36.43%(431/1183)、28.04%(233/831)。24条PCV3全基因组序列长度均为2000 nt,其全基因核苷酸序列同源性为98.4%—100%,与参考株PCV3全基因组的同源性为97.4%—99.5%。遗传进化分析结果显示,23株PCV3属于PCV3b亚型,1株属于PCV3a亚型。Rep氨基酸序列比对结果发现,PCV3-L2、L23和L14株分别在(N^(124)I)、(A^(183)E)和(V^(244)I)出现独特变异位点;Cap蛋白氨基酸序列比对结果发现,PCV3-L15、L21、L3和L19株分别在(T^(45)P)、(R^(2)K)、(R^(14)K)和(F7L)出现独特变异位点。【结论】PCV3可感染不同发育阶段猪群,且分布于不同组织器官中;PCV3可通过垂直传播(如初乳和精液)和水平传播(如口鼻分泌物和唾液)感染猪群;PCV3感染可能与生猪繁殖障碍、呼吸障碍和多器官炎症和关节炎症密切相关。此外,被调查地区规模化猪场同时流行PCV3a和PCV3b两种亚型,其中PCV3b亚型为优势毒株。研究通过全基因组氨基酸序列分析发现部分独特变异位点位于Cap蛋白,这可能导致Cap蛋白赋予的免疫原性发生变化。对PCV3全基因序列的遗传进化做出详细阐述,为未来的PCV3疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 病毒载量 全基因组扩增 遗传进化分析
下载PDF
猪圆环病毒3型研究进展 被引量:1
6
作者 王国超 吴奇强 +3 位作者 刘慧 裴党帅 白鸽 罗建勋 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期216-220,共5页
猪圆环病毒是引起猪群圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,其中猪圆环病毒3型是近年来新发现危害生猪产业又一重要血清型,已在世界范围内广泛流行传播。流行病学调查发现,在我国多个省区也是存在该病的流行,并且有较高的感染率,给生猪... 猪圆环病毒是引起猪群圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,其中猪圆环病毒3型是近年来新发现危害生猪产业又一重要血清型,已在世界范围内广泛流行传播。流行病学调查发现,在我国多个省区也是存在该病的流行,并且有较高的感染率,给生猪产业以及相关领域带来潜在的经济损失,引起各方关注。本文主要从猪圆环病毒3型的病原学、流行病学、检测技术及防控进行了综述,以期为该病毒的后续研究提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 病原学 流行病学 检测技术
下载PDF
猪圆环病毒3型Cap蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA检测方法的建立 被引量:1
7
作者 张宝戈 黄雅琴 +2 位作者 蔡金双 朱晨光 李玉峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1170-1178,共9页
旨在建立检测猪圆环病毒3型(PCV3)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的PCV3Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的2E6单克隆... 旨在建立检测猪圆环病毒3型(PCV3)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的PCV3Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的2E6单克隆抗体作为检测抗体,经条件优化后建立了一种检测PCV3抗体的阻断ELISA方法。用建立的阻断ELISA方法检测50份临床阴性血清,计算阻断率(PI)的临界值,以此来确定该方法的判定标准:当PI≤28.30%时,判定结果为阴性;当PI≥35.05%时,判定结果为阳性;当28.30%<PI<35.05%时,判定为可疑,重复一次试验后如果结果仍为可疑,则判定为阳性。特异性试验表明该方法与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)以及猪瘟病毒(CSFV)的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验表明其检测效价可达到1:128;重复性试验表明批内与批间的变异系数均小于10%;符合性检验表明该方法与PCV检测金标准免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)比对的Kappa值达0.9,具有高度的一致性。综上所述,本研究建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性与较高的符合率,可用于后期进行PCV3抗体的检测,为PCV3的流行病学调查与临床诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 Cap重组蛋白 单克隆抗体 阻断ELISA
下载PDF
下调Socs3表达增加肾癌细胞对干扰素α敏感性的实验研究
8
作者 穆志远 胡杰 +1 位作者 李永章 庞聪 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2024年第3期220-223,共4页
目的探索抑制细胞因子信号转导SOCS蛋白是否可以降低肾细胞癌的IFN抗性及可能机制。方法培养人肾癌ACHN细胞并转染SOCS3 siRNA,采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blotting检测SOCS家族的mRNA、蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖活性;... 目的探索抑制细胞因子信号转导SOCS蛋白是否可以降低肾细胞癌的IFN抗性及可能机制。方法培养人肾癌ACHN细胞并转染SOCS3 siRNA,采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blotting检测SOCS家族的mRNA、蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖活性;建立小鼠肾癌肺转移模型,记录小鼠的生存情况。结果与对照组比较,IFN-α处理组SOCS3 mRNA表达显著增加(4.96±0.21 vs.103.22±0.24,P<0.001)。MTT法结果显示,与阴性对照组(转染NC-siRNA)比较,5.0、12.5、25.0、50 nmol/L SOCS3 siRNA可显著降低IFN-α处理组ACHN细胞增殖率(P<0.05)。Western blotting结果显示,与阴性对照组比较,SOCS3 siRNA组中p-STAT1及p-STAT3表达明显升高(p-STAT1:1.87±0.07 vs.1.02±0.01,P<0.001;p-STAT3:1.35±0.24 vs.1.12±0.03,P<0.05)。敲低SOCS3表达可增强IFN-α治疗肾癌肺转移小鼠的生存。结论下调SOCS3表达增强了STAT1激活和IFN-α的体外和体内抗肿瘤活性。基于SOCS3在介导对IFN-α免疫疗法的耐药性中发挥的作用,使用靶向SOCS3的siRNA和IFN-α的联合疗法可能是治疗肾癌及肾癌肺转移癌的有吸引力的候选药物。 展开更多
关键词 肾癌 ifn-Α SOCS3
下载PDF
猪圆环病毒3型Cap重组蛋白的低温诱导表达研究
9
作者 潘向英 祝羊 +8 位作者 曾智勇 汤德元 梁海英 王彬 叶泥 田红利 边孟婷 柳佳佳 黄书 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第15期73-77,共5页
为了提高猪圆环病毒3型(PCV-3)Cap重组蛋白的可溶性表达量,试验采用PCR方法扩增PCV-3 Cap基因,将其插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-32a(+)-Cap,再将重组原核表达载体转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,分... 为了提高猪圆环病毒3型(PCV-3)Cap重组蛋白的可溶性表达量,试验采用PCR方法扩增PCV-3 Cap基因,将其插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-32a(+)-Cap,再将重组原核表达载体转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,分析不同浓度IPTG和温度的诱导表达效果,并通过Western-blot鉴定重组蛋白。结果表明:PCR扩增出大小为645 bp的Cap基因片段,与预期结果一致;构建的重组原核表达载体pET32a(+)-Cap可在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达,重组蛋白分子量约为43.1 ku;不同浓度IPTG诱导表达可溶性蛋白的表达量不同,IPTG终浓度为0.1 mmol/L时重组蛋白可溶性表达量较高;37℃诱导时重组蛋白主要在沉淀中表达,而20℃诱导时重组蛋白主要在上清液中表达;表达的重组蛋白能与带His标签的抗体特异性结合。说明试验成功构建了重组蛋白,低温诱导可获得了更多的可溶性蛋白。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 CAP蛋白 低温诱导 原核表达 可溶性蛋白
下载PDF
2020-2021年我国规模化猪场猪圆环病毒2型和3型的分子流行病学调查分析 被引量:2
10
作者 陈翔鸿 曹琪 +5 位作者 谌磊 邓文芳 袁意 孔丹妮 宋文博 汤细彪 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期88-96,共9页
采集13个省市自治区的491个规模化猪场的1447份疑似猪圆环病毒感染样本,通过荧光定量PCR方法进行猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的检测。分别随机选取50份PCV2和PCV3阳性样品,对其ORF2基因进行测序并分别进行核苷酸同源性比... 采集13个省市自治区的491个规模化猪场的1447份疑似猪圆环病毒感染样本,通过荧光定量PCR方法进行猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的检测。分别随机选取50份PCV2和PCV3阳性样品,对其ORF2基因进行测序并分别进行核苷酸同源性比对和遗传进化分析。结果显示,样本中PCV2和PCV3检出率分别为29.16%(422/1447)和18.93%(274/1447)。规模化猪场中PCV2和PCV3检出率分别为47.05%(231/491)和15.68%(77/491),PCV2和PCV3混合感染率为23.81%,混合感染高于单一感染,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪肺炎支原体(MhP)等病原体以多种组合的混合感染形式出现。50个PCV2序列与16个参考毒株序列的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为75.6%~100%和83.1%~99.1%,PCV3对应同源性分别为95.9%~100%和96.3%~100%。分子遗传进化分析显示PCV2d占80%(40/50),PCV2a占4%(2/50),PCV2b占16%(8/50),未检测到PCV2c和PCV2e。PCV3a、PCV3b和PCV3c分别占28%(14/50)、22%(11/50)和50%(25/50)。表明2020-2021年我国规模化猪场PCV2的主要流行基因型是PCV2d,其次为PCV2a和PCV2b。PCV3c为我国规模化猪场中的主要流行基因型,而PCV3a和PCV3b流行率也依然较高。论文对我国猪圆环病毒的分子流行病学进行了数据补充,对临床防控起到了预警作用,也为猪圆环病毒疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3 混合感染 分子流行病学
下载PDF
Phosphorylation of histone H3 on Ser10 by auto-phosphorylated PAK1 is not essential for chromatin condensation and meiotic progression in porcine oocytes 被引量:2
11
作者 Bingyuan Wang Wei Ma +6 位作者 Xiaoling Xu Chao Wang Yubo Zhu Na An Lei An Zhonghong Wu Jianhui Tian 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS 2013年第2期152-158,共7页
Background: The p21-activated kinase 1 (PAK1)is essential of microtubule assembly during oocyte meiotic maturation porcine oocytes. for mitosis and plays an important role in the regulatio in mice; however, little ... Background: The p21-activated kinase 1 (PAK1)is essential of microtubule assembly during oocyte meiotic maturation porcine oocytes. for mitosis and plays an important role in the regulatio in mice; however, little is known about its role in Result: Total p21-activated kinase 1 (PAK1) and phosphorylated PAK1 at Thr423 (PAK1^Thr423) were consistently expressed in porcine oocytes from the germinal vesicle (GV) to the second metaphase (MII) stages, but phosphorylation of histone H3 at Serr10 (H3^ser10) was only expressed after the GV stage. Immunofiuorescence analysis revealed that PAK1Thr423 and H3^ser10 colocalized on chromosomes after the GV stage. Blocking of endogenous PAK1^Thr423 by injecting a specific antibody decreased the phosphorylation level of H3^ser10; however, it had no impact on chromatin condensation, meiotic progression, cleavage rate of blastomeres or the rate of blastocyst formation. Conclusion: Phosphorylation of PAK1^Thr423 is a spontaneous activation process and the activated PAK1^Thr423 can promote the phosphorylation of H3^ser10; however, this pathway is not required for meiotic maturation of porcine oocytes or early embryonic development. 展开更多
关键词 Chromosome condensation H3^ser10 Meiotic progression PAK1^Thr423 porcine oocyte
下载PDF
猪圆环病毒3型Rep蛋白的原核表达及酶活性分析
12
作者 韩阳 关帅印 +3 位作者 李振 周赛赛 袁红根 宋云峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2061-2071,共11页
Rep蛋白对猪圆环病毒(porcine circovirus, PCV)的复制具有重要作用。为分析PCV3 Rep蛋白的核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性,作者使用镍亲和层析法纯化相应的重组蛋白,通过优化反应条件,建立Rep蛋白酶活性的测定方法,并探究Rep... Rep蛋白对猪圆环病毒(porcine circovirus, PCV)的复制具有重要作用。为分析PCV3 Rep蛋白的核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性,作者使用镍亲和层析法纯化相应的重组蛋白,通过优化反应条件,建立Rep蛋白酶活性的测定方法,并探究Rep蛋白关键活性位点。结果表明,Rep蛋白在体外具有核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性。当蛋白浓度为1.6μmol·L^(-1),Mg^(2+)浓度为1.0 mmol·L^(-1),37℃反应75 min时其ATPase活性达到最佳。当蛋白浓度为7μmol·L^(-1),Mg^(2+)浓度为12.5 mmol·L^(-1),37℃反应60 min时其解旋酶活性达到最佳。Y89为Rep蛋白核酸内切酶活性的关键位点,K173、D210、N250为ATPase活性和解旋酶活性的关键位点。本研究建立了PCV3 Rep蛋白酶活性分析的方法,初步揭示了该蛋白的主要功能位点,为Rep蛋白的功能研究以及基于Rep蛋白活性的抗病毒药物研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 REP蛋白 核酸内切酶活性 ATPASE活性 解旋酶活性
下载PDF
猪圆环病毒3型四川株Cap蛋白的截短表达及其抗体间接ELISA方法的建立
13
作者 欧云文 潘琴 +5 位作者 汪洋 代军飞 任绍科 张洋 翟佳佳 张杰 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3056-3066,共11页
【目的】原核截短表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),并建立其抗体间接ELISA检测方法,为PCV3血清学调查提供材料。【方法】以PCV3四川分离株基因组为模板,PCR扩增获得Cap蛋白编码基因片段... 【目的】原核截短表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),并建立其抗体间接ELISA检测方法,为PCV3血清学调查提供材料。【方法】以PCV3四川分离株基因组为模板,PCR扩增获得Cap蛋白编码基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET30a-PCV3-Cap。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析纯化,获得具有良好抗原性的重组Cap蛋白。基于纯化的重组Cap蛋白建立间接ELISA方法,确定最佳抗原包被浓度、待检血清最佳稀释比例、酶标抗体稀释比例和阴阳性临界值,对间接ELISA方法的特异性、敏感性、重复性、相关性和符合率进行分析,并对2018-2022年采自川东北地区猪场的351份临床猪血清进行检测,分析该区域PCV3流行情况。【结果】试验成功构建pET30a-PCV3-Cap重组表达载体,实现重组Cap蛋白(1-197位氨基酸)的原核截短表达,蛋白大小约为26 ku,可与PCV3阳性猪血清发生特异性反应;确定最佳抗原包被浓度为1 ng/μL,待检血清最佳稀释比例为1∶100,酶标抗体稀释比例为1∶60000,阴阳性临界值D_(450 nm)为0.684;建立的间接ELISA方法与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)和猪细小病毒1型(PPV1)阳性猪血清均不发生交叉反应,敏感度达1∶1600,批内变异系数和批间变异系数均<10%,与病毒中和试验(VNT)结果呈正相关,与Western blotting方法的阳性符合率为95.8%;2018-2022年川东北地区的351份猪血清样品阳性率为7.12%。【结论】本研究成功截短表达了PCV3四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),建立了特异性强、灵敏度高、重复性好和符合率高的PCV3间接ELISA方法,为PCV3的血清学调查和检测试剂盒的开发提供了材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) CAP蛋白 截短表达 ELISA
下载PDF
2023年成都地区猪圆环病毒3型流行病学调查及遗传进化分析
14
作者 黄云川 范磊 +4 位作者 林鑫 雷玉 王兴丽 徐志文 岳建国 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4531-4539,共9页
【目的】调查分析成都地区猪圆环病毒3型(PCV3)的流行与分子遗传进化情况。【方法】试验于2023年1月至2023年12月从成都地区4家无害化处置场采集病死猪组织样品2113份,采用实时荧光定量PCR法检测病料组织PCV3感染情况。设计3对引物对阳... 【目的】调查分析成都地区猪圆环病毒3型(PCV3)的流行与分子遗传进化情况。【方法】试验于2023年1月至2023年12月从成都地区4家无害化处置场采集病死猪组织样品2113份,采用实时荧光定量PCR法检测病料组织PCV3感染情况。设计3对引物对阳性样品的PCV3基因组序列进行PCR扩增并测序。通过在线软件拼接PCV3基因组序列、截取ORF2基因序列并推导其氨基酸序列(Cap),进行相似性比对并构建遗传进化树,分析Cap氨基酸序列突变情况。【结果】组织病料检测结果显示,2113份病死猪组织样品的PCV3阳性率为27.21%(575/2113)。根据PCR扩增测序结果拼接获得了15株PCV3基因组序列。相似性比对分析显示,15株PCV3核苷酸序列相似性为97.2%~100%,ORF2基因核苷酸序列相似性为97.2%~100%,Cap氨基酸序列相似性为96.7%~100%。遗传进化树结果显示,12株PCV3属于PCV3a亚型,3株属于PCV3c亚型。15株Cap氨基酸序列中共13株发生了突变,共存在13个突变位点。【结论】成都地区PCV3主要为PCV3a和PCV3c亚型,基因组相似性高,序列较保守,Cap氨基酸突变位点主要集中在抗原表位。本试验结果提示该地区需制定科学的防控政策,防止病毒蔓延。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) 流行病学 分子遗传进化
下载PDF
MicroRNA-34c regulates porcine granulosa cell function by targeting forkhead box O3a 被引量:3
15
作者 XU Yuan ZHANG Ai-ling +4 位作者 ZHANG Zhe YUAN Xiao-long CHEN Zan-mou ZHANG Hao LI Jia-qi 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2017年第9期2019-2028,共10页
Granulosa cells(GCs) are somatic cells of ovary, the behaviors of GCs are important for ovarian function. MicroRNAs(miRNAs) are a class of endogenous 18–24 nucleotide(nt) non-coding RNAs, some of which have bee... Granulosa cells(GCs) are somatic cells of ovary, the behaviors of GCs are important for ovarian function. MicroRNAs(miRNAs) are a class of endogenous 18–24 nucleotide(nt) non-coding RNAs, some of which have been shown to be important regulators of GCs function. miR-34c involved in the regulation of various biological processes and was identified to be a pro-apoptotic and anti-proliferative factor in many cell types. However, the roles of miR-34c in GCs function remain unknown. In this study, we used Annexin V-FITC and Ed U assays to demonstrate that miR-34c exerted pro-apoptotic and anti-proliferative effects in porcine GCs. Dual-luciferase reporter assays, quantitative real-time PCR(q RT-PCR) and Western blotting identified Forkhead box O3a(Fox O3a) as a direct target gene of miR-34c. The overexpression of FoxO3a rescued the phenotypic change caused by miR-34c in porcine GCs. In conclusion, miR-34c regulate the function of porcine GCs by targeting FoxO3a. 展开更多
关键词 porcine microRNA-34c FoxO3a granulosa cell function
下载PDF
NLRP3炎症小体在PRRSV调控机体炎症中的作用
16
作者 李鸿喜 章蓓雯 +3 位作者 唐歆 田颖 邱龙新 陈洪博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期93-100,共8页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种严重危害猪类养殖业的病毒,引起了广泛关注,炎症作为机体对PRRSV感染的主要反应之一,在病毒感染过程中发挥重要作用。NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体作为一种重要的细胞内炎症调节... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种严重危害猪类养殖业的病毒,引起了广泛关注,炎症作为机体对PRRSV感染的主要反应之一,在病毒感染过程中发挥重要作用。NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体作为一种重要的细胞内炎症调节机制,在PRRSV感染中扮演着不可忽视的角色。本文重点综述NLRP3炎症小体对PRRSV感染机体炎症的调控作用,并探讨其在PRRSV防控中的潜在应用价值,为PRRSV感染的机制和治疗研究提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体 炎症
下载PDF
系统性红斑狼疮患者血清中IFN-λ3的表达及临床意义
17
作者 范俊 郭洪佩 +1 位作者 路臻豪 乔鑫 《浙江临床医学》 2023年第4期554-556,共3页
目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中IFN-λ3的表达及临床意义。方法前瞻性选取2021年3月至12月入同济大学附属杨浦医院接受治疗的SLE患者150例作为观察对象。按照SLE活动度评分表(SLEDAI)对SLE患者进行活动性评估,SLEDAI值≥9分为SL... 目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中IFN-λ3的表达及临床意义。方法前瞻性选取2021年3月至12月入同济大学附属杨浦医院接受治疗的SLE患者150例作为观察对象。按照SLE活动度评分表(SLEDAI)对SLE患者进行活动性评估,SLEDAI值≥9分为SLE活动组(n=63例),SLEDAI值<9分为SLE非活动组(n=87例)。另选取同期在本院体检中心体检健康者90例为对照组。收集患者的临床资料,检测实验室相关指标,并使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IFN-λ3水平,采用受试者工作特性(ROC)曲线分析IFN-λ3对SLE临床诊断价值,Pearson相关分析法分析IFN-λ3与实验室指标的相关性。结果SLE活动组和SLE非活动组的SLEDAI评分、关节炎、红斑和发热占比对比,差异具有统计学意义(P<0.05);SLE活动组和SLE非活动组中IFN-λ3、AntidsDNA抗体和IFN-γ水平明显高于对照组(P<0.001),且SLE活动组中IFN-λ3、AntidsDNA抗体和IFN-γ水平显著高于SLE非活动组(P<0.001);SLE活动组和SLE非活动组中补体C3、补体C4水平明显低于对照组(P<0.001),且SLE活动组中补体C3、补体C4水平显著高于SLE非活动组(P<0.001);血清中IFN-λ3作为诊断SLE患者血清标志物的ROC曲线面积为0.891(95%CI:0.818~0.964,P<0.001),当截断值为6.12时,灵敏度为86.67%,特异度为76.59%;SLE患者血清中IFN-λ3水平与SLEDAI评分、AntidsDNA抗体、IFN-γ水平呈正相关性(P<0.05),与补体C3水平呈负相关性(P<0.05)。结论SLE患者血清中IFN-λ3水平明显升高,并与SLE病情活动度相关,具有一定的诊断价值,可能成为检测SLE疾病活动和预测疾病严重程度的一种新的生物标志物。 展开更多
关键词 ifn-λ3 系统性红斑狼疮 临床意义
下载PDF
猪圆环病毒3型Cap蛋白的原核表达与鉴定
18
作者 朱钰英 高翠翠 +6 位作者 唐青海 刘婷 赵婷芳 曾沛暄 赵铖 胡意 李小申 《湖南畜牧兽医》 2024年第2期35-38,共4页
[目的]研究旨在扩增PCV3病毒的Cap基因,体外表达PCV3 Cap蛋白。[方法]试验分别建立重组原核表达载体p ET28a-PCV3-Cap和p Cold-PCV3-Cap,转化Rosetta(DE3)表达菌株,在不同温度条件下诱导表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋... [目的]研究旨在扩增PCV3病毒的Cap基因,体外表达PCV3 Cap蛋白。[方法]试验分别建立重组原核表达载体p ET28a-PCV3-Cap和p Cold-PCV3-Cap,转化Rosetta(DE3)表达菌株,在不同温度条件下诱导表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋白鉴定。[结果]PCV3 Cap蛋白在p ET28a原核表达系统中无表达;Rosetta-p Cold-PCV3-Cap在诱导温度为15℃、IPTG浓度为1.0 mmo L/L、诱导4 h的条件下,能够表达分子量约为25 k Da的Cap蛋白,且为可溶性表达。[结论]试验成功制备了PCV3 Cap蛋白,为制备PCV3疫苗及其诊断方法的研究提供了基础材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) CAP蛋白 原核表达 鉴定
下载PDF
2020~2023年广西柳州市猪主要病毒性传染病的流行病学调查与分析
19
作者 王翠 吴先华 +5 位作者 梁竞臻 李宇 覃艳然 许宗丽 周师师 严斯刚 《畜牧兽医杂志》 2024年第5期69-76,共8页
为了解广西柳州地区猪主要病毒性传染病的流行情况及变化规律,本试验应用实时荧光RT-PCR及实时荧光PCR对2020~2023年柳州市部分地区屠宰场、散养猪场和规模猪场的组织、抗凝血、棉拭子进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV和Nsp21559-1680... 为了解广西柳州地区猪主要病毒性传染病的流行情况及变化规律,本试验应用实时荧光RT-PCR及实时荧光PCR对2020~2023年柳州市部分地区屠宰场、散养猪场和规模猪场的组织、抗凝血、棉拭子进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV和Nsp21559-1680变异株)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型和3型(PCV2-3)和猪塞内卡A型病病毒(SVA)4种疫病病原检测。检测结果显示:(1)HPRRSV Nsp21559-1680变异株、PRRSV、CSFV、PCV2、PCV3、SVA的病原平均阳性率分别为0.00%(0/191)、8.04%(191/2377)、0.08%(2/2377)、45.23%(992/2193)、32.74%(718/2193)、0.16%(2/1239);(2)PRRSV、PCV2、PCV3感染率较高,CSFV和SVA为零星感染,其中PCV2的感染率呈逐年下降趋势,PRRSV和PCV3的感染率波动较大,2020~2022年呈逐年下降趋势,2023年较2022年的感染率呈上升趋势;(3)PCV2和PCV3在不同年份度中健康猪样品病原阳性率均高于病死猪样品病原阳性率,而PRRSV在不同年份度中健康猪样品病原阳性率均低于病死猪样品病原阳性率;二重感染以PCV2混合其他病毒感染为主,其中PCV2和PCV3感染较为严重,平均感染率为15.18%;(4)三重感染以PRRSV、PCV2、PCV3混合感染较为严重,平均感染率为2.74%。结果表明:PRRSV、PCV2、PCV3是目前对广西柳州市猪群危害较为严重的主要病毒性疫病,且混合感染较为普遍,应进一步加强流行病学监测,并制定科学合理的免疫程序和计划强化各场点的生物安全防控措施,减少病原的污染、传播与流行,促进广西柳州市生猪行业的健康稳定发展。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型和3 猪病毒性疫病
下载PDF
猪圆环病毒2型和3型引起母猪繁殖障碍的研究进展
20
作者 李苏尧 杨青 《湖南畜牧兽医》 2024年第2期56-58,共3页
猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科圆环病毒属的成员,目前已报道发现4种基因型,猪圆环病毒病对全球养猪业造成重大影响。文章重点对猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)所引起的母猪繁殖障碍进行了综述,旨在进一步提高大家对PCV感染的认识,并为... 猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科圆环病毒属的成员,目前已报道发现4种基因型,猪圆环病毒病对全球养猪业造成重大影响。文章重点对猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)所引起的母猪繁殖障碍进行了综述,旨在进一步提高大家对PCV感染的认识,并为猪场提高生产效益提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) 猪圆环病毒3型(PCV3) 繁殖障碍
下载PDF
上一页 1 2 20 下一页 到第
使用帮助 返回顶部