犬α_1干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性研究

亚克隆犬α1干扰素(CaIFN-α1)成熟蛋白编码基因并克隆到表达载体pPICZα-A,构建转移重组载体pPICZα-A-CaIFN-α。pPICZα-A-CaIFN-α经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。转化子经PCR分析鉴定后利用甘油增菌和甲醇诱导,实现了CaIFN-α1在毕赤酵母系统中的分泌表达。SDS-PAGE检测结果表明表达产物相对分子质量约为2.7×104,比其推导结果(约1.9×104)大,推测可能是发生了糖基化。酵母分泌表达的CaIFN-α1具有较高的抗病毒活性,约为1.45×106U·mL-1,蛋白含量约为96mg·L-1,比活性为1.49×107U·mg-1。重组CaIFN-α1的生物学活性具有较强的种属特异性,在犬肾细胞(MDCK)上具有很高的抗病毒活性,在鸡胚成纤维细胞上活性较低,而在猫肾细胞(F81)和牛肾细胞(MDBK)上几乎没有抗病毒活性。进一步研究发现,重组犬α1干扰素对犬瘟热病毒和伪狂犬病毒在犬肾细胞中的增殖具有显著抑制作用。

泛癌分析揭示SREK1在低级别胶质瘤中促进CD274表达

目的剪接调节谷氨酸和富赖氨酸的蛋白质1(SREK1)在多种肿瘤中的泛癌分析,揭示SREK1在泛癌中的作用。方法利用在线数据库GEPIA 2、TIMER 2.0、TISIDB和cBioPortal分析SREK1表达对肿瘤患者预后的影响、在低级别胶质瘤(LGG)肿瘤组织中的表达、遗传变异的特征及其表达对肿瘤组织中免疫细胞的浸润和免疫—肿瘤靶基因的相关性分析。结果LGG肿瘤组织中,SREK1表达与记忆B细胞、活化的CD4+T细胞、Th2细胞、中性粒细胞、NKT细胞以及单核细胞和CD56dimNK细胞的浸润存在相关性(P均<0.05)。SREK1与免疫—肿瘤靶基因如信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)、Ⅰ型干扰素受体1(IFNAR1)、核受体亚家族3C组成员1(NR3C1)和表皮生长因子受体(EGFR)、表面抗原分化簇274(CD274)等表达在LGG中均呈正相关(P均<0.05)。结论SREK1是LGG患者的危险因子之一,可能通过促进CD274的表达来加剧LGG的进展。

腺相关病毒与人α_1干扰素基因重组体的构建

目的 构建腺相关病毒载体 (pWP8A)与人α1 干扰素 (hIFNα1 )基因重组体。 方法 用多聚酶链反应 (PCR)方法扩增获得hIFNα1 基因 ;以T A克隆方法将PCR扩增hIFNα1 基因亚克隆到PCR2 1质粒中 ,产生PCR2 1-hIFNα1 ;用EcoRI酶切PCR2 1-hIFNα1 后回收hIFNα1 基因片断 ,将此片断连接到pWP8A的EcoRI位点上 ,构建重组体pWP8A-hIFNα1 ;pWP8A -hIFNα1 转化JM10 9大肠杆菌扩增 ,hIFNα1 基因经测序鉴定符合Genebank中hIFNα1 序列 ,并用BamHI酶和XbalI酶双酶切鉴定hIFNα1 基因插入方向。 结果 经PCR扩增获得 5 67bphIFNα1 基因 ;构建重组体pWP8A -hIFNα1 ,经测序证实pWP8A -hIFNα1 中的hIFNα1 与Genebank中hIFNα1 序列相同 ,用BamHI酶和XbalI酶双酶切鉴定hIFNα1 基因插入方向正确的重组体pWP8A -hIFNα1 。 结论 成功构建腺相关病毒载体 (pWP8A)与人α1 干扰素(hIFNα1 )基因的重组体。

SerpinE1通过JAK/STAT通路调节HIV-1在巨噬细胞中的复制

目的:探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂E家族成员1(SerpinE1)与人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染的关系,及其作为一种蛋白酶抑制剂在巨噬细胞中对HIV感染过程发挥的作用和机制。方法:按年龄、性别特征成组匹配,招募HIV感染未治疗人群[HIV ART(-)组]和健康对照人群(HC组),并检测外周血单个核细胞(PBMCs)中SerpinE1 mRNA表达量。在THP-1细胞中构建SerpinE1敲低细胞(敲低SerpinE1组),感染或不感染HIV BaL。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测HIV-p24和干扰素(IFN)-α蛋白水平,有参转录组测序分析染毒后敲低SerpinE1组与对照组的差异基因和KEGG富集通路,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测HIV-1 Gag、Toll样受体7(TLR7)、Toll样受体8(TLR8)、白细胞介素-1β(IL-1β)、MX动力蛋白样GTPase 1(MX1)、MX动力蛋白样GTPase 2(MX2)mRNA相对表达量,western blotting法检测JAK2、STAT1、STAT2、SATA4、IL-1β和MX1蛋白表达水平。结果:与HC组比较,HIV ART(-)组SerpinE1表达水平降低,并且在THP-1来源的巨噬细胞中能够被HIV诱导下调(P<0.05);敲低SerpinE1表达下调HIV-p24蛋白表达和HIV Gag mRN A表达,促进IFN-α蛋白分泌水平,促进TLR7、TLR8、Janus激酶2(JAK2)、信号转导子和转录激活子(STAT)蛋白家族的STAT1、STAT2、SATA4及IL-1β、MX1、MX2的表达(P<0.05)。结论:SerpinE1可能通过抑制TLR7和TLR8信号通路的激活,减少IFN-α的释放,进而抑制JAK/STAT通路及其诱导的多种IFN刺激基因和IFN相关因子表达,从而促进了HIV-1的感染复制。

猪α1-干扰素的基因改造与高效原核表达

poIFN α1基因中含有大量的大肠杆菌稀有密码子 ,为了获得高表达 ,使用了大肠杆菌的偏爱密码子 ,人工合成了poIFN α1成熟蛋白编码基因。在保留编码蛋白序列的同时 ,使其 5′端A +T的含量增加到最大限度 ,并将其终止密码子改为TAA。将合成的poIFN α1成熟蛋白编码基因插入原核单纯表达载体pRLC中 ,转化大肠杆菌DH5α。实现了poIFN α1在大肠杆菌中的高效表达 ,表达产物以包涵体形式存在。纯化的包涵体经含DTT的 6mol L盐酸胍的变性液溶解及含GSH GSSG的复性液复性处理 ,复性后的表达产物浓缩后经凝胶层析纯化 ,细胞病变抑制法测定表明 ,重组poIFN α1具有较高的抗病毒活性 ,约为 6 4x10 6 u mg。

重组猪干扰素α1冻干粉针剂对猪的安全性试验研究

试验旨在观察自行研制的重组猪干扰素α1冻干粉针剂对猪的安全性。将20头健康仔猪随机分为4组(3组试验组和1组对照组),每组5只,3组试验组分别肌肉注射低、中和高剂量重组猪干扰素α1冻干粉针剂,连续注射7d,对照组同时肌肉注射生理盐水。对动物基本生命体征、血常规、血液生化指标、组织标本病理学指标进行观察。各试验组仔猪的外表及行为特征均正常;体温、体重的变化也在正常范围之内;重要脏器如脑、肺脏、肝脏、心脏和脾脏病理解剖HE染色结果显示无器质性病变发生;血常规、血液生化指标均正常。试验结果表明本项目研制的重组猪干扰素α1冻干粉针剂对仔猪无明显毒副作用,使用安全。

云南省傣族、汉族人群乙型肝炎病毒感染与IL-6-572C/G和IFNAR1-168G/C的关联性研究

目的:探讨云南省西双版纳地区傣族和汉族人群IL-6-572C/G和I型干扰素受体1(interferon alpha receptor 1,IFNAR1)-168G/C位点单核苷酸多态性与乙型肝炎病毒(HBV)感染后疾病转归的关联性。方法:采集西双版纳州傣族、汉族人群血液样本共600份,其中每个民族包括健康对照组100名、HBV感染患者200名(含100名自限性恢复患者和100名慢性乙肝患者),运用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)和DNA测序技术对IL-6-572C/G和IFNAR1-168G/C位点进行基因分型。结果:傣族人群中,-572C/G位点基因型多态性与HBV感染后转归的关联性并无统计学显著性。C、G等位基因型在HBV感染组、正常对照组之间和慢性乙肝组、自限恢复组之间差异无统计学显著性。但是在G显性模式(GG+CG/CC)下,GG+CG基因型为HBV感染者发展成为慢性乙型肝炎患者的保护因素(P<0.05)。汉族人群中,-572C/G位点基因型和等位基因分布频率在各组比较中无统计学显著性,并且在G显性模式和G隐性模式比较中也无统计学显著性。在上述4种比较中,IFNAR1-168G/C位点在汉族和傣族样本中的差异均无统计学显著性。结论:IL-6-572C/G位点GG+CG基因型可能是傣族人群中HBV感染者发展成为慢性乙型肝炎的保护因素,而IFNAR1-168G/C多态性与HBV感染后转归在傣、汉两族中并无显著性关联。

干扰素α-1b联合替比夫定序贯治疗慢性乙型肝炎的疗效及其对患者sPD-1和sICOS水平的影响

目的观察干扰素α-1b(IFNα-1b)联合替比夫定序贯治疗乙型肝炎的疗效,并探讨其对患者血清中可溶性程序性死亡蛋白1(s PD-1)和可溶性可诱导共刺激分子(s ICOS)水平的影响。方法选取我院2012年1月至2013年5月符合条件的患者80例,按随机数表法随机分为观察组和对照组,每组40例。两组患者均给予IFNα-1b治疗,50 g/次,隔日1次,肌内注射。对照组继续给予IFNα-1b巩固治疗,用量同前,疗程12个月。观察组口服替比夫定序贯治疗,600 mg/次,1次/d,疗程12个月。比较两组患者治疗后的应答有效率以及治疗前后的血清s PD-1和s ICOS水平,检测两组患者的门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及γ-谷氨酸酰基转移酶(GGT),并参照慢性肝病量表(CLDQ)评价生活质量。结果观察组患者的完全应答率和部分应答率分别为50.0%(20/40)和37.5%(15/40),均高于对照组的40.0%(16/40)和25.0%(10/40),差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗后的CLDQ量表各项评分均明显高于对照组,差异均有显著统计学意义(P<0.01);观察组治疗后AST[(26.56±2.85)U/L]、ALT[(30.28±3.23)U/L]和GGT[(34.26±3.58)U/L]水平均显著低于对照组(P<0.01);观察组治疗后血清中s PD-1和s ICOS水平分别为(404.27±41.26)pg/m L和(35.78±3.91)pg/m L,均明显低于对照组的(517.91±52.55)pg/m L和(44.36±4.56)pg/m L,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论 IFNα-1b联合替比夫定序贯治疗乙型肝炎可明显改善患者生活质量,提高应答总有效率,其抑制患者血清中s PD-1和s ICOS水平表达可能在治疗中发挥重要作用。

HSV-Ⅰ感染后人小胶质细胞MX1蛋白表达变化及其作用初探

目的观察人小胶质细胞在单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)感染后抗黏液病毒(Mx1)蛋白表达及干扰素-α(IFN-α)、IFN-β表达变化,初步探讨Mx1蛋白在单纯疱疹病毒(HSV)性脑炎中的可能抗病毒作用。方法应用流式细胞技术检测人小胶质细胞感染HSV-Ⅰ后4、12、48hMx1蛋白的相对表达,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测细胞培养上清液中IFN-α、IFN-β的表达。结果 HSV-Ⅰ实验组各时间点人小胶质细胞Mx1蛋白表达、IFN-α及IFN-β表达均高于正常对照组(均P<0.01);HSV-Ⅰ实验组48h内人小胶质细胞Mx1蛋白表达及IFN-α、IFN-β表达随时间延长升高,且Mx1蛋白表达与IFN-α、IFN-β表达均存在正相关(r=0.632,P<0.01;r=0.714,P<0.01)。结论 HSV-Ⅰ感染可引起体外培养的人小胶质细胞Mx1蛋白表达上调及IFN-α、IFN-β分泌增加,Mx1蛋白可能参与了中枢神经系统抗HSV-Ⅰ过程。

腺相关病毒介导人α1干扰素基因在淋巴细胞中表达的研究

为了探讨人α1干扰素基因和腺相关病毒重组体pWP8A -hIFNα1在淋巴细胞中表达的情况 ,将pWP8A-hIFNα1以磷酸钙转染法转入淋巴细胞 ,于转染后 2 4小时、48小时、72小时和 1周分别提取细胞总DNA、RNA和蛋白质 ;经PCR、Southernblot,逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)和酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测该重组体在淋巴细胞中表达人α1干扰素情况。结果显示 ,pWP8A -hIFNα1转染淋巴细胞后 2 4小时检测到细胞内含人α1干扰素mRNA和蛋白质 ,并持续表达 1周以上。

猪干扰素IFNE1基因克隆及重组表达载体的构建

依据电子延伸序列设计一对克隆引物,用RT-PCR法从猪胃组织扩增出猪干扰素epsilon 1(IFNE1)基因的完整编码区并进行序列分析;再根据克隆的序列设计一对表达引物,用PCR法从重组克隆载体中扩增出含EcoRI/XhoI酶切位点的猪IFNE1片段,插入原核表达载体,转化至宿主菌,诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白。结果表明,克隆的猪IFNE1基因包含完整的开放阅读框架,长为586bp,ORF为582bp,编码193个氨基酸,与人、小鼠的同源性分别为83.6%和69.2%,推测的氨基酸序列与人、小鼠的同源性分别为76.2%和55.2%,表达的融合蛋白分子量约为47kD。

丙酮酸乙酯干预大鼠冠状动脉微栓塞对肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β的影响

目的研究丙酮酸乙酯对大鼠冠状动脉微栓塞后炎症因子表达的影响。方法通过心尖部注射大鼠自体血栓微粒建立大鼠冠状动脉微栓塞模型。36只大鼠分为假手术组、冠状动脉微栓塞未治疗组和丙酮酸乙酯预处理组,每组各12只,于术后3天处死。W estern b lot测定肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β的表达水平,实时PCR检测肿瘤坏死因子α、白细胞介素1βmRNA表达量。结果与假手术组相比,冠状动脉微栓塞后3天,心肌组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1βmRNA及蛋白水平明显升高;左室功能显著恶化,左室舒张末压明显增大,左室收缩压、左室内压上升最大速率明显下降(P<0.01);心肌肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β蛋白水平与心功能呈明显相关性。与冠状动脉微栓塞未治疗组比较,丙酮酸乙酯预处理能够显著抑制冠状动脉微栓塞后肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β的mRNA及蛋白水平表达,改善心室功能。结论丙酮酸乙酯预处理能够抑制大鼠冠状动脉微栓塞后促炎症因子的过度激活,改善心功能。

干扰素α对乙型肝炎小鼠病理形态学及TGF-β1、ACT-A表达影响

目的:探究干扰素α(IFN-α)对乙型肝炎小鼠病理形态学及转化生长因子β1(TGF-β1)和活化素A(ACT-A)表达影响。方法:选用雌性BALB/c小鼠30只,采用随机数表法将其分为对照组、模型组和IFN-α组,每组10只。通过尾静脉注射乙型肝炎病毒(HBV)的方法建立乙型肝炎模型,经尾静脉注射p KCMvint.IFN-α-2a促进IFN-α的表达水平。采用酶联免疫吸附法检测血清IFN-α、谷氨酸转移酶(ALT)、门冬氨酸转移酶(AST)、HBV血清标志物HBe Ag、Hbs Ag、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及白细胞介素6(IL-6)。观察HE染色和Masson染色检测肝组织病理学改变和纤维化情况。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-Qpcr)和蛋白印迹方法分别检测TGF-β1、ACT-A的m RNA和蛋白的水平。结果:模型组及IFN-α组小鼠血清中可检测出HBV标志物HBe Ag和HBs Ag,且IFN-α组血清HBe Ag和HBs Ag水平显著低于模型组(t=6.132,t=5.986;P<0.05)。IFN-α组的IFN-α水平显著高于模型组(t=4.812,P<0.05)。模型组ALT、AST和炎性因子TNF-α、IL-6显著高于对照组(t=6.115,t=6.548,t=5.771,t=6.238;P<0.05)。IFN-α组的ALT、AST、TNF-α和IL-6水平显著低于对照组(t=4.661,t=5.018,t=5.823,t=5.339;P<0.05)。对照组小鼠的肝组织正常且未发现纤维化现象;模型组小鼠肝组织出现病理学改变及炎症反应和纤维化;IFN-α组肝组织损伤程度较模型组显著缓解,仅有少量的纤维化染色。模型组小鼠肝组织中TGF-β1、ACT-A的m RNA和蛋白水平显著高于对照组(t(TGF-β1)=5.061,t=5.018;t(ACT-A)=4.718,t=4.059;P<0.05)。IFN-α组TGF-β1、ACT-A的m RNA和蛋白水平显著低于模型组(t(TGF-β1)=6.224,t=4.389;t(ACT-A)=5.973,t=5.389;P<0.05)。结论:IFN-α不但可以抑制HBV的复制,还可以通过控制ACT-A、TGF-β1的表达缓解炎性反应,并减少HBV感染引起的肝组织损伤和纤维化。

消退素D1在小鼠主动脉夹层中的作用及机制研究

目的探讨消退素D1(resolvin D1,RvD1)在小鼠主动脉夹层中的作用及机制研究。方法SPF级雄性小鼠40只,随机分成对照组、RvD1组、β氨基丙腈(BAPN)组和BAPN+RvD1组,每组10只,BAPN组和BAPN+RvD1组构建BAPN饮食诱导的小鼠主动脉夹层模型,对照组和RvD1组饲喂普通的小鼠维持饲料,RvD1组和BAPN+RvD1组腹腔注射RvD1 3μg/(kg·d),对照组和BAPN组注射等量生理盐水。用苏木精-伊红和血管弹力纤维染色(EVG)观察主动脉和弹力纤维的形态和结构,用ELISA法检测血清白细胞介素(IL)1、IL-17、TNF-α和γ干扰素水平,采用RT-PCR法检测主动脉组织IL-1、IL-17、TNF-α和γ干扰素mRNA表达。结果对照组和RvD1组均未出现主动脉夹层,而BAPN+RvD1组小鼠主动脉夹层发生率和病死率显著低于BAPN组,差异有统计学意义(20.0%vs 70.0%,10.0%vs 40.0%,P<0.05);苏木精-伊红染色和EVG结果提示,BAPN组小鼠血管壁增厚,伴假腔形成,同时中膜弹力纤维出现明显的断裂或中断,而BAPN+RvD1组血管壁仅轻度增厚,未见假腔形成;与对照组比较,BAPN组小鼠血清IL-1、IL-17、TNF-α、γ干扰素和主动脉IL-1、IL-17、TNF-α、γ干扰素mRNA表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),而BAPN+RvD1组血清IL-1、IL-17、TNF-α、γ干扰素水平和主动脉IL-1、IL-17、TNF-α和γ干扰素mRNA表达明显低于BAPN组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05)。结论RvD1可显著降低循环和主动脉炎症,防止中膜弹力纤维和主动脉的断裂,降低主动脉夹层的发生。

鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子-猪干扰素α1融合基因在大肠埃希菌中的可溶性表达及其生物学活性研究

为可溶性表达重组鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(ChGM-CSF)与猪干扰素α1(PoIFNα1)融合蛋白,并研究其生物学活性,本研究分别提取鸡、猪肝脏细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增ChGM-CSF和PoIFNα1基因,经linker连接上述两种基因后将其克隆于pET-32a原核表达载体,转化E.coliBL21(DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE和western blot检测融合蛋白表达产物。在ST细胞/VSV病毒测定系统以细胞病变抑制法滴定该融合蛋白的抗病毒活性;同时用MTT法检测其对鸡淋巴细胞增殖活性的促进作用。结果显示,PCR扩增并融合后的ChGM-CSF和PoIFNα1融合基因约为1000bp,构建重组表达载体后,诱导表达的rChGM-CSF-PoIFNα1融合蛋白分子量约55ku,主要存在于破碎菌体的上清中,表达量较高。Westernblot检测结果显示,该融合蛋白分别能够与ChGM-CSF多抗和PoIFNα单克隆抗体特异性结合,其抗病毒比活性约为1.1×10^6IU/mg,并且具有促进鸡淋巴细胞增殖的活性。本研究为rChGM-CSF-PoIFNα1重组融合蛋白的研制及其相关活性的测定提供实验依据。

国产人α＿1型基因工程干扰素治疗慢性肝炎Ⅲ期临床试验

３９例慢性肝炎患者，其中乙型肝炎１２例，丙型肝炎２７例，接受人α＿１型基因工程干扰素治疗（ｒＨＩＦＮα＿１）。１０例丙型肝炎病人ｒＨＩＦＮα＿１每日肌注１×１０￣６Ｕ，连用９０天，１７例丙型肝炎病人和乙型肝炎ｒＨＩＦＮα＿１每日肌注３×１０￣６Ｕ，连用９０天。治疗后乙型肝炎组ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ的阴转率均为４１．６７％；丙型肝炎用１×１０￣６Ｕ／ｄ和３×１０￣６Ｕ／ｄ组ＨＣＶＲＮＡ阴转率分别为５０％和６４．７％，两个剂量组阴转率比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５），治疗期间不良反应发生率较低，远期疗效尚待观察。

干扰素α-2b联合α1胸腺肽治疗慢性乙型肝炎疗效分析

目的探究干扰素α-2b联合α1胸腺肽治疗慢性乙型肝炎的临床疗效。方法将160例慢性乙型肝炎患者随机分为两组,即对照组经干扰素α-2b治疗,观察组在此基础上经α1胸腺肽治疗。再比较两组疗效。结果观察组治疗6个月ALT、AST复常率分别为45.0%、50.0%,对照组分别为18.8%、17.5%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗6、9、12个月HBs Ag转阴率分别为21.3%、3.2%、32.5%,对照组分别为5.0%、12.5%、15.0%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗6、9、12个月HBV DNA转阴率分别为58.8%、62.5%、62.5%,对照组分别为31.3%、36.3%、36.3%,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗6、12个月QOL各领域评分均显著优于治疗前(P<0.05);观察组治疗6个月生理、社会关系评分分别为(63.1±10.2)分、(60.4±12.7)分显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组治疗12个月生理、心理及社会关系评分分别为(65.4±11.1)分、(64.6±13.5)分、(62.4±12.6)分显著高于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢性乙型肝炎患者经干扰素α-2b联合α1胸腺肽治疗,可有效清除HBV,提高患者免疫力,控制发生不良反应,疗效确切,值得临床推广应用。

融合胸腺素α1的猪干扰素α在毕赤酵母中的表达及效价测定

猪干扰素α(IFN-α)是在特定条件下由细胞产生的一种具有广谱、高效抗病毒活性的可溶性糖蛋白,胸腺素α1(Tα1)是一种具有免疫调节的活性肽.本研究中将Tα1基因与去掉信号肽序列的猪IFN-αN端融合,构建酵母表达载体PHBM-Tα1-IFNα,同时构建单独表达IFNα的重组质粒PHBM-IFNα,重组质粒电转化至毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株,甲醛诱导表达.利用SDS-PAGE法检测融合蛋白的表达,并用细胞病变抑制法测定干扰素的效价.实验结果表明,酵母表达上清中IFNα的效价为2.916×10~6U/m L;Tα1-IFNα的效价为2.860×10~7U/m L,该结果证实胸腺素α1可提高融合表达蛋白猪干扰素的活性,因此,通过酵母表达体系获得高活性胸腺素-猪干扰素融合蛋白,可为高效、低成本获得抗病毒药物提供一种新的模式.

不同剂量干扰素α 1b雾化治疗小儿毛细支气管炎的疗效及安全性

目的:探讨采用不同剂量干扰素α1b雾化治疗小儿毛细支气管炎的临床有效性。方法:数字随机抽取我院2015年1月至2016年1月期间接收并采用2.0μg/kg干扰素α1b雾化治疗的20例小儿毛细支气管炎患儿作为大剂量组,选取同期接收并采用1.0μg/kg干扰素α1b雾化治疗的另20例为小剂量组,选取同期接收并行常规治疗的另20例为常规组,对比分析三组治疗的疗效。结果:大剂量组临床症状改善时间、总有效率及平均住院天数均优于小剂量组、对照组,比较差异存在统计学意义,P<0.05。结论:采用2.0μg/kg干扰素α1b雾化治疗小儿毛细支气管炎的效果显著,可推广。

胸腺肽α1对稳定期支气管扩张患者症状控制及免疫功能的影响

目的探讨胸腺肽α1对稳定期支气管扩张患者急性加重的预防作用及对细胞免疫的影响。方法将73例稳定期支气管扩张患者随机分为治疗组和对照组,治疗组除常规予支气管舒张剂及祛痰治疗外,给予胸腺肽a1 1.6 mg皮下注射,每周2次,共3个月,对照组仅予常规予支气管舒张剂及祛痰治疗,两组均随访9月,观察两组患者在临床症状控制表现并检测治疗前后患者外周血淋巴细胞亚群分布及血清IL-2和IFN-γ水平。结果胸腺肽α1组患者在症状控制表现上优于对照组,需住院治疗人次亦减少(P<0.05);胸腺肽α1组患者3个月后外周血CD4+、CD4+/CD8+比例上升(P<0.05),IL-2和IFN-γ浓度升高(P<0.05);对照组前后无明显变化(P>0.05)。结论胸腺肽a1通过增强稳定期支气管扩张患者的细胞免疫功能,可减少支气管扩张患者的急性加重频率。