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猪圆环病毒3型Rep蛋白的原核表达及酶活性分析
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作者 韩阳 关帅印 +3 位作者 李振 周赛赛 袁红根 宋云峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2061-2071,共11页
Rep蛋白对猪圆环病毒(porcine circovirus, PCV)的复制具有重要作用。为分析PCV3 Rep蛋白的核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性,作者使用镍亲和层析法纯化相应的重组蛋白,通过优化反应条件,建立Rep蛋白酶活性的测定方法,并探究Rep... Rep蛋白对猪圆环病毒(porcine circovirus, PCV)的复制具有重要作用。为分析PCV3 Rep蛋白的核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性,作者使用镍亲和层析法纯化相应的重组蛋白,通过优化反应条件,建立Rep蛋白酶活性的测定方法,并探究Rep蛋白关键活性位点。结果表明,Rep蛋白在体外具有核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性。当蛋白浓度为1.6μmol·L^(-1),Mg^(2+)浓度为1.0 mmol·L^(-1),37℃反应75 min时其ATPase活性达到最佳。当蛋白浓度为7μmol·L^(-1),Mg^(2+)浓度为12.5 mmol·L^(-1),37℃反应60 min时其解旋酶活性达到最佳。Y89为Rep蛋白核酸内切酶活性的关键位点,K173、D210、N250为ATPase活性和解旋酶活性的关键位点。本研究建立了PCV3 Rep蛋白酶活性分析的方法,初步揭示了该蛋白的主要功能位点,为Rep蛋白的功能研究以及基于Rep蛋白活性的抗病毒药物研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 REP蛋白 核酸内切酶活性 ATPASE活性 解旋酶活性
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猪圆环病毒3型Cap蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA检测方法的建立
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作者 张宝戈 黄雅琴 +2 位作者 蔡金双 朱晨光 李玉峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1170-1178,共9页
旨在建立检测猪圆环病毒3型(PCV3)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的PCV3Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的2E6单克隆... 旨在建立检测猪圆环病毒3型(PCV3)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的PCV3Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的2E6单克隆抗体作为检测抗体,经条件优化后建立了一种检测PCV3抗体的阻断ELISA方法。用建立的阻断ELISA方法检测50份临床阴性血清,计算阻断率(PI)的临界值,以此来确定该方法的判定标准:当PI≤28.30%时,判定结果为阴性;当PI≥35.05%时,判定结果为阳性;当28.30%<PI<35.05%时,判定为可疑,重复一次试验后如果结果仍为可疑,则判定为阳性。特异性试验表明该方法与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)以及猪瘟病毒(CSFV)的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验表明其检测效价可达到1:128;重复性试验表明批内与批间的变异系数均小于10%;符合性检验表明该方法与PCV检测金标准免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)比对的Kappa值达0.9,具有高度的一致性。综上所述,本研究建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性与较高的符合率,可用于后期进行PCV3抗体的检测,为PCV3的流行病学调查与临床诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 Cap重组蛋白 单克隆抗体 阻断ELISA
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Molecular detection of porcine circovirus type 3 in Shanxi Province,China
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作者 Weidong Yue Yihui Liu +2 位作者 Xinrong Zhang Haili Ma Junping He 《Animal Diseases》 2021年第2期116-124,共9页
Porcine circovirus type 3(PCV3),which was first detected in the United States of America in 2015,is a potential threat to the swine industry.However,the prevalence of PCV3 in Shanxi Province,China,is unclear.In this r... Porcine circovirus type 3(PCV3),which was first detected in the United States of America in 2015,is a potential threat to the swine industry.However,the prevalence of PCV3 in Shanxi Province,China,is unclear.In this research,the prevalence and genetic diversity of PCV3 were investigated in above area.Lung tissue samples(n=491)from 19 pig slaughterhouses across 11 cities throughout Shanxi Province were analyzed for PCV3 infection by PCR in 2019.The results showed that PCV3 positive rates in slaughterhouses and individuals were 100%(19/19)and 86.76%(426/491),respectively.PCV2 and PCV3 double-positive rates in slaughterhouses and individuals were 100%(19/19)and 59.27%(291/491),respectively.PCR positive samples were further sequenced and 8 PCV3 isolates were identified.The nucleotide homology of these isolates with other PCV3 isolates in NCBI database was 97.45-99.90%.A phylogenetic analysis,based on the complete genomic sequence and ORF2,divided these PCV3 strains into 2 major groups.Based on A24A/and R27/K amino acid mutations of capsid protein,the 8 identified PCV3 strains were separated to 2 clades.This was the first detailed investigation into the epidemiology of PCV3 in Shanxi Province.Our findings enabled us to assess the possibility of widespread transmission from this region.Thus,current findings establish a basis for further studies of genetic variations in PCV3 strains circulating in China. 展开更多
关键词 CIRCOVIRUS PREVALENCE porcine circovirus type 3(PCV3) Phylogenetic analysis
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猪圆环病毒3型Cap蛋白的原核表达与鉴定
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作者 朱钰英 高翠翠 +6 位作者 唐青海 刘婷 赵婷芳 曾沛暄 赵铖 胡意 李小申 《湖南畜牧兽医》 2024年第2期35-38,共4页
[目的]研究旨在扩增PCV3病毒的Cap基因,体外表达PCV3 Cap蛋白。[方法]试验分别建立重组原核表达载体p ET28a-PCV3-Cap和p Cold-PCV3-Cap,转化Rosetta(DE3)表达菌株,在不同温度条件下诱导表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋... [目的]研究旨在扩增PCV3病毒的Cap基因,体外表达PCV3 Cap蛋白。[方法]试验分别建立重组原核表达载体p ET28a-PCV3-Cap和p Cold-PCV3-Cap,转化Rosetta(DE3)表达菌株,在不同温度条件下诱导表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋白鉴定。[结果]PCV3 Cap蛋白在p ET28a原核表达系统中无表达;Rosetta-p Cold-PCV3-Cap在诱导温度为15℃、IPTG浓度为1.0 mmo L/L、诱导4 h的条件下,能够表达分子量约为25 k Da的Cap蛋白,且为可溶性表达。[结论]试验成功制备了PCV3 Cap蛋白,为制备PCV3疫苗及其诊断方法的研究提供了基础材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) CAP蛋白 原核表达 鉴定
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Phylogenetic analysis of the genomes of two strains of human adenovirus type 3
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作者 RONG ZHOU XIAO BO SU +6 位作者 QI WEI ZHANG QI YI ZENG BING ZHU CHU YU ZHANG HOE BO WU ZAO HE WU SI TANG GONG 《Journal of Microbiology and Immunology》 2007年第2期139-143,共5页
Human adenovirus type 3(HAdV-3)is widely prevalent all over the world,especially in Asia.The objective of this study is to carry out complete genomie DNA sequencing and the phylogenetic analysis for two strains(Guangz... Human adenovirus type 3(HAdV-3)is widely prevalent all over the world,especially in Asia.The objective of this study is to carry out complete genomie DNA sequencing and the phylogenetic analysis for two strains(Guangzhou01 and Guangzhou02)of HAdV-3 wild virus isolated from South Chi- na.Nasopharyngeal secretion aspirate specimens of sick children were inoculated into HEp-2 and HeLa culture tubes,and the cultures were identified by neutralization assay with type-specific reference rabbit antiserum.Type-specific primers were also utilized to confirm the serotype.The restriction fragments of HAdV genome DNA were cloned into pBlueScript SK(+)vectors and sequenced,and the 5' and 3' ends of the linear HAdV-3 genome were directly sequenced with double purified genomic DNA as tem- plates.General features of the HAdV-3 genome sequences were explored by using several bio-software. Phylogenetic analysis was done with MEGA 3.0 software.The genomic sequences of Guangzhou01 and Guangzhou02 possess the same 4 early regions and 5 late regions and have 39 coding sequences and two RNA coding sequences.Other non-coding regions are conservative.Inverted repeats and palindromes were identified in the genome sequences.The genomes of group B human adenovirus as well as HAdV-3 have close phylogenetic relationship with that of chimpanzee adenovirus type 21.The genomic lengths of these two isolated strains are 35 273 bp and 35 269 bp,respectively.The phylogenetic analysis showed that HAdV-B species has some relationship with certain types of chimpanzee adenovirus. 展开更多
关键词 人类 腺病毒 基因组 系统分析
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猪圆环病毒2型和3型引起母猪繁殖障碍的研究进展
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作者 李苏尧 杨青 《湖南畜牧兽医》 2024年第2期56-58,共3页
猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科圆环病毒属的成员,目前已报道发现4种基因型,猪圆环病毒病对全球养猪业造成重大影响。文章重点对猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)所引起的母猪繁殖障碍进行了综述,旨在进一步提高大家对PCV感染的认识,并为... 猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科圆环病毒属的成员,目前已报道发现4种基因型,猪圆环病毒病对全球养猪业造成重大影响。文章重点对猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)所引起的母猪繁殖障碍进行了综述,旨在进一步提高大家对PCV感染的认识,并为猪场提高生产效益提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) 猪圆环病毒3型(PCV3) 繁殖障碍
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2020-2021年我国规模化猪场猪圆环病毒2型和3型的分子流行病学调查分析
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作者 陈翔鸿 曹琪 +5 位作者 谌磊 邓文芳 袁意 孔丹妮 宋文博 汤细彪 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期88-96,共9页
采集13个省市自治区的491个规模化猪场的1447份疑似猪圆环病毒感染样本,通过荧光定量PCR方法进行猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的检测。分别随机选取50份PCV2和PCV3阳性样品,对其ORF2基因进行测序并分别进行核苷酸同源性比... 采集13个省市自治区的491个规模化猪场的1447份疑似猪圆环病毒感染样本,通过荧光定量PCR方法进行猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的检测。分别随机选取50份PCV2和PCV3阳性样品,对其ORF2基因进行测序并分别进行核苷酸同源性比对和遗传进化分析。结果显示,样本中PCV2和PCV3检出率分别为29.16%(422/1447)和18.93%(274/1447)。规模化猪场中PCV2和PCV3检出率分别为47.05%(231/491)和15.68%(77/491),PCV2和PCV3混合感染率为23.81%,混合感染高于单一感染,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪肺炎支原体(MhP)等病原体以多种组合的混合感染形式出现。50个PCV2序列与16个参考毒株序列的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为75.6%~100%和83.1%~99.1%,PCV3对应同源性分别为95.9%~100%和96.3%~100%。分子遗传进化分析显示PCV2d占80%(40/50),PCV2a占4%(2/50),PCV2b占16%(8/50),未检测到PCV2c和PCV2e。PCV3a、PCV3b和PCV3c分别占28%(14/50)、22%(11/50)和50%(25/50)。表明2020-2021年我国规模化猪场PCV2的主要流行基因型是PCV2d,其次为PCV2a和PCV2b。PCV3c为我国规模化猪场中的主要流行基因型,而PCV3a和PCV3b流行率也依然较高。论文对我国猪圆环病毒的分子流行病学进行了数据补充,对临床防控起到了预警作用,也为猪圆环病毒疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3 混合感染 分子流行病学
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猪圆环病毒3型的分离及致病性分析 被引量:1
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作者 库旭钢 于学祥 +5 位作者 孙琪 李盼盼 张梦佳 罗锐 钱平 何启盖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1568-1578,共11页
猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年由美国首次报道引起母猪繁殖障碍的一种新型猪圆环病毒,该病毒的致病性尚不完全清楚。为研究PCV3对断奶仔猪的致病性,本研究用PK-15细胞自临床病料分离到1株PCV3毒株,命名为PCV3/... 猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年由美国首次报道引起母猪繁殖障碍的一种新型猪圆环病毒,该病毒的致病性尚不完全清楚。为研究PCV3对断奶仔猪的致病性,本研究用PK-15细胞自临床病料分离到1株PCV3毒株,命名为PCV3/CH/HB/XY/2018,全基因组测序分析表明,该毒株属于PCV3a-IM基因亚型。分别用PCV3阳性病料初始匀浆液和第8代细胞培养物采用滴鼻和肌肉注射2种方式感染28日龄断奶仔猪,每组试验猪5头,并设置空白对照组。通过观察和分析试验猪的临床表现、体温、增重、病毒血症、各组织的病毒载量和病理变化等方面评价仔猪感染试验结果。结果显示:PCV3阳性病料初始匀浆液和细胞培养物在感染断奶仔猪后均会引起仔猪出现体温上升、消瘦、皮炎和生长缓慢等现象;病毒血症时间超过14 d,但21 d消失,病毒的组织分布结果表明,PCV3主要感染扁桃体、淋巴结等免疫器官,在脾、肺和扁桃体等组织中的病毒载量最高;感染猪可出现间质性肺炎、淋巴小结增生和嗜酸性粒细胞增多等病理变化。本研究表明PCV3/CH/HB/XY/2018毒株对断奶仔猪有致病性,为PCV3的致病机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 分离 致病性 病毒载量
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PCV3吉林野毒株全基因组序列分析及其Cap蛋白的亚细胞定位
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作者 刘东旭 刘宏莹 +5 位作者 苏诺 葛桂阳 麻宝艺 盛陈艳 李东丽 刘艺 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期27-32,共6页
为了研究吉林省猪圆环病毒3型(PCV3)野毒株遗传变异情况及其衣壳蛋白(Cap)的亚细胞定位特征,本试验对收集到的10株PCV3吉林野毒株进行全基因组序列测定和分析,并构建真核表达载体pcDNA3.1V5/HisA-Cap转染猪肺巨噬细胞(PAM);继而用本实... 为了研究吉林省猪圆环病毒3型(PCV3)野毒株遗传变异情况及其衣壳蛋白(Cap)的亚细胞定位特征,本试验对收集到的10株PCV3吉林野毒株进行全基因组序列测定和分析,并构建真核表达载体pcDNA3.1V5/HisA-Cap转染猪肺巨噬细胞(PAM);继而用本实验室已构建的兔源PCV3-Cap多克隆抗体,通过激光共聚焦检测Cap蛋白在PAM中的定位。序列分析结果显示,10株PCV3吉林野毒株与国内外参考株之间的全基因组核苷酸序列同源性为95.8%~99.5%,处于PCV3a和PCV3b两个亚群;基因重组分析结果显示,仅中国参考株MF589102(2016年)、MH445396(2019年)和分离株JL-2在80~303 nt、840~1196 nt和1885~2001 nt处发生3处重组。激光共聚焦检测结果显示,Cap蛋白大部分定位于细胞核,少部分定位于细胞质。结果表明,目前吉林省PCV3比较保守,没有出现较大变异,Cap蛋白在PAM的细胞核和细胞质中均有分布。 展开更多
关键词 野毒株 猪圆环病毒3 CAP蛋白 亚细胞定位
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猪肺炎支原体、猪圆环病毒2型和3型多重荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用 被引量:1
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作者 肖婷 何颖 +14 位作者 赵硕 蒋家霞 陈忠伟 郭旋 卢冰霞 林昌华 赵武 秦毅斌 段群棚 全琛宇 许心婷 陈婷婷 许艺兰 胡庭俊 张宁 《动物医学进展》 北大核心 2023年第2期8-14,共7页
为建立一种快速、特异的猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的多重荧光定量PCR鉴别检测方法,根据Mhp、PCV2和PCV3及β-actin基因保守区域序列,设计合成4对特异性引物及4种荧光基团标记的Taq Man探针。构建含... 为建立一种快速、特异的猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的多重荧光定量PCR鉴别检测方法,根据Mhp、PCV2和PCV3及β-actin基因保守区域序列,设计合成4对特异性引物及4种荧光基团标记的Taq Man探针。构建含有各目的基因的重组质粒标准品,筛选引物,优化反应条件,成功建立多重荧光定量PCR后评价该方法的特异性、敏感性、重复性并将该方法初步应用于临床样品检测。结果显示,该方法能同时特异性地鉴别检测Mhp、PCV2和PCV3,检测PRRSV、CSFV、PRV、JEV、PPV、PEDV、TGEV、FMDV病毒核酸无交叉反应;对Mhp、PCV2、PCV3和β-actin标准质粒的最小检出量分别为26.4、66.7、25.6、5990 copies/μL;该方法重复性好,组间和组内试验变异系数低于1.5%;用该方法检测101份临床样本,Mhp、PCV2和PCV3阳性率分别为20.8%、36.6%和33.7%。建立的多重荧光定量PCR方法能同时快速和定量检测Mhp、PCV2和PCV3,较普通PCR更敏感,实用性强,有效避免了多次检测耗时长、费用高的问题,为Mhp、PCV2和PCV3的监测和防控提供了可靠的检测技术。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3 多重荧光定量PCR
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猪圆环病毒3型和4型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 殷冬冬 王洁茹 +7 位作者 尹磊 沈学怀 戴银 赵瑞宏 侯宏艳 胡晓苗 王桂军 潘孝成 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第6期979-984,共6页
为了建立一种快速检测猪圆环病毒3型(PCV3)和4型(PCV4)的TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法,根据Gen Bank已登录的PCV3和PCV4基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,经优化各反应条件,构建标准曲线,分析其敏感性、特异性和重复性,并... 为了建立一种快速检测猪圆环病毒3型(PCV3)和4型(PCV4)的TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法,根据Gen Bank已登录的PCV3和PCV4基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,经优化各反应条件,构建标准曲线,分析其敏感性、特异性和重复性,并利用建立的荧光定量PCR方法对采自安徽省的临床样品进行检测,与普通PCR方法进行一致性评价。结果显示,PCV3的标准曲线为Y=–3.534 6 logX+41.11(R^(2)=1.00),PCV4的标准曲线为Y=–3.382 5 logX+40.67(R^(2)=1.00)。PCV3和PCV4的检测限分别为49.5和27.1 copies·μL^(-1)。对猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)无特异性扩增,组内和组间变异系数均<1%。临床样品检测结果显示,PCV3阳性检出率为40.8%,PCV4阳性检出率为20.4%,混合感染率为19.0%。建立了灵敏、特异,可同时快速、准确鉴别PCV3和PCV4的TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法,为PCV3和PCV4的检测和监测提供技术支撑。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 猪圆环病毒4型 TAQMAN 实时荧光定量PCR
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猪圆环病毒3型与宿主相互作用机制研究进展
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作者 孙仁杰 单颖 +6 位作者 安慧婷 王雅婷 谢荣辉 张传亮 赵灵燕 方维焕 李肖梁 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第7期1755-1762,共8页
猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)从2015年发现至今已在全世界多个国家和地区的养猪业被检出,是重要的新发猪病病原体。目前有关PCV3致病机制的研究有限,大部分集中于PCV3的流行病学调查、基因组演化分析和检测方法建立... 猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)从2015年发现至今已在全世界多个国家和地区的养猪业被检出,是重要的新发猪病病原体。目前有关PCV3致病机制的研究有限,大部分集中于PCV3的流行病学调查、基因组演化分析和检测方法建立。猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)与宿主之间关系紧密且复杂,二者的相互作用决定宿主细胞的命运和病毒的传播与存活。部分学者通过瞬转表达系统、临床分离和反向遗传学技术从病毒组分或全病毒水平对PCV3与宿主相互作用展开研究。本文系统阐述宿主细胞对PCV3感染的应答机制、PCV3-宿主蛋白的相互作用,以及PCV3生命周期的研究结果,将有助于进一步了解PCV3及其致病机制。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 宿主响应 病毒生命周期 病毒与宿主互作
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猪圆环病毒3型研究进展
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作者 曹旭阳 袁红 +7 位作者 孙普 李坤 杨宇轩 邓欣雨 焦云娟 白兴文 卢曾军 权富生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第9期1-7,共7页
猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科圆环病毒属的单股环状闭合DNA病毒,是引起猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,目前包括4个基因型:PCV1、PCV2、PCV3和PCV4。其中,PCV3是近年来新发的一种严重危害养猪业的基因型,已经在全球范围呈现广泛... 猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科圆环病毒属的单股环状闭合DNA病毒,是引起猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,目前包括4个基因型:PCV1、PCV2、PCV3和PCV4。其中,PCV3是近年来新发的一种严重危害养猪业的基因型,已经在全球范围呈现广泛流行趋势,引起了国内外学者的广泛关注。本文主要从病原学、流行病学、临床症状、致病机理、免疫反应和诊断方法对PCV3近年来研究情况进行了综述,为PCV3后期的各方面研究提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) 病原学 流行病学 临床症状 致病机理 免疫反应 诊断方法
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牛腺病毒3型感染状况及其fiber轴区基因检测
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作者 何姝凡 邹沅彤 +5 位作者 黄智兰 李倩 降措翁西 岳华 汤承 刘杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1333-1340,共8页
本研究旨在通过TB Green Real-time PCR的方法对国内6个省(四川省、山西省、河南省、河北省、江苏省和内蒙古自治区)的9个规模化养牛场140份以流鼻涕、发热、咳嗽、呼吸困难为特征的病牛呼吸道鼻拭子样本开展牛腺病毒3型(bovine adenovi... 本研究旨在通过TB Green Real-time PCR的方法对国内6个省(四川省、山西省、河南省、河北省、江苏省和内蒙古自治区)的9个规模化养牛场140份以流鼻涕、发热、咳嗽、呼吸困难为特征的病牛呼吸道鼻拭子样本开展牛腺病毒3型(bovine adenovirus type 3,BAdV-3)感染状况调查,并对其中的阳性样本进行fiber轴区基因检测。结果显示,140份样品中BAdV-3阳性率为36.4%,除河北省以外,其余各省均有BAdV-3检出,其中,四川及河南省检出率最高,分别达到82.9%(29/35)和83.3%(10/12)。其中,传统型占总阳性比的80.4%,fiber轴区缺失毒株占总阳性样本的19.6%。缺失位置与数量一致,轴区连续缺失237个碱基对(79个氨基酸),且缺失型仅在四川和河南两省检出,检出率分别为24.1%(7/29)和30%(3/10),场群阳性率分别为100%(2/2)和100%(1/1)。结果表明,BAdV-3已在我国牛场中广泛分布,目前流行的主要以传统型毒株为主,fiber轴区缺失毒株在我国具有独特的地域分布,主要在四川和河南省流行。 展开更多
关键词 牛腺病毒3 流行病学调查 荧光定量PCR 遗传进化 fiber轴区基因缺失
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新疆阿克苏地区猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 李虎 孙鹏亮 +3 位作者 邢潇月 张家浩 刘祥杰 李莲瑞 《塔里木大学学报》 2023年第1期45-50,共6页
本研究在猪圆环病毒3型(PCV3)Cap基因保守区设计一对特异性引物和荧光探针,以PCV3 Cap基因阳性质粒为模板,建立PCV3的TaqMan荧光定量PCR检测方法。TaqMan荧光定量PCR检测标准曲线在3.72×10^(8)~3.72×10^(1)拷贝/μL之间有较... 本研究在猪圆环病毒3型(PCV3)Cap基因保守区设计一对特异性引物和荧光探针,以PCV3 Cap基因阳性质粒为模板,建立PCV3的TaqMan荧光定量PCR检测方法。TaqMan荧光定量PCR检测标准曲线在3.72×10^(8)~3.72×10^(1)拷贝/μL之间有较好的结果。重复性试验结果中,组内变异系数在0.165%~0.588%之间,组间变异系数在0.013%~0.097%之间,变异系数均小于1%,表明本试验离散程度较小。在PCV3 TaqMan荧光定量PCR灵敏性试验中,灵敏性为3.72×10^(3)拷贝/μL,相较于传统PCR方法灵敏性增加10倍,本试验建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法为快速精准检测PCV3奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 Cap基因 实时荧光定量核酸扩增检测系统
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京津冀地区猪圆环病毒3型的全基因组克隆与分析
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作者 黄鹤 王阳 +4 位作者 杨敩校 李佳明 董虹 宋勤叶 周双海 《北京农学院学报》 2023年第3期77-80,共4页
【目的】监测近期在京津冀地区流行的猪圆环病毒3型毒株及其基因变异情况。【方法】以近期京津冀地区猪圆环病毒3型阳性临床样品为模板,用PCR技术扩增猪圆环病毒3型全基因组片段,随后进行基因克隆、序列测定和序列分析。【结果】PCR扩... 【目的】监测近期在京津冀地区流行的猪圆环病毒3型毒株及其基因变异情况。【方法】以近期京津冀地区猪圆环病毒3型阳性临床样品为模板,用PCR技术扩增猪圆环病毒3型全基因组片段,随后进行基因克隆、序列测定和序列分析。【结果】PCR扩增、序列测定和BLAST比对结果显示获得4株大小都为2000个核苷酸的猪圆环病毒3型全基因组序列。基于全基因组核苷酸分析结果显示,这4株猪圆环病毒3型与选取的国内外15株猪圆环病毒3型的同源性均达98.4%以上,系统发育树显示上述PCV3毒株所处的分支虽有所不同但却都非常近,表明不同猪圆环病毒3型毒株之间的全基因组核苷酸有非常高的同源性和保守性。基于开放阅读框2基因核苷酸的系统发育树显示上述猪圆环病毒3型毒株被分成3个分支,所得4株猪圆环病毒3型分别归属于基因型a与c,并呈现出一定的地域差异。【结论】获得了京津冀地区4株猪圆环病毒3型全基因组序列,虽然它们具有很高的全基因组核苷酸同源性与保守性,但却分属于2种基因型,并呈现出一定的地域差异。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 全基因组 序列分析 基因分型
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2021年浙江省部分地区猪圆环病毒2型及3型的遗传变异分析 被引量:1
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作者 于浩然 甘诗琪 +5 位作者 刘雅琦 董婉玉 杜静 周兴东 周莹珊 王晓杜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期643-648,共6页
为了解2021年中国浙江省各地区猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的遗传变异情况,本研究采用PCR技术对不同地区来源的702份病料样品检测。选取10个PCV2阳性样品进行全基因序列扩增和同源性及遗传演化分析。同时对已测序的26个PC... 为了解2021年中国浙江省各地区猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的遗传变异情况,本研究采用PCR技术对不同地区来源的702份病料样品检测。选取10个PCV2阳性样品进行全基因序列扩增和同源性及遗传演化分析。同时对已测序的26个PCV2 ORF2基因和24个PCV3 ORF2基因分别进行同源性分析,以及对Cap蛋白氨基酸序列进行比对分析。结果显示,病料样品中PCV2的总阳性率为32.8%(230/702),PCV3的总阳性率为15.0%(105/702)。其中PCV2在血清样品中的检出率最高,而PCV3在粪便样品中的检出率较高。PCV2和PCV3混合感染血清阳性率为6.1%(33/539),且仅在血清样品中有混合感染。测序筛选后共获得6个PCV2全基因序列,其中5个全基因序列为1767 bp,1个为1708 bp。PCV2全基因序列与24个国内外PCV2参考株全基因序列相比,同源性为94.1%~98.9%。通过全基因遗传进化树显示,6个PCV2全基因有5个PCV2d亚型和1个PCV2b亚型。ORF2基因序列的同源性结果显示,PCV2与PCV2疫苗株的同源性为90.2%~95.3%;PCV3与PCV3参考株的同源性为99.2%~99.4%,与PCV2疫苗株的同源性仅为32%,可能影响PCV2疫苗的保护效力。通过ORF2编码的Cap蛋白氨基酸序列比对结果显示,本研究中的PCV2 Cap蛋白氨基酸序列有20处变异,其中R^(59)K、K^(63)R、A^(68)N、R^(89)L、S^(90)T、S^(121)T、T^(134)N、S^(169)R、E^(210)D的变异揭示了该地区PCV2b亚型正逐渐向PCV2d亚型转变。上述结果表明,浙江省部分地区的PCV2d亚型已成为主要的流行基因型,且PCV3与PCV2疫苗株同源性较低。本研究结果丰富了浙江省PCV的分子流行病学资料,为相应疫病的防控提供一定的参考依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3 ORF2基因 序列分析
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一例母猪混合感染猪圆环病毒3型与近平滑假丝酵母菌的病例报告
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作者 薛少华 吕紫欣 +8 位作者 张鑫杰 魏梅蕊 黄紫芯 林新龙 黄思琼 华贤通 戴爱玲 杨小燕 俞国华 《广东畜牧兽医科技》 2023年第3期80-84,共5页
2022年6月福建省龙岩市某规模化猪场的母猪陆续发病,临床主要表现为病猪的膝关节轻微肿大,不愿久站,甚至站立困难。为查明发病原因,对病猪进行病理剖检,并采集血液和膝关节积液样品,分别用于生猪常见疫病病原体的核酸检测和微生物的分... 2022年6月福建省龙岩市某规模化猪场的母猪陆续发病,临床主要表现为病猪的膝关节轻微肿大,不愿久站,甚至站立困难。为查明发病原因,对病猪进行病理剖检,并采集血液和膝关节积液样品,分别用于生猪常见疫病病原体的核酸检测和微生物的分离培养。结果显示:病理剖检未发现主要脏器的明显病变;血液样品的核酸检测显示,猪圆环病毒3型(Por⁃cine Circovirus type 3,PCV3)为阳性,未检出其它主要病原体;膝关节积液样品的微生物培养产物的显微镜镜检结果显示有酵母样真菌,经培养产物的PCR扩增和DNA测序表明:该酵母样真菌为近平滑假丝酵母菌(Candida parapsilosis)。结论:该病例为猪圆环病毒3型(PCV-3)与近平滑假丝酵母菌的混合感染。根据文献查询,这是世界首例有关近平滑假丝酵母菌导致生猪膝关节深部感染并从膝关节积液中成功分离到近平滑假丝酵母菌的报道。 展开更多
关键词 母猪 猪圆环病毒3 近平滑假丝酵母菌 混合感染
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一株猪圆环病毒3型的鉴定和遗传演化分析
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作者 张琴 杨漫漫 +5 位作者 张月 李雪梅 杨潞 田志革 胡晓亮 崔鹏博 《口岸卫生控制》 2023年第6期56-58,共3页
目的了解宜宾市养殖场猪圆环病毒(PCV)3型的基因组特征和遗传变异规律。方法本试验利用PCR方法从患有呼吸困难仔猪中鉴定出一株PCV3,命名为SC-YB2212。经过PCR方法扩增衣壳蛋白序列,对测序结果拼接并进行系统进化树分析。结果SC-YB2212... 目的了解宜宾市养殖场猪圆环病毒(PCV)3型的基因组特征和遗传变异规律。方法本试验利用PCR方法从患有呼吸困难仔猪中鉴定出一株PCV3,命名为SC-YB2212。经过PCR方法扩增衣壳蛋白序列,对测序结果拼接并进行系统进化树分析。结果SC-YB2212与国内株PCV3序列同源性为97%~97.9%。遗传进化分析发现SC-YB2212与河北株MF318449和广西株MG650174和云南株MG650176属于同一分支,与西班牙株MH579746和美国株MK496280亲缘关系较近,与四川株MZ449244和重庆株KY075992亲缘关系较远。结论本研究为深入了解PCV3的感染及其毒株的分子特征和遗传变异,为PCV3的致病性研究和防控提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 3 衣壳蛋白 复制蛋白
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一株猪圆环病毒3型的鉴定和分子特征分析
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作者 陈燕凌 王颖旺 +5 位作者 向梳瑕 李雪梅 杨潞 杨漫漫 田志革 胡晓亮 《现代畜牧科技》 2023年第1期13-15,共3页
为了解猪圆环病毒(PCV)3型的基因组特征和遗传变异情况。本试验利用PCR方法从病死猪脾脏中鉴定出一株PCV3,命名为SC-YB2108。经过PCR方法扩增全序列,对测序结果拼接并进行系统进化树和遗传重组分析。结果显示:SC-YB2108序列长度2 000 bp... 为了解猪圆环病毒(PCV)3型的基因组特征和遗传变异情况。本试验利用PCR方法从病死猪脾脏中鉴定出一株PCV3,命名为SC-YB2108。经过PCR方法扩增全序列,对测序结果拼接并进行系统进化树和遗传重组分析。结果显示:SC-YB2108序列长度2 000 bp;遗传进化树分析发现SC-YB2108全基因组与中国株MK142771,MG96866,美国株MK496279,KX458235,韩国株MH231553处于同一独立分支,属于PCV3f。序列分析发现SC-YB2108与广西株MK095620同源性为99.2%,与湖南株MG372488的同源性为91.6%,与四川株MZ449244和OK334614的同源性分别为98.4%和98.7%。本研究有助于深入了解四川省PCV3流行毒株的分子特性,为后续PCV3的诊断试剂和疫苗开发提供依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 3 衣壳蛋白 复制蛋白
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