抗PCV4 Cap蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立可应用于猪圆环病毒4型(PCV4)候选疫苗特异性抗体检测与评价方法,本研究应用PCV4 Cap蛋白作为抗原,以PCV4多克隆兔源抗体作为一抗,优化各反应的最佳条件并建立了针对PCV4 Cap蛋白抗体的间接ELISA方法。最佳条件为2μg/m L PCV4 Cap纯化蛋白,4℃包被过夜,5%脱脂乳封闭60 min,待检血清稀释比例为1∶800,反应条件为37℃、45 min,酶标抗体稀释比例为1∶5000,反应条件为37℃、60 min,底物显色时间为10 min,Cut of f值为0.157,灵敏度可达102400倍。成功建立的抗PCV4Cap蛋白抗体间接ELISA检测方法具有良好的敏感性、重复性和特异性。可为检测PCV4候选疫苗的特异性抗体水平提供一种精准、高效的方法。

TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测PCV2、PCV3和PCV4方法的建立和应用

为建立一种可同时鉴别致病性猪圆环病毒(PCV)不同基因型的检测方法,本试验针对PCV2、PCV3和PCV4的ORF2基因保守区域设计引物和探针,将人工合成目的基因与质粒连接,构建阳性质粒PCV2-ORF2、PCV3-ORF2和PCV4-ORF2。通过优化引物浓度、探针浓度、退火温度等参数,建立PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。应用建立的方法对38份临床样品进行应用检测,对24个养猪场(户)进行流行病学调查。结果显示,建立的方法能特异性区分PCV2、PCV3和PCV4,且与其他常见猪病病原不发生交叉反应;对PCV2、PCV3和PCV4的最低检出浓度分别为1.56×10、1.28×10和1.76×10拷贝/μL;批内和批间变异系数均小于2%,重复性好;38份临床样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性样品分别为17、3和1份,从24个养猪场(户)采集的689份样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性率分别为33.33%、12.50%和8.33%。结果表明,本试验建立的PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于PCV的快速分型检测,为PCV的临床诊断和流行病学调查提供了检测工具。

河北北部地区PCV4流行株的遗传变异分析

为了解河北省猪圆环病毒4型(PCV4)分子流行病学特点和遗传进化规律,本研究对2016年以来收集自河北北部地区395份临床猪血清、肺脏、脾脏等样品,采用PCR技术进行PCV4检测,并对9株PCV4的全基因组进行了扩增、克隆和测序,利用Megalign等软件分析其与参考株全基因组的遗传进化关系。结果显示,395份样品中,86份检测为PCV4阳性,阳性率21.8%,9株分离株与当前流行的PCV4参考株序列同源性高达98.1%~99.8%,与PCV1/2/3参考株相应序列同源性为42.0%~52.2%,与狐圆环病毒(Fox CV)、蝙蝠圆环病毒(Bat CV)和水貂圆环病毒(Mink CV)全基因组序列同源性分别为52.6%~52.9%,39.3%~39.5%和67.9%~68.7%。从遗传进化关系上,9株PCV4株与Mink CV属于同一分支,亲缘关系最近。本研究首次对河北北部地区进行了PCV4分子流行病学调查,证实河北地区存在PCV4流行,丰富了河北乃至我国PCV4的流行病学数据,为PCV4感染的防控提供了重要的参考价值。

猪圆环病毒4型Rep蛋白原核表达及多克隆抗体制备

【目的】应用原核表达系统表达猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type 4,PCV4)复制酶蛋白(Rep),纯化后免疫小鼠制备Rep蛋白多克隆抗体。【方法】以PCV4福建株(FJ2020001)为模板,采用PCR法扩增获得Rep基因片段,构建原核表达质粒pET-30a-Rep;将pET-30a-Rep转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用0.5 mmol/L IPTG诱导表达重组Rep蛋白,利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白。表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,利用Western blotting和间接ELISA鉴定鼠源多克隆抗体的免疫原性和抗体效价。【结果】成功克隆PCV4 Re p基因,构建了可表达重组Rep蛋白的原核表达质粒;SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白分子质量约为35 ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果表明,该蛋白能被PCV4阳性血清和鼠源多克隆抗体特异性识别,制备的鼠源多克隆抗体效价可达1∶16000。【结论】本研究成功表达并纯化了具备抗原性的PCV4重组Rep蛋白,为开发PCV4血清学诊断试剂盒和开展猪场PCV4流行病学调查奠定基础。

PCV4 PCR检测方法的建立及河南地区PCV4的遗传进化分析

猪圆环病毒4型(PCV4)于2019年在我国湖南省患有猪呼吸道疾病、腹泻及皮炎肾病综合征的猪群中首次发现。为进一步了解该病毒在河南地区的流行和遗传演化情况,本研究根据GenBank中PCV4 Cap基因序列,设计了1对特异性引物,经反应条件优化,建立了检测PCV4的PCR方法。特异性试验结果显示,该方法仅对PCV4能扩增出约400 bp的目的条带,对PCV2、PCV3、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪流行性腹泻病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、大肠杆菌、沙门氏菌及阴性对照均无该目的条带;对PCV4质粒标准品的检测限为54.8拷贝/μL;对来自不同地区的3份PCV4肺组织样品DNA于不同时间分别重复扩增3次,结果一致且均为阳性。表明该PCR方法具有良好的特异性,敏感性和重复性。采用该方法对河南省部分地区16个猪场137份组织样品进行检测,结果显示,PCV4阳性率为13.87%(19/137),有7个地区为PCV4阳性,且猪场阳性率为43.75%(7/16),表明PCV4已在河南地区流行。对PCV4的部分Cap基因进行克隆、测序及遗传进化分析。结果显示,成功克隆2份PCV4阳性样品的部分Cap基因(命名为XX和LY),与GenBank中PCV4参考株(PCV4 HNU-AHZ-2019)相应基因的同源性分别为99.2%和98.4%。Cap基因的系统发育分析显示,XX和LY与PCV4 HNU-AHZ-2019株相应基因同属于一个独特的分支,而与其他圆环病毒属相应基因处于不同的分支,表明XX和LY与PCV4 HNU-AHZ-2019株相应基因亲缘关系较近。本研究为PCV4感染的早期监测和该病的防控提供了有力的技术支持。

猪圆环病毒4型研究进展

猪圆环病毒4型(PCV4)是新发现的圆环病毒科圆环病毒属的成员。自2019年首次在家猪身上发现后,国内外开始陆续报道其研究成果。目前,该病毒已在我国和韩国多省的猪群中传播,欧洲、美洲尚无PCV4阳性病例报道。临床上与PCV3相似,PCV4也与母猪繁殖障碍、猪皮炎和肾病综合征(PDNS)、腹泻、呼吸和神经系统病症等存在潜在关联,可能给养猪业带来严重的危害,因此广大研究学者应引起重视。本文就PCV4的生物学特征、基因组结构和蛋白功能、遗传变异特征和流行病学特征等进行了综述,以期为后续研究提供参考。

猪圆环病毒3型和4型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立一种快速检测猪圆环病毒3型(PCV3)和4型(PCV4)的TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法,根据Gen Bank已登录的PCV3和PCV4基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,经优化各反应条件,构建标准曲线,分析其敏感性、特异性和重复性,并利用建立的荧光定量PCR方法对采自安徽省的临床样品进行检测,与普通PCR方法进行一致性评价。结果显示,PCV3的标准曲线为Y=–3.534 6 logX+41.11(R^(2)=1.00),PCV4的标准曲线为Y=–3.382 5 logX+40.67(R^(2)=1.00)。PCV3和PCV4的检测限分别为49.5和27.1 copies·μL^(-1)。对猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)无特异性扩增,组内和组间变异系数均<1%。临床样品检测结果显示,PCV3阳性检出率为40.8%,PCV4阳性检出率为20.4%,混合感染率为19.0%。建立了灵敏、特异,可同时快速、准确鉴别PCV3和PCV4的TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法,为PCV3和PCV4的检测和监测提供技术支撑。

伪狂犬病病毒和猪圆环病毒4型二重SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

本研究设计、合成了分别靶向伪狂犬病病毒(PRV)gE基因和猪圆环病毒4型(PCV4)Cap基因保守区域的特异性引物,并在优化反应条件的基础上,建立了能够同时检测和鉴别PRV和PCV4的二重SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。结果显示,该方法具有良好的线性关系,R2=0.999。在同一个反应体系中,能够特异地检测到PRV和PCV4的特定荧光信号,而其他病原体无信号;对PRV和PCV4的检测限分别为48.5 copies/μL和40.8 copies/μL。利用建立的二重荧光定量PCR方法对34份猪临床样品进行检测,结果显示,PRV检出率为44.12%(15/34),PCV4检出率52.94%(18/34),且二者混合感染的检出率为32.35%(11/34),比常规PCR方法更加灵敏。该方法是检测PRV和PCV4的一种快速、灵敏、特异的方法。

江苏地区猪圆环病毒4型抗体的检测分析

2019年我国湖南省首次发现猪圆环病毒4型(PCV4),其属于圆环病毒科圆环病毒属新成员。为有效了解江苏地区PCV4的流行态势和发生风险,我们采用已成功建立的PCV4间接ELISA检测方法,对采集自2021年间江苏省13个地区不同规模场和散养户的375份猪血清样品进行了抗体检测,结果共检出抗体阳性样品21份,样品总阳性率为5.60%(21/375),场点总阳性率为29.03%(9/31)。本研究有助于及时了解猪群中PCV4抗体情况,对指导该病的防控具有重要意义。

PCV2通过激活NF-κB信号途径调节体外培养仔猪淋巴细胞IL-4和IL-12的分泌

选取8头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗原、抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取其脾脏制成单细胞悬液后,随机分为4组:对照组、NF-κB抑制剂组(抑制剂组)、PCV2组和NF-κB抑制剂-PCV2组(抑制剂-PCV2组),体外培养24 h后收获淋巴细胞及培养上清液。ELISA方法检测培养上清液中IL-4和IL-12的含量;间接免疫荧光定位检测PCV2感染淋巴细胞的情况和核因子κB(NF-κB)蛋白入核情况,Western blot定量检测细胞浆中髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化抑制性核因子кB(p-IкB)及NF-κB/p65和细胞核中NF-κB/p65蛋白含量的变化,电泳迁移率法(EMSA)检测细胞核中NF-κB与DNA的结合活性。结果显示,细胞培养上清液中,PCV2组IL-4含量明显低于对照组及抑制剂-PCV2组(P<0.05),对照组与抑制剂-PCV2组无差异;PCV2组细胞培养上清液中IL-12含量显著高于对照组(P<0.05),抑制剂-PCV2组极显著低于PCV2组(P<0.01)。PCV2感染后可在淋巴细胞内观察到PCV2抗原,并主要存在于细胞浆中。淋巴细胞胞浆内MyD88蛋白含量,PCV2组极显著高于对照组(P<0.01),PCV2组与抑制剂-PCV2组之间无显著差异。PCV2组淋巴细胞胞浆内p-IκBα的蛋白含量,胞核中NF-κB/p65含量及NF-κB与DNA结合活性均显著高于对照组;抑制剂和抑制剂-PCV2组淋巴细胞胞浆内p-IκBα的蛋白含量,胞核中NF-κB/p65含量及NF-κB与DNA结合活性均显著低于对照组。结论:PCV2可感染体外培养的仔猪淋巴细胞,介导MyD88-NF-κB信号途径激活从而调节淋巴细胞IL-4和IL-12的分泌。

福建省猪圆环病毒4型PCR检测及全基因组序列分析

为了解福建省猪圆环病毒4型(PCV4)流行株的现状和遗传演化,收集了2018年-2019年福建省规模化猪场200份疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪组织病料或血清,通过荧光定量PCR方法进行PCV4的核酸检测。结果表明,200份检测样品中PCV4核酸阳性的有4份,检出率为2%(4/200),成功克隆了1个PCV4全基因组序列(FJ-PCV4)。FJ-PCV4的基因组全长为1 770 bp,与国内PCV4代表毒株(GenBank登录号MK948416和MK986820)核苷酸序列同源性为98.8%~99.2%,与PCV1、PCV2及PCV3代表毒株Eng-1970、AF055392、AF055394、DK1980PMWSfree、BDH、 MN2016和MO2015等的核苷酸同源性为43.3%~52.0%,而与水貂圆环病毒Mink circovirus strain SD16、Mink circovirus strain MiCV-DL13同源性为68.1%~68.2%,表明PCV4是一种不同于PCV1、PCV2和PCV3的新型圆环病毒。研究结果为PCV4的分子流行病学研究提供了基础资料。

野猪源猪圆环病毒4型的发现及其Cap基因序列分析

猪圆环病毒4型(PCV4)于2019年在我国家猪中首次检测到,并发现其可能与多系统呼吸道疾病、腹泻及皮炎肾病综合征疾病有关。为了解该病毒在野猪中的流行和遗传进化特征,本研究采集江西省山区野猪组织样品25份,包含淋巴结、肾脏、脾脏,采用探针法荧光定量PCR(Taq Man qPCR)对组织样品检测,对PCV4阳性组织样品采用普通PCR扩增其Cap基因并分析其同源性及遗传进化关系。结果显示,25份样品中检测到3份PCV4阳性样品,检出率为12%(3/25);普通PCR扩增结果显示,在3份阳性样品中均扩增到约1300 bp的目的条带,测序后的序列比对分析结果显示其均为PCV4全长Cap基因序列(JXNC-2020、JXYC-2020及JXGZ-2020)。Cap基因的同源性分析显示,3个野猪源PCV4 Cap基因序列间的同源性为98.69%~100%,氨基酸序列间的同源性为97.1%~100%;与韩国野猪源PCV4流行株E115 Cap基因序列的同源性为98.11%~98.54%,氨基酸序列的同源性为96.93%~98.25%;与国内家猪源PCV4 Cap基因序列的同源性为98.54%~99.13%,氨基酸序列同源性97.37%~99.12%;与E115株相比,本研究获得的3个PCV4 Cap蛋白氨基酸序列分别存在3个及7个突变氨基酸。与国内PCV4相比,PCV4 Cap基因JXGZ-2020编码的氨基酸序列突变数明显少于其与韩国流行株相比。Cap基因的系统发育分析显示,野猪源PCV4与家猪源PCV4同属于一个分支,与圆环病毒属其他病毒处于不同分支。上述结果表明,野猪源PCV4与家猪源PCV4的亲缘关系较近,间接表明野猪可以促进PCV4的扩散与传播。本研究结果首次拓展了PCV4的宿主范围,为进一步研究PCV4的流行及基因组特征提供参考。

猪圆环病毒4型分子流行病学及检测方法研究进展

猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type4,PCV4)是近年来发现的一种新型病毒,猪感染PCV4后可引起严重的呼吸道疾病、腹泻、皮炎与肾病综合征等临床症状。目前已在国内多个省份发现猪群PCV4阳性,同时在韩国、泰国也已有猪群感染PCV4的相关报道。PCV4检测方法主要包括PCR及其衍生技术(常规PCR、多重PCR、荧光定量PCR、微滴式数字PCR)、核酸等温扩增技术(环介导等温扩增、重组酶介导等温核酸扩增、多酶等温快速扩增、重组酶聚合酶扩增)以及酶联免疫吸附试验等。论文对PCV4的发现、分子特征、流行病学及分子检测方法进行综述,以期对PCV4有更深入了解。

PCV2、PCV3和PCV4三重荧光PCR鉴别检测方法的建立及应用

根据猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3)和猪圆环病毒4型(porcine circovirus 4,PCV4)保守区域基因序列合成特异性的引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了一种可同时快速高效鉴别检测PCV2、PCV3和PCV4的三重荧光PCR方法。结果显示,所建立的三重荧光PCR方法仅对PCV2、PCV3和PCV4出现阳性扩增,与猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪支原体肺炎(M.hyo).猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪常见病原无交叉反应;对PCV2.PCV3和PCV4的最低检出限分别为1.69×10^(1),1.38×10^(2),1.42×10^(2)拷贝;组内和组间试验变异系数均小于1.6%,重复性好。进一步应用所建立的PCV2、PCV3和PCV4三重荧光PCR方法对263份猪临床样品进行检测,结果检出168份PCV2阳性(阳性率为63.88%),35份PCV3阳性(阳性率为13.31%),21份PCV4阳性(阳性率为7.98%),其中PCV2/PCV3/PCV4共感染3份(阳性率为1.14%),检测结果与单重荧光PCR方法一致。本研究所建立的PCV2、PCV3和PCV4三重荧光PCR方法可以有效的实现对PCV2、PCV3和PCV4的同时快速检测。

猪圆环病毒4型实时荧光RAA检测方法的建立

为快速检测猪圆环病毒4型(PCV4),本研究根据PCV4的Cap基因片段保守区设计引物和探针,建立了PCV4重组酶介导核酸等温扩增荧光法(RAA),并应用该方法对40份猪组织样品进行检测。结果表明,该方法可在20 min内,42℃恒温条件下特异性检测出PCV4,以猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒核酸为模板进行反应的扩增结果均为阴性;最低检出限至7.42×10^(1)拷贝/μL,灵敏度较高。利用建立的RAA检测方法和常规PCR法分别对猪组织样本进行检测,均未检出,表明当前猪场流行率较低。综上所述,本研究建立的PCV4实时荧光RAA检测方法快速简便、特异性强、灵敏度较高,可应用于PCV4的临床筛查与流行病学研究。

猪流行性腹泻病毒和猪圆环病毒4型双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立

分别靶向猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因和猪圆环病毒4型(PCV4)ORF2基因,合成了2对特异性引物,建立了同时检测PEDV和PCV4的双重SYBR GreenⅠ荧光PCR检测方法。结果显示,PEDV和PCV4在一个反应体系中出现明显不同的熔解峰(Tm),PEDV的Tm值为84℃,PCV4的Tm值为79℃,而对其他常见的非靶标猪病毒没有显示特定的熔解峰,且对于PEDV和PCV4的最低检测极限分别为55.2,44.1拷贝/μL。利用本研究建立的双重荧光PCR方法对30份猪临床样品进行检测,结果显示,PEDV和PCV4的检出率分别为40%(12/30)和60%(18/30),PEDV和PCV4混合感染的检出率为33%(10/30),相较于常规PCR方法更加灵敏。该方法能够同时对PEDV和PCV4进行检测,极大地提高了检测效率和准确度,为PEDV和PCV4的诊断与防控提供技术支持。

猪圆环病毒2,3,4型三重荧光定量PCR检测方法的建立和应用

为建立同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)、3型(PCV3)和4型(PCV4)的方法,根据GenBank中的PCV2、PCV3和PCV4基因保守序列设计引物和探针,通过反应体系优化后,建立同时检测PCV2、PCV3和PCV4的三重荧光定量PCR方法,并对其特异性、敏感性、稳定性、与普通PCR方法的一致性进行评价。结果显示,建立的方法可特异性检测PCV2、PCV3和PCV4,与猪细小病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒1型、猪伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒无交叉反应产生。批间与批内重复性试验变异系数系数均小于3%。对83份猪组织样品进行检测,其中PCV2、PCV3和PCV4阳性率分别为68.67%,28.92%,20.48%。结果表明建立的三重荧光定量PCR方法具有敏感度高、特异性强和稳定性好的优点,可用于PCV2,PCV3,PCV4型的流行病学调查和鉴别诊断。

猪圆环病毒3型和4型双重PCR检测方法的建立

为了检测和鉴别猪圆环病毒3型(PCV3)和4型(PCV4),根据GenBank已登录的PCV3和PCV4基因序列,在PCV3 Rep和PCV4 Cap基因的高度保守区域设计并合成2对特异性引物,经过双重PCR反应条件优化,建立了能够同时检测PCV3/4的双重PCR方法。结果显示,该方法能同时扩增出138(PCV3)和391 bp(PCV4)特异片段,而对PCV2、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒和猪流行性腹泻病毒核酸扩增结果均为阴性。PCV3/4的检测极限分别为74.5,90.2拷贝/μL。经临床样本检测结果表明,本试验建立了同时检测PCV3/4双重PCR方法,且具有准确、可靠、灵敏度高、特异性强的特点,为PCV3/4的临床检测和鉴别诊断提供了技术支持。

猪圆环病毒2型和4型双重PCR检测方法的建立

旨在建立一种能同时快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)和4型(PCV4)的双重PCR方法。参考GenBank中PCV2和PCV4基因组序列,分别在PCV2 Rep和PCV4 Cap基因高度保守区设计2对特异性引物,经双重PCR条件优化,建立同时快速检测PCV2/4的双重PCR方法。该方法能同时扩增出264 bp(PCV2)和391 bp(PCV4) 2条特异性片段,而对其他8种常见猪病原扩增均为阴性;PCV2/4的最低检测量分别为61.1,54.9拷贝/μL。应用该方法对河南及山西省内60份临床样品进行检测,检测结果表明PCV2的检出率为51.67%(31/60),PCV4的检出率为18.33%(11/60),混合感染检出率为16.67%(10/57),单一PCR及双重PCR检测结果符合率100%。本研究建立的双重PCR检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好等优点,适合对PCV2和PCV4鉴别诊断和检测。

检测猪圆环病毒4型实时荧光PCR方法的建立及应用

参照GenBank收录的PCV4 ORF2基因保守序列,设计合成了1对特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应体系,建立了针对PCV4的实时荧光PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行评价。结果显示,该方法的Ct值与标准品在1.53×10^(3)~1.53×10^(7)拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,R^(2)值为0.999;特异性强,仅对PCV4呈特异性扩增,与PCV1、PCV2、PCV3以及其他多种猪常见病原均无交叉反应;敏感性高,最低检测限为1.53×10^(1)拷贝/μL反应;重复性好,组内、组间变异系数均小于2%。使用该方法对采集自2013—2020年间河北省10个地区不同养殖场和屠宰场的868份猪组织样本进行PCV4检测,结果表明PCV4的阳性检出率为1.27%(11/868)。ORF2基因测序分析表明,河北省分离株同国内其他分离株的ORF2同源性为98.4%~99.6%。本研究建立的实时荧光PCR方法对PCV4的病原学监测和流行病学调查具有重要意义。