牛初乳免疫球蛋白IgG微胶囊的制备及其释放性能

以大豆油为油溶性介质,阿拉伯胶(GA)和麦芽糊精(MD)为壁材,采用乳化-喷雾法制备IgG微胶囊。通过正交试验,获得最佳工艺条件为:油水体积比3:4、GA与MD质量比1:2、壁材添加量5%、进风温度140℃,在此条件下制得的微胶囊包埋率为81.24%。扫描电子显微镜(SEM)观察和红外光谱检测(FTIR)结果表明,IgG微胶囊具有较好的完整性和致密性,基本保持了IgG原有的结构及营养价值。在体外模拟肠液和模拟胃液中,IgG微胶囊的释放过程均为一级动力学模型。

自身免疫性溶血性贫血患者IgG亚类与血细胞参数的相关性研究

目的:探讨自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者IgG亚类与血细胞参数的相关性。方法:选择本院2010年12月至2016年8月诊断为温抗体型AIHA(排除单纯C3d型)34例免疫复合型(IgG+C3d)和单IgG型的患者。其中原发性26例,继发性8例;男11例,女23例;平均年龄37.8(0.5-79)岁。健康对照者30名,男15名,女15名,平均年龄42.8(18-55)岁。采用酶联免疫的方法(双抗体夹心法),对30例健康对照者、34例AIHA患者及其中的32例患者红细胞放散液进行IgG亚类检测。结合患者血细胞部分参数,分析患者IgG亚类水平与血细胞部分参数的关系。2组间比较采用独立样本t检测,相关分析采用Spearman方法。结果:34例AIHA患者IgG1-4平均值高于30例健康对照者,2组比较差异有统计学意义(IgG1:t=-4.88,P<0.01;IgG2:t=-3.06,P<0.01;IgG3:t=-5.39,P<0.01;IgG4:t=-3.16,P<0.01)。而2组各亚类所占IgG的百分比比较显示,除IgG4外,其余3个亚类所占IgG的百分比均有统计学差异(IgG1:t=-4.03,P<0.01;IgG2:t=7.38, P<0.01;IgG3:t=-3.03,P<0.01;IgG4:t=1.73,P>0.05)。对34例AIHA患者血浆中IgG亚类与部分血细胞参数采用Spearman相关分析显示,IgG1与Hb、RBC、HCT呈正相关(Hb:r=0.358,P<0.05;RBC:r=0.426,P<0.05;HCT:r=0.363,P<0.05),IgG1、IgG2与WBC计数呈负相关(IgG1:r=-0.437,P<0.05;IgG2:r=-0.487,P<0.01),IgG2与PLT计数呈负相关(r=-0.436,P<0.05)。患者血浆和放散液中各亚类所占百分比比较显示,除IgG2无统计学意义外,其余3个亚类的百分比均有统计学差异(IgG1:t=6.528,P <0.01;Ig G2:t=1.544,P>0.05;Ig G3:t=-8.488,P<0.01;Ig G4:t=-9.434,P<0.05)。结论:AIHA与Ig G1和Ig G3相关,IgG亚类检测对研究AIHA的诊断、治疗及发病机理有一定意义。

压电石英晶体微阵列免疫传感器检测IgG的实验研究

目的 构建一种新型压电石英晶体人免疫球蛋白 (IgG)的免疫微阵列传感器。方法 抗IgG单克隆抗体采用蛋白A(SPA)法固定在AT切向、基频 1 0MHz的石英晶体微阵列金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电石英晶体IgG免疫微阵列传感器。结果 构建的IgG压电石英晶体免疫微阵列传感器对IgG的响应特性良好 ,其检测下线为 0 .5mIU/ml。 结论 研制的压电石英晶体IgG免疫微阵列传感器具有灵敏度高、特异性好、成本低廉、操作简单、快速 ,能在线实时检测等优点 ,可用于临床实验诊断。

直接酶联免疫吸附法检测猪血清IgG的影响因素

直接酶联免疫吸附法检测猪血清中G型免疫球蛋白（IgG），最小检测量为10ng，最适检测范围纯IgG为10～60ng，猪血清IgG为10～40ng。酶标抗体最适稀释度为1／3500。酶标板内与酶标板间平行测定变异系数均小于5％。

脑脊液寡克隆区带及鞘内IgG合成相关指标分析在多发性硬化症诊断中的应用

目的探讨脑脊液特异寡克隆区带(CSF-OCB)及鞘内免疫球蛋白G(IgG)合成相关指标分析在多发性硬化(MS)诊断中的意义。方法回顾性分析2014年1月至2017年12月于北京天坛医院确诊的77例MS患者的临床资料,并选取同期非MS患者493例为对照组,包括视神经脊髓炎(NMO)97例(NMO组),格林巴利综合征(GBS)67例(GBS组),神经系统炎性疾病(NID)86例(NID组),神经系统非炎性疾病(NIND)243例(NIND组)。采用琼脂糖凝胶等电聚焦法测定CSF-OCB,速率散射比浊法定量检测IgG和清蛋白(Alb),利用公式计算IgG指数、24hIgG合成率,并分析上述相关指标对MS的诊断意义。结果 MS组CSFOCB阳性率明显高于对照组各组,差异均有统计学意义(P<0.01)。MS组与NMO组、NID组、NIND组IgG指数比较,差异均有统计学意义(P_1<0.01)。MS组与NMO组及NIND组24hIgG合成率比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 CSF-OCB、IgG指数、24hIgG合成率测定,尤其是明确CSF-OCB,对MS的诊断和鉴别诊断具有重要临床意义。

DEAE-52层析对猪血清IgG提纯得率的影响

目的:提纯猪血清IgG,并分析DEAE-52层析对IgG得率的影响。方法:用硫酸铵盐析和DEAE-52阴离子交换层析两步法提纯猪血清IgG,以SDS-PAGE、Bradford法浓度测定和免疫双扩散来分析DEAE-52层析对IgG得率的影响。结果:DEAE-52层析获得两个分开明显无重叠洗脱峰,两峰均含有IgG,其中第一峰蛋白纯度达95.7%,得率为3.0～4.0mg/ml血清;第二峰IgG纯度59%。结论:DEAE-52层析能使猪血清IgG在两个洗脱峰中分布,两步法能从层析第一峰获得电泳纯IgG,对层析第二峰进一步纯化能大幅提高IgG得率。

聚丙烯酰胺凝胶电泳研究硫酸铵盐析分离猪血清IgG

通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对硫酸铵盐析分离猪血清G型免疫球蛋白进行了研究,结果显示pH值7.4时,猪血清IgG主要沉淀区间为硫酸铵饱和度25～40%,10倍稀释猪血清IgG最佳硫酸铵沉淀参数为:pH值7.4,硫酸铵饱和度37%,此时IgG得率为80.5%,纯度为72.9%。沉淀的血清蛋白中还含有约12%白蛋白和9%其它γ-球蛋白。沉淀时IgG活性保持不变。

预处理猪血清IgG料液的超滤浓缩研究

本实验对预处理猪血清IgG料液超滤浓缩进行了研究。选择螺旋卷式超滤设备,以截留液全循环错流方式对预处理IgG料液进行超滤浓缩。其最佳工艺参数为:样品pH值为7、温度50℃、超滤压力0.1MPa、浓缩倍数为10倍。浓缩后得到的样品中蛋白质含量为2.08%(W/V),IgG含量为1.42%(W/V),具有活性的IgG所占比例比超滤前略有下降,从91.3%降低到87.6%。

多聚磷酸盐在猪血清IgG分离纯化中的应用

本实验对多聚磷酸盐分离纯化猪血清IgG进行了研究,其最佳工艺参数为:多聚磷酸盐浓度0.1%(W/V),pH值3.9,反应温度45℃;所得IgG的回收率与纯度分别为60.9%和64.5%,活性保留率为87.3%。多聚磷酸盐分离纯化猪血清IgG技术适于食品用IgG的工业化生产。

AOT-异辛烷反胶束萃取技术分离牛初乳IgG的研究

在一个琥珀酸二(2-乙基己基)酯磺酸钠(AOT)-异辛烷反胶束体系中,研究了水相pH值、离子强度和有机相表面活性剂AOT浓度等因素对牛初乳乳清蛋白中IgG分离效果的影响。结果表明,在以下两组优化条件:①pH值为7.668,[Na+]浓度为0.270mol/L,[AOT]浓度为0.088mol/L;②pH值为6.524,[Na+]浓度为0.205mol/L,[AOT]浓度为0.175mol/L,水相IgG的残留率或纯度分别达到最大值,分别为90.23%和98.35%。RID分析表明,反胶束萃取过程对原牛初乳乳清IgG的免疫反应活性基本无影响。

两步法提纯猪血清IgG得率分析

采用改进的饱和硫酸铵盐析和DEAE-52纤维素层析两步法提纯猪血清IgG,并分析了IgG得率低的可能原因。利用B radford蛋白浓度测定法、SDS-PAGE测得盐析粗提蛋白得率为12.96mg/mL血清,纯度为61.4%;DEAE层析第一峰蛋白纯度达95.7%,得率为3.9mg/mL血清。结果表明两步法能获得免疫实验要求电泳纯IgG,也发现明显分开的两个层析峰含有相同分子量成分IgG,这是纯化得率低的主因。

串联阴阳离子交换色谱分离牛初乳中乳铁蛋白与IgG

脱脂牛初乳用浓度为6 mol/L的盐酸调节其pH至4.0,以5 000 r/m in离心分离20 m in除去酪蛋白制得乳清,缓慢滴加浓度为1 mol/L的氢氧化钠回调pH至6.8;处理后的乳清经截留相对分子质量为50 000的组分并超滤稀释后,再经过阴阳离子交换串联色谱,乳铁蛋白(Lf)吸附于CM Sepharose Fast F low,免疫球蛋白G(Immunoglobu lin G,IgG)吸附于DEAE Sepharose Fast F low;阳离子交换柱用c(NaC l)=0.27 mol/L、0.85 mol/L的水溶液阶跃洗脱,得到色谱纯度为96.6%的Lf产品,阴离子交换柱用c(NaC l)=17 mmol/L、51 mmol/L的水溶液阶跃洗脱,得到色谱纯度为95%的IgG产品。

检测人血清中肺炎球菌10A型荚膜多糖IgG抗体的包被抗原适用性研究

目的 确定用于23价肺炎多糖疫苗免疫后临床血清样本检测的包被用10A型肺炎球菌荚膜多糖(Pn10A)。方法 根据WHO推荐的检测人血清中肺炎球菌荚膜多糖IgG抗体含量的ELISA(PnPSELISA),包被不同来源(ATCC、A公司、B公司、5个公司混合)的10A多糖[Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)、Pn10A(mix)],检测38份血清中Pn10AIgG抗体的几何平均浓度(GMC)和相同样本免疫前、后的阳转率(免疫后/免疫前≥2为阳转),确定用于临床血清检测的包被Pn10A。结果 用Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)包被检测38份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9);Pn10A(B)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异有统计学意义(P<0.05),数据一致性差(r<0.8);再以Pn10A(A)、Pn10A(ATCC)、Pn10A(mix)包被检测另46份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9),免疫前、后GMC值相近,阳转率相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)均可以作为包被多糖用于检测人血清中肺炎球菌Pn10AIgG抗体;但从长久使用相同抗原检测大批量临床样本的需求考虑,Pn10A(mix)更具有足量、经济的优势。

高静水压处理对牛初乳中IgG的影响

采取不同的高静水压条件(处理压强、施压温度、保压时间)处理产犊后48 h内的牛初乳,研究高静水压处理牛初乳对免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)活性的影响。将牛初乳离心去除酪蛋白、乳脂肪等,取上清液进行高静水压处理,采用高效液相色谱法和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(sodium dodecyl sulfa tepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对处理后的样品进行检测。结果表明:高静水压处理后的样品,经高效液相色谱仪检测,其与亲和色谱柱发生特异性吸附的能力下降,IgG检出质量浓度降低;经SDS-PAGE检测和凝胶电泳成像仪扫描处理,不同处理条件下IgG的轻链和重链的质量变化不显著。因此,当牛初乳在200 MPa、30 ℃和20 min的高静水压处理条件下,IgG的活性最好,检出质量浓度为16.843 9 mg/mL。

牛初乳中IgG抗原决定簇以及蛋白质G结合部位热变性的对比

对比研究热处理(69～81℃)过程中牛初乳IgG分子抗原决定簇部位及其蛋白质G结合部位的变性动力学。利用单向琼脂扩散法(RID)监测IgG分子的热变性状况,其抗原决定簇部位热变性可用反应级数为1.2的方程较好地描述。结果表明,在69,72,77,81℃条件下IgG变性的D值分别为5000,2000,500,270 s,Z值为9.43℃,变性活化能为270.55 kJ/mol;利用蛋白质G亲和色谱法监测IgG分子上蛋白质G结合部位的热变性状况,在反应级数n=1.2,温度在69,72,77,81℃条件下IgG变性的D值分别为14286,3333,625,313 s,Z值为7.25℃,变性活化能为316.42 kJ/mol。所以IgG分子中抗原决定簇部位较之其蛋白质G结合部位更易于受热变性,较之RID,采用蛋白质G亲合色谱法检测牛初乳制品IgG的结果将偏高。

β-乳球蛋白-IgG混合物的反胶束萃取平衡及其机理探讨

依据堆砌几何模型,选择琥珀酸二(2-乙基己基)酯磺酸钠(AOT)-异辛烷反胶束萃取体系,研究了β-乳球蛋白单一蛋白体系中以及β-乳球蛋白与免疫球蛋白G(1︰1)混合物体系中蛋白质的分布特性,并探讨了AOT-异辛烷反胶束体系分离分级乳蛋白的机理。β-乳球蛋白在单一蛋白或混合蛋白(Wβ-Lg︰WIgG为1︰1)体系中的反胶束萃取率均随着水相pH值增加(pH值为5.0￣9.0)而降低,随水相[Na+]浓度升高(0.06￣0.35mol/L)而逐渐增加,随水相起始蛋白质量浓度增加(0.75￣3.0g/L)而降低,但免疫球蛋白G可明显促进β-乳球蛋白在反胶束有机相中的增溶。在混合蛋白质体系中,β-乳球蛋白与免疫球蛋白G可分别趋于富集在有机相和水相,显示出AOT-异辛烷反胶束体系在牛初乳乳清蛋白分离方面具有应用潜力。

热力对冻干IgG免疫原性和免疫反应性的影响

冻干ＩｇＧ经８０℃２小时和１００℃３０分钟干热处理后，其抗原决定簇未见明显改变，活性抗原量与对照相同，抗－ＨＢｓ和抗人ＩｇＧ等抗体活性未受明显影响。

多发性骨髓瘤和淋巴瘤患者IgG亚类分析及其与血细胞参数的相关性

目的:探讨多发性骨髓瘤(multiple myloma,MM)和淋巴瘤(Lymphoma)患者免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)及其亚类的表达水平差异及与血细胞参数的相关性。方法:选择2019年1月-12月在四川省人民院确诊的MM患者129例和淋巴瘤患者113例,分别对总IgG和亚类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4及与外周血常规部分参数进行回顾性分析。组间比较采用独立样本t检验或非参数Mann-Whitney U检验,IgG亚类与血细胞参数的关系采用相关分析,对于双变量正态分布资料则计算Pearson相关系数。对于双变量非正态分布资料则计算Spearman相关系数。结果:多发性骨髓瘤患者IgG1和IgG2水平明显高于淋巴瘤患者(P=0.001,P=0.000),IgG3和IgG4水平明显低于淋巴瘤患者(P=0.000,P=0.000),血清总IgG在2组间没有显著差异(P=0.717);按性别进行分组后的结果显示,男性多发性骨髓瘤和淋巴瘤患者IgG4含量均明显高于女性患者,差异具有统计学意义(Z=-3.191,P=0.001);多发性骨髓瘤患者的发病年龄、M%、E%明显高于淋巴瘤患者(P=0.000,P=0.005,P=0.019),而WBC、RBC、Hb明显低于淋巴瘤患者(P=0.013,P=0.000,P=0.014)。Spearman相关分析显示,随着多发性骨髓瘤患者血清中总IgG与IgG1含量的增高,RBC、Hb有降低趋势(r=-0.254,r=-0.272,r=-0.248和r=-0.289)。随着淋巴瘤患者血清中IgG4含量的增高,患者RBC、Hb有降低的趋势(r=-0.240,r=-0.251)。结论:IgG亚类检测及与血细胞参数的相关性研究对多发性骨髓瘤和淋巴瘤的诊断及发病机理的探讨等具有重要的临床意义。

原发性胆汁性胆管炎中IgG亚型分布特征分析

目的探讨原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis,PBC)患者血清中免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)亚型的分布特征。方法选取2018年5月至2019年3月首都医科大学附属北京佑安医院收治的28例PBC患者、29例自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)患者及同期30名健康体检者。散射比浊法检测血清IgG1、IgG2、IgG3、IgG4水平;分析IgG亚型水平及IgG亚型占总IgG水平百分比的分布特征。结果IgG1、IgG1/IgG、IgG3、IgG3/IgG在3组中的分布差异均有统计学意义(P<0.05),其中AIH组以IgG1、IgG1/IgG升高为特点,PBC组以IgG3、IgG3/IgG升高为特点。PBC组的IgG3与IgM水平呈显著正相关(r=0.709,P<0.001)。PBC患者中IgG3水平正常组与IgG3升高组抗线粒体抗体(AMA)的分布差异有统计学意义(χ^(2)=6.910,P=0.030),IgG3升高组的AMA-M2显著高于IgG3正常组[662.4(418.8,794.4)RU/ml比199.5(25.0,308.9)RU/ml,Z=30.000,P=0.003]。结论PBC患者的IgG水平显著升高,且IgG抗体亚型以IgG3升高为主,IgG3升高可能与高滴度AMA和AMA-M2抗体有关。

累及颞骨的IgG4相关性疾病1例

IgG4相关性疾病（immunoglobulin G4-relateddisease,IgG4-RD）又称为IgG4相关硬化性疾病,是一种免疫介导的可累及多器官的系统性疾病。其特点主要表现为病变组织中硬化性假瘤的形成,淋巴浆细胞的弥漫性浸润,席纹样纤维化或闭塞性静脉炎。IgG4-RD可侵犯全身各部位,包括头颈部区域,但耳部受累的病例十分少见。