Pig Liver Esterase-catalyzed Hydrolysis of Three Diesters of meso-Bicyclic Dicarboxylic Acid and Three Tetraesters of Tetrahydrofuran -2,3,4,5-tetracarboxylic Acid

Three diesters of exo- syn-meso-oxabicyclo (2, 2, 1 ) -hept- 5- ene- 2, 3- dicarboxylic acid and three tetraesters of tetrahydrofuran-2, 3, 4, 5-tetracarboxylic acid were synthesized and tested with enantioselective hydrolysis catalyzed by pig liver esterase(PLE). The results of the PLEcatalyzed hydrolysis were discussed.

猪肝酯酶杂化“纳米花”的制备及其对菊酯类农药的水解性能研究

采用生物矿化策略,在磷酸盐缓冲液中制备了猪肝酯酶(Porcine liver esterase,PLE)杂化"纳米花"(Ca3(PO4)2-PLE)。利用扫描电镜、元素能谱分析及红外光谱对所制备的杂化"纳米花"进行了形貌和成分分析。对杂化"纳米花"制备过程中的参数进行优化,结果表明:在10 mmol/L磷酸盐缓冲液(p H 7. 4)中,猪肝酯酶质量浓度为0. 3 g/L,钙离子浓度为500 mmol/L,制备温度为20℃时,所制备的Ca3(PO4)2-PLE具有最高酶活,其酶活为同等酶浓度下液酶酶活的169%。将制备的Ca3(PO4)2-PLE用于4种菊酯类农药的酶解性能研究,发现相同条件下,Ca3(PO4)2-PLE的酶解率均优于液酶。此外,制备的Ca3(PO4)2-PLE用于菊酯农药酶解循环2次后仍保持70%以上的活力。

脑靶向脂质体构建及其靶分子Ac_4MAN体外结构稳定性研究

目的构建修饰的Ac_4MAN(p-羧基苯-α-D-乙酰甘露糖)脑靶向脂质体,并探讨Ac_4MAN结构稳定性。方法将Ac_4MAN与猪肝酯酶(PLE)于37℃、pH 7.4条件下孵育,于不同时间点取样;采用高效液相色谱(HPLC)和超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)联用技术对其进行分析。制备Ac_4MAN脂质体并对其进行表征,用流式细胞仪检测脑胶质瘤细胞U87摄取Ac_4MAN脂质体和Ac_4MAN脂质体加PLE的情况。结果 HPLC结果显示,孵育0～3 h,Ac_4MAN峰面积从578.4减少到37.9;孵育4～7 h,Ac_4MAN峰面积接近于0;孵育0～7 h,生成的MAN(p-氨基苯-α-D-吡喃甘露糖苷)的峰面积从0增长到363.0,表明随孵育时间延长,Ac_4MAN逐渐减少,MAN逐渐增多。结论本研究制备的Ac_4MAN脂质体粒径约为(120.3±2.0)nm,电位约为(-15.76±1.23)mV。Ac_4MAN脂质体中加入酶后,U87细胞对其摄取能力有一定的增强。

猪肝酯酶在甲醇酵母中的克隆与表达

猪肝酯酶(Pig Liver Esterase,PLE)是手性合成工业中最常用的三种生物催化剂之一,它的 生化提取物是多种同工酶(α、β和γ亚基)的混合物,而它的单一组分(γ亚基)有很高的手性拆分 活性。为获得重组PLE,从猪肝提取总RNA,经RT-PCR得到γ亚基目的基因,并利用pPIC9K质 粒构建成pPIC9K-PLE表达载体,转化到Pichia pastoris中,转化细胞株摇瓶发酵表达重组PLE达 450mg／L,活性染色证明分子量略低于天然酶。

猪肝酯酶农药敏感性及其与胆碱酯酶的对比研究

【目的】探讨猪肝酯酶(PLE)对农药的敏感性,为农药残留快速检测提供新的敏感酶源。【方法】以乙酸-1-萘酯为底物,考察PLE酶促反应的最适温度、p H及几种农药的最佳作用时间,同时比较了PLE对几种特异性酶抑制剂的敏感性;以电鳗乙酰胆碱酯酶(ACh E-ee)、马血清丁酰胆碱酯酶(BCh E-hs)为对照酶源,采用酶抑制法,绘制5种有机磷农药(敌百虫、敌敌畏、甲胺磷、辛硫磷、毒死蜱)和5种氨甲酸酯类农药(灭多威、克百威、丁硫克百威、残杀威、涕灭威)的抑制曲线,并计算相关半抑制率(IC50),比较各种酶的农药敏感性。【结果】猪肝酯酶酶活测定方法的最佳温度、时间、p H分别为35℃、15 min、7.0;农药最适作用时间为15min;猪肝酯酶对双(4-硝基苯基)磷酸酯敏感性最高,毒扁豆碱次之,盐酸多奈哌齐最低;与胆碱酯酶相比,猪肝酯酶对供试的多数有机磷农药和氨甲酸酯类农药的IC50更低,,敏感性更好。【结论】猪肝酯酶具有良好的农药敏感性,可以作为酶抑制法农药残留快速检测的候选酶源。

(2S,4E)-5-氯-2-异丙基-4-戊烯酸乙酯的简易合成

以异戊酸乙酯与(E)-1,3-二氯丙烯为原料,通过烷基化反应得到(±)-(4E)-5-氯-2-异丙基-4-戊烯酸乙酯,经猪肝酯酶催化(进行动力学拆分)得到纯阿利克仑(Aliskiren)中间体(2S,4E)-5-氯-2-异丙基-4-戊烯酸乙酯。通过回收拆分母液以88%的收率得到(2R,4E)-5-氯-2-异丙基-4-戊烯酸。该方法绿色环保,操作简洁易行,具有工业化应用前景。

猪肝酯酶在不对称合成中的应用

猪肝酯酸PLE(Pig Liver Esterase)对双酯具有特殊的不对称水解性,而且可获得高产率和高光学纯的不对称水解产物。本文简要介绍PLE作为一种有效的酶催化剂,在温和的条件下,对双酯的不对称水解反应和在不对称合成中应用的近况。