pBD-2对热应激致小鼠小肠形态结构损伤及紧密连接蛋白表达的修复作用

为了研究猪β-防御素-2(porcinβ-defensin2,pBD-2)对热应激致小鼠小肠形态结构损伤及紧密连接蛋白表达的修复作用,试验将36只1月龄昆明小鼠随机分为空白对照组、热应激组和热应激+pBD-2组,每组12只。空白对照组和热应激组每天每只小鼠按体重10μL/g以灌胃的方式给予生理盐水,热应激+pBD-2组每天每只小鼠按体重0.01μg/g以灌胃的方式给予pBD-2。灌胃后将热应激组和热应激+pBD-2组放入40℃温箱热应激处理1 h,取出后与空白对照组一起放置于室温下进行饲养。按照相同的方式共处理28 d,并于第28天处理后断颈处死。每天灌胃前观察各组的行为,记录采食量并称重,试验结束后计算各组平均日采食量和平均日增重,并对小鼠进行剖检,分别取十二指肠、空肠、回肠组织进行石蜡切片制作和H.E.染色,比较各组肠绒毛高度与隐窝深度比值和单位面积内杯状细胞数目,并采用免疫组织化学技术对紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-3和Occludin进行检测与相对表达量分析。结果表明:试验期间,空白对照组无异样行为;热应激组探索行为增加,焦虑好动;热应激+pBD-2组比热应激组安静。热应激组平均日采食量显著高于热应激+pBD-2组和空白对照组(P<0.05),而热应激+pBD-2组和空白对照组间差异不显著(P>0.05)。空白对照组和热应激+pBD-2组平均日增重显著高于热应激组(P<0.05),空白对照组和热应激+pBD-2组平均日增重差异不显著(P>0.05)。空白对照组肠道健康、无红肿,肠道内容物适中;热应激组肠道表面充血、红肿,肠道内容物较多;热应激+pBD-2组肠道无红肿现象,肠道内容物较少。热应激组十二指肠、空肠、回肠绒毛高度与隐窝深度比值均显著低于空白对照组和热应激+pBD-2组(P<0.05),空白对照组和热应激+pBD-2组间差异不显著(P>0.05)。热应激+pBD-2组十二指肠和空肠单位面积内杯状细胞数量显著高于空白对照组和热应激组(P<0.05),空白对照组显著高于热应激组(P<0.05);热应激+pBD-2组回肠单位面积内杯状细胞数量显著高于热应激组(P<0.05)且与空白对照组间差异不显著(P>0.05),热应激组与空白对照组间差异不显著(P>0.05)。空白对照组和热应激+pBD-2组十二指肠、空肠和回肠中ZO-1蛋白的相对表达量显著高于热应激组(P<0.05),空白对照组和热应激+pBD-2组间差异不显著(P>0.05)。空白对照组十二指肠和空肠中Claudin-3蛋白的相对表达量显著高于热应激组和热应激+pBD-2组(P<0.05),热应激+pBD-2组显著高于热应激组(P<0.05);各组回肠中Claudin-3蛋白的相对表达量差异不显著(P>0.05)。空白对照组十二指肠中Occludin蛋白的相对表达量显著高于热应激组,但热应激+pBD-2组与空白对照组、热应激组均差异不显著(P>0.05);空白对照组和热应激+pBD-2组空肠和回肠中Occludin蛋白的相对表达量显著高于热应激组(P<0.05),但空白对照组和热应激+pBD-2组间差异不显著(P>0.05)。说明热应激处理会影响小鼠的消化吸收功能和小肠形态结构,降低小鼠小肠中紧密连接蛋白的表达量,而pBD-2对热应激造成的上述影响具有较好的修复作用。