子宫肌瘤细胞中孕激素受体M、A/B及porin蛋白表达观察

目的观察子宫肌瘤细胞中孕激素受体M(PR-M)、孕激素受体A/B(PR-A/B)及porin蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法子宫肌瘤切除术中切取子宫肌瘤组织及瘤旁正常子宫平滑肌组织后冰上尽快送实验室,原代培养子宫肌瘤细胞和正常子宫平滑肌细胞并鉴定。取第3代子宫肌瘤细胞(实验组)和正常平滑肌细胞(对照组),采用Western blotting法检测细胞中的PR-M、PR-A、PR-B、porin蛋白,分析PR-M、PR-A、PR-B蛋白与porin蛋白表达的相关性。结果实验组细胞中PR-M、PR-A、PR-B、porin蛋白相对表达量分别为0.130±0.012、0.432±0.052、0.456±0.045、0.525±0.082,对照组分别为0.086±0.015、0.223±0.036、0.269±0.026、0.202±0.034,实验组细胞中PR-M、PR-A、PR-B蛋白和porin蛋白相对表达量均高于对照组(P均<0.01)。实验组中PRM蛋白与porin蛋白相对表达量呈正相关关系(r=0.464,P<0.05)。结论子宫肌瘤细胞中PR-M、PR-A、PR-B、porin蛋白表达升高,PR-M、PR-A、PR-B、porin蛋白表达异常可能与子宫肌瘤的发病有关,且PR-M蛋白与porin蛋白可能在子宫肌瘤发病中起协同作用。

鼠伤寒沙门氏菌porin蛋白免疫原性的研究

用从鼠伤寒沙门氏菌（STM）中提取的微孔蛋白porin免疫BALB／c小鼠，不仅能产生高效价的抗体，还能出现典型的迟发型变态反应（DTH）和白细胞介素－2（IL－2）。以500LD50鼠伤寒沙门氏菌攻击，其保护率为70％，提示STM－porin具有较强的免疫原性。

淋病奈瑟菌外膜蛋白Porin B通过抑制CD4^(+)T细胞增殖调控机体免疫应答的分析

目的:探究淋病奈瑟菌(NG)外膜蛋白Porin B能否通过抑制CD4^(+)T细胞增殖来调控机体免疫应答。方法:从GenBank中获取NG菌株的Porin B基因的DNA序列,以NG菌株FA1090的DNA为模板,扩增目Porin B基因,并采用1.5%琼脂糖凝胶电泳对Porin B基因进行检测。将得到的PCR产物用Bam HⅠ和Eco RⅠ双酶切后克隆到酶切的载体pET30a中得到重组质pET30a-Porin B,并采用1.5%琼脂糖凝胶电泳对pET30a-Porin B进行检测。从C57BL/6小鼠的脾脏和淋巴结中分离CD4^(+)T细胞,分为对照组、低剂量pET30a-Porin B(LPB)组、中剂量pET30a-PorinB(MPB)组和高剂量PET30a-PorinB(HPB)组,对照组不做任何处理,LPB组、MPB组和HPB组分别与低、中、高剂量的pET30a-Porin B共培养。采用流式细胞术检测各组CD4^(+)T细胞增殖及凋亡情况并进行比较分析。结果:将PCR扩增产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳测定,在1.0 kb处得到一条清晰的条带,表明扩增出了正确的Porin B基因;将pET30a-Porin B进行1.5%琼脂糖凝胶电泳测定,出现1.0 kb的目的片段和5.4 kb的载体片段,说明重组质粒pET30a-Porin B构建成功。与对照组比较,LPB组、MPB组和HPB组的CD4^(+)T细胞增殖指数均显著下降,且随着重组质粒pET30a-Porin B的剂量增加,CD4^(+)T细胞增殖指数下降显著;与对照组比较,LPB组、MPB组和HPB组的CD4^(+)T细胞凋亡比例均显著增加,且随着重组质粒pET30a-Porin B的剂量增加,CD4^(+)T细胞凋亡比例增加更显著。结论:Porin B能够抑制CD4^(+)T细胞的增殖并促进其凋亡,且呈剂量依赖性。这表明Porin B能够通过抑制CD4^(+)T细胞增殖来调控机体免疫应答。后期还需大量研究及临床试验来证明Porin B的临床效果,为临床NG疫苗的研究提供基础临床数据。

鸭疫里默氏杆菌Porin蛋白的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立与应用

旨在建立一种新型可适用于鸭疫里默氏杆菌(RA)病抗体检测的间接ELISA方法。以血清2型RA贵州分离株为研究对象,将其微孔蛋白Proin编码的基因克隆至pET-32a载体,构建重组表达质粒pET-32a-porin,在E.coli BL21(DE3)中使用IPTG诱导后表达。以纯化后的Porin蛋白作为包被抗原,通过一系列条件的优化建立一种检测RA抗体的间接ELISA方法,对其性能进行综合评价。结果显示,该方法具有较好的敏感性、重复性及特异性,阳性血清经1∶6 400稀释后检测结果仍为阳性,批内变异系数(CV)在1.27%~4.90%之间,批间CV在2.59%~5.43%之间,该方法可特异性地检测出抗RA抗体,与禽流感病毒(AIV)H5亚型、AIV H7亚型、新城疫病毒(NDV)、鸭圆环病毒(DuCV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)及E.coli阳性血清均无交叉反应,与商品化ELISA抗体试剂盒检测相比,两者符合率为97.26%。使用建立的ELISA方法对临床采集的801份样品血清开展抗体检测分析(626份为已免疫鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗“血清1型+血清2型”的样品血清,175份为未免疫任何鸭传染性浆膜炎疫苗的样品血清),有564份为免疫抗体阳性,检出阳性率为90.01%(564/626),有36份为感染抗体阳性,检出阳性率为20.99%(36/175)。结果表明,本研究建立了一种新型可用于RA抗体检测的间接ELISA方法,为RA的血清学流行病学调查提供了新的检测方法。

鼠伤寒沙门氏菌外膜蛋白(porin)的提纯及鉴定

采用超声破碎、TritonX－100溶解、Sephacryl超细S－300和SephadexG－150凝胶过滤提纯了鼠伤寒杆菌的外膜蛋白porin。经检测其中LPS的含量约为0．06％。经SDS—PAGE图谱分析，porin在36KDa位置处显示一条蛋白带；用免疫印迹将OMPs兔抗血清与porin结合，仅在36KDa位置显示一明显的印迹带。

淋病奈瑟球菌表面Porin B蛋白特异性及免疫保护性临床应用价值分析

目的研究淋病奈瑟球菌(NG)表面Porin B(Por B)蛋白特异性及免疫保护性在临床中的应用价值。方法登录Gen Bank获取NG世界卫生组织(WHO)标准株E株Por B-PIA基因,设计引物与合成,培养WHO标准株E株,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出Por B-PIA DNA片段,采用GST·Bind^(TM)树脂纯化Por B蛋白,对噬菌体随机12肽库进行筛选并对阳性克隆进行提取,应用DNA测序及MIXOX软件分析;将培养后的人尿道上皮细胞分别与Por B蛋白特异性结合的多肽、NG活菌进行培养,并将未加入抗体作为对照组。观察Por B蛋白的纯化表达,Western blot检测Por B蛋白与NG特异性关系,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测筛选后蛋白的特异性抗体水平,比较Por B蛋白特异性结合多肽对细胞内形成微菌落的差异。结果Ecoli-BL21中克隆表达的诱导产物经Ni+-NTA Purification System纯化后,获得纯度较高的Por B蛋白;制备出Por B蛋白相应的特异性结合多肽,蛋白出现特异性条带;间接ELISA检测筛选后蛋白的特异性抗体水平,筛选后蛋白的抗体水平在1∶200;加入Por B蛋白特异性结合多肽的组形成的微菌落显著少于对照组(P<0.05)。结论NG表面Por B蛋白发挥显著特异性和免疫保护性,但还需大量研究及临床试验来证明其临床效果并进一步分析Por B蛋白的相关机制和作用,为临床NG疫苗的研究提供依据。

淋球菌致病机制的研究进展

淋球菌是淋病的病原体,该病仅局限于人。补体旁路途径是天然免疫抗淋球菌感染的重要形式。淋球菌通过孔蛋白(Porin)分子与C4b补体蛋白和fH因子结合,从而逃避人的补体杀伤作用。唾液酸化的脂寡糖(LOS)能促进孔蛋白与fH因子结合,外源乳酸盐的利用和菌体过氧化氢酶都能使菌体抵抗人体的免疫杀伤作用。热休克蛋白Gp96、清道夫受体SREC也通过与孔蛋白结合,来增强淋球菌的入侵能力。子宫颈上皮细胞表达的补体受体3(CR3)能与fH因子特异性结合,可能是淋球菌逃避机体非专一性吞噬细胞的吞噬作用的另一途径。最近的研究提供了一些关于淋球菌致病和免疫学的新机制,这些机制可给疫苗研制和淋病防治提供新的思路。