Prdm14对C3H10T1/2细胞增殖及干性的影响

目的探讨PR结构域蛋白14(Prdm14)对C3H10T1/2细胞增殖及干性的影响。方法该实验分为空白对照组(正常C3H10T1/2细胞)、阴性对照组(感染慢病毒空载体的C3H10T1/2细胞)以及实验组(感染Prdm14慢病毒的C3H10T1/2细胞),分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(WB)检测Prdm14 mRNA及蛋白水平。采用CCK-8及细胞克隆形成实验检测C3H10T1/2细胞增殖情况;通过碱性磷酸酶(ALP)染色及活性测定,观察ALP活性情况;采用WB检测干性因子Sox2、Nanog、Oct4表达。结果与阴性对照组相比,实验组Prdm14 mRNA及蛋白水平均明显升高(P<0.05),ALP活性及细胞增殖能力增强(P<0.05),干性因子Sox2、Nanog蛋白水平均明显升高(P<0.05),Oct4蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论Prdm14可促进C3H10T1/2细胞增殖及干性因子表达。

CT、MRI影像表现联合血清PRDM14和S100P在胰腺病变性质判断及预后评估价值研究

目的探讨计算机断层摄影(CT)、磁共振成像(MRI)影像表现联合血清正性调节区锌指蛋白-14(PRDM14)和S100钙结合蛋白P(S100P)在胰腺病变性质判断及预后评估价值研究。方法选择2019年1月至2021年6月于内蒙古自治区人民医院行手术切除治疗并经病理证实的82例胰腺肿块患者,所有患者均行CT、MRI检查以及血清PRDM14、S100P检测,根据病理结果分为胰腺癌组(48例)和肿块型胰腺炎组(34例),比较两组间CT、MRI影像表现以及血清PRDM14、S100P的差异,并追踪胰腺癌患者1年内死亡情况,并分为死亡组(18例)和存活组(30例)。通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算曲线面积(AUC),分析CT、MRI影像表现联合血清PRDM14和S100P对胰腺癌的诊断价值以及预后评估价值。结果胰腺癌组病灶直径、动脉期及门脉期CT增值、ADC值、病灶存在钙化灶、假性囊肿、胆管穿透征以及右侧肾前筋膜增厚所占比例显著显著低于肿块型胰腺炎组(P<0.05);而胰腺癌组病灶呈分叶征、囊变坏死、DWI呈高信号、胆管与胰管分离征所占比例显著高于肿块型胰腺炎组(P<0.05);两组间胰腺体尾萎缩、胰管扩张、胆管扩张、双管征、胰周血管侵犯以及腹膜后淋巴结肿大所占比例差异均无统计学意义(P>0.05)。胰腺癌组患者血清PRDM14、S100P水平均显著高于肿块型胰腺炎组(P<0.05)。与CT、MRI影像表现、血清PRDM14、S100P水平单独诊断相比较,CT、MRI影像表现联合血清PRDM14、S100P水平诊断胰腺癌的AUC、敏感度、特异度最高。胰腺癌患者死亡组血清PRDM14、S100P水平显著高于存活组(P<0.05)。结论CT、MRI影像表现联合血清PRDM14、S100P水平对胰腺癌的鉴别具有更高的诊断价值,血清PRDM14、S100P水平还可有效评估胰腺癌患者预后情况,有助于进一步为胰腺癌患者的临床诊疗工作提供真实客观的诊断依据并有效评估其预后价值。

PRDM14在胰腺癌组织中的表达及对肿瘤干细胞迁移的影响

目的探讨正性调节区锌指蛋白14(PRDM14)在胰腺癌组织中的表达及对肿瘤干细胞迁移的影响。方法50只裸鼠被随机分为胰腺癌Ⅰ组、胰腺癌Ⅱ组、胰腺癌Ⅲ组、胰腺炎组和对照组,每组10只。胰腺癌Ⅰ组建立人胰腺癌细胞株SW1990原位植瘤模型,胰腺癌Ⅱ组建立PRDM14-shRNA慢病毒干扰的人胰腺癌细胞株SW1990原位植瘤模型,胰腺癌Ⅲ组建立control病毒干扰的人胰腺癌细胞株SW1990原位植瘤模型,胰腺炎组采用腹腔注射雨蛙素和脂多糖建立慢性胰腺炎模型,对照组腹腔注射生理盐水。造模完成后8周,采集小鼠胰腺,免疫组化检测胰腺组织PRDM1表达,划痕实验检测人胰腺癌细胞株SW1990(胰腺癌Ⅰ组)、PRDM14-shRNA慢病毒干扰的人胰腺癌细胞株SW1990(胰腺癌Ⅱ组)和control病毒干扰的人胰腺癌细胞株SW1990(胰腺癌Ⅲ组)的迁移能力。结果免疫组化结果显示,胰腺癌组小鼠PRDM14阳性表达率明显高于对照组(均P<0.05);胰腺癌Ⅰ组和胰腺癌Ⅲ组小鼠PRDM14阳性表达率明显高于胰腺炎组小鼠(均P<0.05),胰腺癌Ⅰ组和胰腺癌Ⅲ组PRDM14阳性表达率及PRDM14表达量均明显高于胰腺癌Ⅱ组,组间比较差异有统计学意义(均P<0.05)。划痕实验结果显示,胰腺癌Ⅰ组和胰腺癌Ⅲ组肿瘤干细胞迁移能力明显高于胰腺癌Ⅱ组。结论PRDM14在胰腺癌组织中呈高表达,可能与胰腺癌的发生、侵袭和转移存在紧密关系,有待进一步研究证实。

miR-153靶向PRDM2基因并通过JAK/STAT信号通路影响膀胱癌的侵袭和迁移

目的:研究微小RNA(miR)-153是否靶向正性调控域锌指蛋白2(PRDM2)基因并通过调控JAK/STAT信号通路影响膀胱癌细胞的侵袭和迁移。方法:运用q PCR检测miR-153在膀胱癌组织中的表达;运用免疫组化检测PRDM2在正常组织和膀胱癌组织中的表达;Western blot检测不同膀胱癌细胞株中PRDM2的表达情况;双萤光素酶报告基因系统检测miR-153对PRDM2转录活性的影响;Transwell侵袭实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4迁移能力的影响;Western blot实验检测过表达miR-153后JAK/STAT信号通路蛋白的水平。结果:和正常组织比较,PRDM2蛋白在膀胱癌中表达较高(P<0.05);miR-153的表达水平在膀胱癌组织中较低(P<0.05);双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-153可以调控PRDM2的表达水平;过表达miR-153后,膀胱癌细胞株RT4的侵袭和迁移能力明显降低,p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平下调。结论:miR-153靶向PRDM2,并通过JAK/STAT信号通路调控膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。

系统性红斑狼疮患者血液中PRDM1和CD138＋浆细胞表达的研究

目的;探讨系统性红斑狼疮(SlE)患者和正常人之间PRDM1和CD138+浆细胞的差异。方法:40例SLE患者血液标本,30例健康体检血液标本,抽取RNA、利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术研究PRDMl基因表达;收集外周血单个核细胞,利用流式细胞技术研究CDl38’浆细胞量的差异。结果:SLE患者组血液中的PRDM1表达量明显高于健康体检组(p<0.05),并且CD138+浆细胞的量也多于健康体检组。结论:SLE实验组中的PRDM1明显高于体检对照组,CD138+浆细胞的量也高于对照组,提示SLE患者中浆细胞数量的增多与PRDMl高表达相关,这为进一步了解SLE发病机制提供了一个新的方向和靶点。

内部核糖体进入位点(IRES)调控细胞血清饥饿应激条件下PRDM13的翻译

PRDM13是锌指蛋白转录抑制因子（positive regulatory domain zinc finger protein,PRDM）家族中的一员,其在细胞分化、肿瘤的发生和恶性转化中起着重要的作用。而对于PRDM13基因侧翼序列是否含有内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site,IRES）及其功能所知甚少。本研究对PRDM13 5＇端的非翻译区（5＇UTR）进行IRES结构与功能分析,探索其在细胞血清饥饿应激条件下对PRDM13翻译的影响。实验发现,在血清饥饿的条件下,肝癌细胞Bel7402/WT中PRDM13的蛋白质水平增加,但是其mRNA水平基本没有变化。将PRDM13 5＇UTR的序列插入双顺反子的报告载体（pRL-FL）中,并且将构建的载体（pRL-PRDM13-FL）转染进细胞中,结果显示,PRDM13 5＇UTR含有IRES,且发现PRDM13 5＇UTR中的105 nt（53~157）对其IRES的功能至关重要。在帽依赖的翻译（cap-dependent translation）机制被抑制时,IRES这种机制可有效维持PRDM13蛋白合成。本研究提供了在细胞压力条件下调节PRDM13蛋白合成的一种新的解释。

PRDM14在肺癌细胞系中的表达

目的检测PRDM14在肺癌细胞系中的表达及分布情况。方法采用RT-PCR技术和免疫荧光方法分别检测人支气管上皮细胞系(HBE)和6个肺癌细胞系中PRDM14mRNA和蛋白的表达。结果 RT-PCR结果显示PRDM14与GAPDH电泳条带的平均光密度比值在肺癌细胞系中显著高于HBE细胞系(P<0.001);免疫荧光结果显示PRDM14蛋白表达的平均荧光强度在肺癌细胞系中高于HBE细胞系(P<0.05),PRDM14蛋白荧光信号主要定位于细胞浆。结论 PRDM14在HBE细胞系低表达,在肺癌细胞系高表达,主要分布于细胞浆,PRDM14可能在肺癌的发生发展中发挥作用。

锌指蛋白转录抑制因子145′非翻译区内部核糖体进入位点的活性

目的 检测锌指蛋白转录抑制因子14（positive regulatory domain zinc finger protein 14,PRDM14）5忆非翻译区（5忆untranslated region,5忆UTR）内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site,IRES）的活性。方法 PCR扩增PRDM14 5忆UTR各截短序列的基因及全长基因,分别插入至双荧光素酶和红绿荧光报告基因中,构建重组质粒p RL-PRDM14 S1-FL、p RL-PRDM14 S2-FL、p RL-PRDM14 S3-FL及p G-PRDM 14-R。将各重组质粒分别转染HEK293细胞,检测PRDM14 5忆UTR IRES元件的活性、内部剪切位点和自身启动子的活性及影响IRES活性的序列。将重组质粒p RL-FL/5忆UTR分别转染HCT-8/WT、Hep-2、Bel7402/WT和NIH3T3细胞,检测各细胞中PRDM14 5忆UTR IRES元件的活性。结果 PRDM14 5忆UTR具有内部核糖体进入位点元件活性;不具有内部剪切位点和自身启动子活性;PRDM14 5忆UTR的活性激活中心位于25~60 nt,活性抑制中心位于60~95 nt;除NIH3T3细胞外,其他细胞均具有IRES活性。结论 PRDM14 5忆UTR具有典型的IRES活性,为今后深入研究PRDM14表达的调控机制奠定了基础。

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对伯基特淋巴瘤NAMALWA细胞株增殖及阳性调控区锌指蛋白1α基因表达的影响

目的探讨DNA甲基化抑制剂5．氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对伯基特淋巴瘤NAMALWA细胞株增殖及抑癌基因阳性调控区锌指蛋白10[（PRDM101）表达的影响。方法四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测5-Aza．CdR对NAMALWA细胞株增殖的影响，SYBRGreen相对定量反转录聚合酶链反应方法检测PRDM10α基因表达水平。结果5-Aza．CdR可抑制NAMALWA细胞的增殖，且表现为浓度依赖性，在终浓度为0．01、0．0625、0．1、0．125、0．25、0．5、1、2和4μmol／L时对NAMALWA细胞株的抑制率分别为21．93％、39．23％、47．69％、50．37％、53．54％、57．72％、62_31％、65．68％和67．87％，且不同药物浓度间吸光度值比较，差异有统计学意义（均P〈0．01）。同时，5-Aza—CdR能使NAMALWA细胞株中PRDM1α重新表达，0．5、1、2μmol／L加药组与对照组比较，△Cf之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DNA甲基化抑制剂5-Aza—CdR能显著抑制伯基特淋巴瘤NAMALWA细胞株增殖，可能与其诱导的PRDM1α基因的去甲基化和PRDM1α的再表达有关。

PRDM1和ZEB2在子宫内膜癌中的表达及预后评估

目的探讨正性调控域锌指蛋白1(PRDM1)和E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)在子宫内膜癌中的表达。方法选取2013年1月-2014年1月什邡市人民医院肿瘤科收治的87例行肿瘤切除术子宫内膜癌患者进行研究,收集癌组织和癌旁正常组织,采用免疫组织化学法检测两组PRDM1和ZEB2表达,分析二者表达与临床病理参数关系,二者表达相关性及对预后评估的价值。结果子宫内膜癌组织中PRDM1阳性率为63.22%,高于癌旁组织的22.98%(P<0.05);ZEB2阳性率为50.57%,高于癌旁组织的18.39%(P<0.05)。子宫内膜癌患者癌组织中PRDM1和ZEB2表达与年龄无关(P>0.05),而与癌组织分化、肌层浸润、病理分期、淋巴结转移相关(P<0.05);子宫内膜癌患者PRDM1和ZEB2表达呈正相关(r=0.343,P=0.001)。随访5年,子宫内膜癌组织中PRDM1阳性患者中位生存时间为(43.74±2.22)个月,低于阴性患者(52.33±2.42)个月(P<0.05),阳性患者预后5年存活率为38.18%,低于阴性患者的68.75%(P<0.05);ZEB2阳性患者中位生存时间为(42.25±2.25)个月,低于阴性患者(51.52±2.15)个月(P<0.05),阳性患者预后5年存活率为36.36%,低于阴性患者的65.12%(P<0.05)。结论子宫内膜癌患者组织中PRDM1和ZEB2均呈阳性表达,与临床病理参数相关,二者表达呈正相关,PRDM1和ZEB2阳性率高患者中位生存时间短,预后较差。