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PVY和PVS病毒复合侵染对马铃薯光合及营养品质的影响 被引量:2
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作者 张贵合 郭华春 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1569-1576,共8页
以2个马铃薯高代品系为实验材料,研究马铃薯病毒Y(PVY)和S(PVS)复合侵染对马铃薯叶片SPAD值、最大净光合速率、表观量子效率、气孔导度、暗呼吸速率、蒸腾速率、光补偿点、胞间CO_2浓度和饱和光强等光合参数,以及马铃薯块茎产量、干物... 以2个马铃薯高代品系为实验材料,研究马铃薯病毒Y(PVY)和S(PVS)复合侵染对马铃薯叶片SPAD值、最大净光合速率、表观量子效率、气孔导度、暗呼吸速率、蒸腾速率、光补偿点、胞间CO_2浓度和饱和光强等光合参数,以及马铃薯块茎产量、干物含量、淀粉含量、还原糖含量、粗蛋白含量等产量品质指标的影响。结果表明:(1)田间受到PVY和PVS病毒复合侵染后,马铃薯品系2010-11植株的叶片PVS病毒含量显著低于品系34-2植株,2010-11植株的叶片PVY病毒含量同样低于品系34-2植株,但差异不显著。(2)与对照相比,感病后马铃薯品系34-2和2010-11的平均单株产量分别显著降低48.54%和19.98%,淀粉含量分别降低8.06%和3.38%,但不显著;粗蛋白含量分别显著升高14.05%和29.17%;还原糖含量分别显著降低11.11%和14.29%;34-2干物量含量显著降低6.9%,2010-11干物质含量略降低0.66%。(3)两品系感病植株的光合参数SPAD值分别显著降低13.37%、20.10%;最大净光合速率分别显著降低32.48%和4.54%;其它光合参数变化没有规律性。研究发现,PVY和PVS病毒混合侵染使马铃薯植株叶片叶绿素含量显著降低,进而影响光合作用的正常进行;病毒侵染使块茎中还原糖和淀粉的积累显著受到抑制,但能够促进块茎中粗蛋白的含量显著提高。 展开更多
关键词 马铃薯 马铃薯病毒Y 马铃薯病毒s 光合特性 营养品质
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贵州省马铃薯S病毒的发生及防治 被引量:7
2
作者 黄萍 颜谦 丁映 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2009年第8期88-90,共3页
对大西洋原原种连续繁种的生产试验及其PVX、PVY、PVS、PLRV病毒的DAS-ELISA检测结果表明,在以上4种病毒中,马铃薯感染S病毒的比例最高,危害较严重,针对此现象提出了贵州省马铃薯S病毒相应的防治措施。
关键词 马铃薯 马铃薯s病毒(pvs) 防治措施 贵州
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马铃薯S病毒的RT-PCR检测 被引量:13
3
作者 吴丽萍 王蒂 +3 位作者 司怀军 王化俊 路平 贾笑英 《中国马铃薯》 2006年第4期200-203,共4页
根据马铃薯S病毒(PVS)的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物。以感染PVS的马铃薯组织和健康的组织为材料,对提取植物总RNA的两种方法进行了比较,并对总RNA的提取方法进行改进,获得了纯度较高,完整性较好的总RNA。以此为模板,... 根据马铃薯S病毒(PVS)的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物。以感染PVS的马铃薯组织和健康的组织为材料,对提取植物总RNA的两种方法进行了比较,并对总RNA的提取方法进行改进,获得了纯度较高,完整性较好的总RNA。以此为模板,进行cDNA合成及PCR扩增,从感病组织扩增得到一段长度约642bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而健康组织无此扩增产物。从而建立了检测PVS快速灵敏简便的新方法,在基因水平上为PVS的检测提供了新手段。 展开更多
关键词 马铃薯s病毒 反转录-聚合酶链式反应 病毒检测
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马铃薯S病毒外壳蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:7
4
作者 李广存 杨煜 +2 位作者 王秀丽 杨元军 毕玉平 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期517-519,共3页
以田间采集的马铃薯病叶中提取的马铃薯病毒S(PVS)总RNA为模板,通过RT-PCR获取长度为890 bp的PVS-cp的cDNA,克隆至pGEM-T载体上。酶切回收该基因片段,并构建了该基因的原核表达质粒pBV-pvs。SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析表明:PVS... 以田间采集的马铃薯病叶中提取的马铃薯病毒S(PVS)总RNA为模板,通过RT-PCR获取长度为890 bp的PVS-cp的cDNA,克隆至pGEM-T载体上。酶切回收该基因片段,并构建了该基因的原核表达质粒pBV-pvs。SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析表明:PVS-cp基因在大肠杆菌JM109中可特异地高效表达分子量约33kD的蛋白,且表达蛋白具有良好的抗原活性。利用该表达产物免疫动物家兔,获得的抗血清可用于大田马铃薯S病毒的快速检测。 展开更多
关键词 马铃薯 马铃薯s病毒 外壳蛋白基因 RT-PCR 序列分析 Westem印迹 抗血清制备
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河北省马铃薯S病毒株系的分子鉴定研究 被引量:7
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作者 周巧梅 谢晓亮 +3 位作者 温春秀 马恢 尹江 吴志明 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第3期39-42,共4页
对张家口分离的马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS-Hebei)的CP基因进行了克隆和序列分析。以提纯的马铃薯植物总RNA为模板,应用RT-PCR技术扩增目的基因,PCR扩增产物克隆到质粒pMD18-T上,并进行了序列分析。结果表明,克隆的cDNA片段由88... 对张家口分离的马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS-Hebei)的CP基因进行了克隆和序列分析。以提纯的马铃薯植物总RNA为模板,应用RT-PCR技术扩增目的基因,PCR扩增产物克隆到质粒pMD18-T上,并进行了序列分析。结果表明,克隆的cDNA片段由885个核苷酸组成,编码294个氨基酸组成的33 kD蛋白,与PVS外壳蛋白的大小一致,与国际基因库登记的几个株系相比,结果表明,PVS-Hebei与它们之间的核苷酸序列同源性为82.4%-95.6%,氨基酸序列的同源性为93.9%-98.0%,进化树分析表明,PVS明显存在2个组(组Ⅰ和组Ⅱ),PVS-Hebei归类为Ⅰ组,与来自组Ⅰ的欧洲普通株系(PVS-Uk)的亲缘性要比来自组Ⅱ北美的Andean株系(PVS-A)株系的亲缘性要近。 展开更多
关键词 马铃薯s病毒 外壳蛋白基因(CP) 序列分析 株系鉴定
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马铃薯S病毒的分子鉴定与检测 被引量:4
6
作者 郎秋蕾 陈集双 +1 位作者 傅天珍 杜志游 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期217-220,共4页
An isolate of PVS,HZ00P1,was obtained from nature infected Solanum tuberosum from Hangzhou,Zhejiang province.It was primarily identified by DAS-ELISA and host reaction tests.3’ end partial sequence of the virus isola... An isolate of PVS,HZ00P1,was obtained from nature infected Solanum tuberosum from Hangzhou,Zhejiang province.It was primarily identified by DAS-ELISA and host reaction tests.3’ end partial sequence of the virus isolate was cloned.Nucleic acid sequence of the cp gene and deduced cp amino acid sequence alignments were compared with 16 other isolates registered in GenBank.The results showed that the 17 PVS isolates were divided into two groups.Among them,two Andean isolates were classified to groupⅡ,HZ00P1 and the other 14 isolates were assigned to groupⅠ.Compared with other PVS isolates in group Ⅰ,PVS HZ00P1 had 93.1%-98.1% and 95.9%-99.3% homologies of nucleotide sequence and deduced amino acid sequence respectively,whereas its similarities to the groupⅡwere 81.4%-81.7% and 93.5%-93.9%.A survey of PVS occurrence in Zhejiang province was achieved by RNA spot hybridization(RSH).Among the 30 samples collected from different areas of the province,26.7% were found to have the infection of PVS.It is concluded that PVS has become a common virus in Zhejiang province. 展开更多
关键词 马铃薯s病毒 分子鉴定 检测 株系分化 pvs 潜隐病毒 麝香石竹 蚜虫传播
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马铃薯S病毒的基因组结构与株系分化研究进展 被引量:3
7
作者 吴兴泉 裴杨 陈士华 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第1期9-12,共4页
马铃薯S病毒(potato virus S,PVS)具有明显的株系分化现象,依据病毒是否可系统侵染昆诺藜及基因序列特征可将PVS分为PVSO株系、PVSA株系、PVSO-CS株系和PVSA-CL株系。对PVS的基因组结构、株系种类、分子特征及鉴定方法等进行了综述,以... 马铃薯S病毒(potato virus S,PVS)具有明显的株系分化现象,依据病毒是否可系统侵染昆诺藜及基因序列特征可将PVS分为PVSO株系、PVSA株系、PVSO-CS株系和PVSA-CL株系。对PVS的基因组结构、株系种类、分子特征及鉴定方法等进行了综述,以期为我国PVS株系分化研究提供参考。 展开更多
关键词 马铃薯s病毒 株系 分子特征 鉴定方法
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同时快速检测马铃薯X病毒、Y病毒和S病毒试纸条的研制 被引量:1
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作者 张微 李志新 +4 位作者 赵雪 张金鹏 付春江 刘卫平 于倩倩 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期211-217,共7页
为实现在马铃薯种薯生产田现场同时快速检测马铃薯X病毒(PVX)、Y病毒(PVY)和S病毒(PVS),采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,利用抗体与胶体金相结合的特性制备金原子与PVX、PVY和PVS抗体结合物(简称金标抗体),通过三维划膜喷金仪将金... 为实现在马铃薯种薯生产田现场同时快速检测马铃薯X病毒(PVX)、Y病毒(PVY)和S病毒(PVS),采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,利用抗体与胶体金相结合的特性制备金原子与PVX、PVY和PVS抗体结合物(简称金标抗体),通过三维划膜喷金仪将金标抗体喷射于玻璃纤维上作为金标垫,将PVX抗体、PVY抗体和PVS抗体分别划线于硝酸纤维素膜作为检测线,将羊抗兔抗体划线于硝酸纤维素膜作为质控线,进行三重胶体金试纸条的制备。结果表明,研制的三重试纸条能够在5 min内同时检出PVX、PVY和PVS 3种病毒。PVX病汁液检测稀释限度可达10^(4)倍(W/V),PVY病汁液检测稀释限度可达2×10^(3)倍(W/V),PVS病汁液检测稀释限度可达10^(3)倍(W/V),即对PVX检测更灵敏。利用研制的三重检测试纸条检测危害马铃薯的其他3种常见病毒,未出现交叉反应。对田间采集的马铃薯叶片进行检测,发现利用试纸条与酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测的结果完全一致。三重检测试纸条具有操作简便,反应快捷的特点,特别适用于田间及口岸一线的检测。 展开更多
关键词 马铃薯X病毒 马铃薯Y病毒 马铃薯s病毒 三重检测试纸条
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马铃薯S病毒胶体金免疫层析试纸条的研制 被引量:2
9
作者 张微 李志新 +1 位作者 付春江 刘卫平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期184-188,共5页
为了研制便于马铃薯(Solanum tuberosum L.)种薯生产田现场快速检测马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)的胶体金免疫层析试纸条。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,在波长524 nm处有最大吸收值,金颗粒大小20-30 nm。将PVS的羊源多克隆抗体... 为了研制便于马铃薯(Solanum tuberosum L.)种薯生产田现场快速检测马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)的胶体金免疫层析试纸条。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,在波长524 nm处有最大吸收值,金颗粒大小20-30 nm。将PVS的羊源多克隆抗体与胶体金进行标记,喷射于玻璃纤维上作为金标垫。将PVS抗体和兔抗羊抗体划线于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,制备胶体金试纸条。试纸条检测结果在2 min之内通过肉眼即可判断。当带PVS样本汁液稀释104倍(W/V)时,仍可检测出。用其他5种常见病毒阳性样品进行检测,未出现交叉反应。田间采集的马铃薯叶片用试纸条检测和酶联免疫检测结果相吻合。本试纸条在密封、干燥、低温的条件下保存,有效期可达180 d。使用方便,操作简单,检测快捷,能够现场检测PVS,无需特殊设备,适用性广,实用性强。 展开更多
关键词 马铃薯s病毒 胶体金免疫层析法 快速检测 试纸条
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马铃薯S病毒CP基因原核表达载体的构建 被引量:2
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作者 乔宁 郭宝太 +3 位作者 王晶珊 薛仁镐 李汉燕 王卉 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 2007年第3期159-161,共3页
以质粒pGEM-pvs为模板,经PCR扩增得到了长约890bp的PVS-CP基因条带。回收特异性DNA带并与T表达载体pBAD/Thio-TOPO连接,连接物转化受体菌获得了Amp抗性菌落。经PstⅠ、SphⅠ酶切鉴定,筛选到了PVS-CP基因正向插入载体的阳性克隆。DNA测... 以质粒pGEM-pvs为模板,经PCR扩增得到了长约890bp的PVS-CP基因条带。回收特异性DNA带并与T表达载体pBAD/Thio-TOPO连接,连接物转化受体菌获得了Amp抗性菌落。经PstⅠ、SphⅠ酶切鉴定,筛选到了PVS-CP基因正向插入载体的阳性克隆。DNA测序结果表明PVS-CP基因插入方向与读码正确,成功构建了PVS-CP基因的原核表达载体。经阿拉伯糖诱导获得了预期的49kDa融合蛋白,PVS-CP基因在受体菌中表达正确。 展开更多
关键词 马铃薯s病毒 CP基因 原核表达载体
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植物诱抗剂AHO联合茎尖培养脱除马铃薯S病毒和马铃薯Y病毒
11
作者 张丽珍 赵立华 +4 位作者 吴阔 陈永对 苏晓霞 张仲凯 董家红 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期239-245,250,共8页
研究了植物诱抗剂3-丙酮基-3-羟基羟吲哚(3-acetonyl-3-hydroxyoxindole,AHO)联合茎尖培养从试管苗中脱除马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯Y病毒(PVY)的方法和效率。取PVS侵染的‘定薯3号’和‘定薯4号’以及PVY侵染的‘靖薯3号’和‘靖薯4号... 研究了植物诱抗剂3-丙酮基-3-羟基羟吲哚(3-acetonyl-3-hydroxyoxindole,AHO)联合茎尖培养从试管苗中脱除马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯Y病毒(PVY)的方法和效率。取PVS侵染的‘定薯3号’和‘定薯4号’以及PVY侵染的‘靖薯3号’和‘靖薯4号’的壮芽,茎尖剥离后培养至4~5个叶片,用100 mg/L植物诱抗剂AHO水剂喷施试管苗,每隔2 d喷施一次,共3次,末次喷施2 d后取茎尖剥离培养,获得再生试管苗。用电子显微镜负染色、ELISA、荧光定量RT-PCR检测再生试管苗的带病毒情况。结果显示,AHO对4个品种的马铃薯试管苗生长无影响,用AHO处理后再茎尖剥离培养,脱毒率均高于未处理的对照;检测结果还显示AHO处理的马铃薯再生苗的带毒量也低于未处理的对照,且随处理次数增加带毒量下降。研究结果表明,利用植物诱抗剂AHO联合茎尖剥离培养方法可以提高脱除PVS、PVY的效率,获得无病毒核心苗。 展开更多
关键词 3-丙酮基-3-羟基羟吲哚 茎尖培养 马铃薯s病毒 马铃薯Y病毒 病毒脱除
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马铃薯S病毒RT-qPCR通用检测体系的建立与应用 被引量:2
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作者 程胜群 吕文河 +8 位作者 高艳玲 白艳菊 范国权 张威 张抒 邱彩玲 申宇 董学志 白雅梅 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第6期187-194,共8页
为实现准确和快速鉴定PVS及其株系,明确PVS在马铃薯叶片、叶柄、茎、根和休眠块茎中含量以筛选适合的检测部位,设计PVS通用简并引物,建立实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术体系,分析熔解曲线鉴定PVS^(O)和PVS^(A)株系。以马铃薯X病毒(PVX)... 为实现准确和快速鉴定PVS及其株系,明确PVS在马铃薯叶片、叶柄、茎、根和休眠块茎中含量以筛选适合的检测部位,设计PVS通用简并引物,建立实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术体系,分析熔解曲线鉴定PVS^(O)和PVS^(A)株系。以马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯M病毒(PVM)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)阳性样品为对照检测其特异性。应用PVS^(O)和PVS^(A)重组质粒分别建立标准曲线,检测接种PVS^(O)和PVS^(A)马铃薯品种尤金和冀张薯12号的5个部位PVS含量。另外,应用该体系检测来源于11个省(市、自治区)的90个PVS阳性样品验证其实用性。PVS^(O)和PVS^(A)扩增后熔解曲线分别在85.77~86.00℃和87.78~87.91℃出现特异峰,PVS阴性样品及PVX、PVY、PVM、PVA和PLRV阳性样品的熔解曲线均无上述特异峰。PVS^(O)和PVS^(A)的标准曲线重组质粒浓度分别在1.09×105~1.09×10^(9)拷贝/μL和1.26×10^(5)~1.26×10^(9)拷贝/μL时,荧光信号基线的循环数平均值(Cycle threshold,Ct值)与PVS病毒粒子拷贝数对数之间具有良好的线性关系(决定系数R2=0.9942和0.9912)。尤金和冀张薯12号5个部位PVS^(O)和PVS^(A)拷贝数均大于107数量级,均可用于检测,以PVS^(O)在叶柄中含量最高。11个省(市、自治区)的90个PVS阳性样品均可检测到。本研究建立的PVS RT-qPCR检测体系快速、准确、特异,并可依据样品熔解曲线鉴定PVS^(O)和PVS^(A)株系。叶片、叶柄、茎、根和休眠块茎等5个部位组织均可用于检测,实用性强,可为生产脱毒种薯提供技术支持。 展开更多
关键词 马铃薯s病毒 株系 RT-QPCR 检测 种薯
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马铃薯S病毒RT-PCR检测技术的研究 被引量:7
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作者 程群 朱云芬 +2 位作者 沈艳芬 王尔惠 马作江 《氨基酸和生物资源》 CAS 2010年第4期8-11,共4页
从感染PVS病毒的马铃薯病叶组织中提取出病毒的RNA,进行反转录cDNA的合成,用特异性引物进行PCR扩增,得到一条长度约为199 bp的特异性PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致。在基因水平上为PVS的检测提供了一种快速、灵敏、简... 从感染PVS病毒的马铃薯病叶组织中提取出病毒的RNA,进行反转录cDNA的合成,用特异性引物进行PCR扩增,得到一条长度约为199 bp的特异性PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致。在基因水平上为PVS的检测提供了一种快速、灵敏、简便的新方法,为PVS的防治提供了有效手段。 展开更多
关键词 马铃薯s病毒 RT-PCR 病毒检测
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纯化马铃薯S病毒原核表达重组CP的简便方法
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作者 辛佳 李汉燕 +2 位作者 赵春梅 王晶珊 郭宝太 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 2014年第3期213-216,共4页
用PVS-CP基因的原核表达载体pBAD-PVS转化受体菌TOP10获得了重组菌TOP10(pBAD-PVS),经阿拉伯糖诱导该重组菌表达出了46kDa的特异性融合蛋白,在Western blotting图谱上该蛋白与PVS特异性抗体(IgG)反应,呈现一条阳性杂交带,表明46kDa蛋白... 用PVS-CP基因的原核表达载体pBAD-PVS转化受体菌TOP10获得了重组菌TOP10(pBAD-PVS),经阿拉伯糖诱导该重组菌表达出了46kDa的特异性融合蛋白,在Western blotting图谱上该蛋白与PVS特异性抗体(IgG)反应,呈现一条阳性杂交带,表明46kDa蛋白带是PVS-CP基因正确表达的产物。从重组菌中提取包涵体,包涵体经过4mol/L尿素洗涤后用超纯水4℃过夜溶解,所获溶液即为高纯度PVS重组CP水溶液,也就是说本研究建立了一种获得高纯度重组CP的非常简便的方法。 展开更多
关键词 马铃薯 s病毒 CP基因 原核表达 水溶性重组CP
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马铃薯卷叶病毒与S病毒重组双CP多克隆抗体的制备
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作者 吉祥 宋志成 +3 位作者 韦晓玲 杨煜 隋炯明 郭宝太 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2022年第4期212-219,共8页
为了制备出马铃薯卷叶病毒(PLRV)与S病毒(PVS)重组双CP多克隆抗体并用于PLRV与PVS这2种病毒的间接与DAS-ELISA检测,构建了PLRV与PVS融合双CP基因的原核表达载体pET22b-LRCP/SCP,用超声破碎法代替溶菌酶法裂解重组菌BL21(pET22b-LRCP/SCP... 为了制备出马铃薯卷叶病毒(PLRV)与S病毒(PVS)重组双CP多克隆抗体并用于PLRV与PVS这2种病毒的间接与DAS-ELISA检测,构建了PLRV与PVS融合双CP基因的原核表达载体pET22b-LRCP/SCP,用超声破碎法代替溶菌酶法裂解重组菌BL21(pET22b-LRCP/SCP)并提取菌体蛋白,用镍离子亲和层析纯化获得了分子质量为51.2 ku的高纯度的重组双CP。用该重组双CP作抗原免疫家兔获得了高效价(1∶128 k)抗血清。纯化的重组双CP多克隆抗体与PLRV或PVS阳性标准物特异性结合,与另外4种马铃薯主要病毒(PVX、PVY、PVA与PVM)无交叉反应。间接ELISA反应中,稀释度为1∶3200的重组双CP多克隆抗体与PLRV或PVS阳性物都呈现阳性反应;在DAS-ELISA反应中,稀释度均为1∶100的重组双CP多克隆抗体及其碱性磷酸酶标记物与PLRV或PVS的阳性标准物也分别呈现阳性反应。结果表明,制备的重组双CP抗体既可用于PLRV与PVS这2种病毒的间接ELISA检测,也可用于DAS-ELISA检测。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒 s病毒 重组双CP 多克隆抗体 间接ELIsA DAs-ELIsA
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马铃薯S病毒PVS^O株系RT-LAMP检测方法的建立及应用 被引量:6
16
作者 李华伟 许泳清 +9 位作者 罗文彬 纪荣昌 刘中华 许国春 张鸿 李国良 林赵淼 邱永祥 邱思鑫 汤浩 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1613-1620,共8页
为建立一种马铃薯S病毒普通株系PVS^O快速、灵敏的RT-LAMP可视化检测方法。根据马铃薯S病毒普通株系的CP核苷酸序列设计4条引物,以感染PVS的马铃薯叶片总RNA为模板,采用一步法RT-LAMP,在62℃下反应60 min,扩增产物利用琼脂糖电泳分析和... 为建立一种马铃薯S病毒普通株系PVS^O快速、灵敏的RT-LAMP可视化检测方法。根据马铃薯S病毒普通株系的CP核苷酸序列设计4条引物,以感染PVS的马铃薯叶片总RNA为模板,采用一步法RT-LAMP,在62℃下反应60 min,扩增产物利用琼脂糖电泳分析和钙黄绿素染料显色判断结果,同时对其特异性和灵敏性进行测定。结果表明,建立的RT-LAMP方法可特异地对PVS^O进行检测,检测灵敏度为RT-PCR的100倍。对33份马铃薯样品检测表明,RT-LAMP与RT-PCR方法检测结果基本一致。因此建立的PVS^O的RT-LAMP可视化检测方法简便,特异性强,灵敏度高,适合PVS^O的快速检测。 展开更多
关键词 马铃薯 马铃薯s病毒 环介导等温扩增 钙黄绿素
原文传递
3种检测方法在脱毒马铃薯种薯病毒检测中的应用及检测效果比较 被引量:4
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作者 张丽 聂峰杰 +5 位作者 张国辉 巩檑 石磊 陈虞超 甘晓燕 宋玉霞 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期119-124,共6页
为进一步明确适用于脱毒马铃薯种薯的病毒检测方法,为脱毒马铃薯生产提供更为有效和准确的病毒检测技术指导。应用反转录聚合酶联式反应(RT-PCR)、双抗体夹心-酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)以及胶体金免疫层析技术(GICA)3种方法,对脱毒马... 为进一步明确适用于脱毒马铃薯种薯的病毒检测方法,为脱毒马铃薯生产提供更为有效和准确的病毒检测技术指导。应用反转录聚合酶联式反应(RT-PCR)、双抗体夹心-酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)以及胶体金免疫层析技术(GICA)3种方法,对脱毒马铃薯生产中的马铃薯X病毒(PVX)、S病毒(PVS)进行检测,在不同品种及不同繁育等级的种薯中分别比较3种方法的检测效果。结果表明,RT-PCR对马铃薯原原种中的2种病毒检测效果显著优于其他2种方法;3种方法对一级种的2种病毒检测效果无显著差异。RTPCR非常适用于原原种病毒的检测;ELISA方法对原种及一级种大样本抽检更为适用,而GICA因成本高,更适宜一级种小样本的快速抽检。 展开更多
关键词 反转录聚合酶联式反应 双抗体夹心—酶联免疫吸附法 胶体金免疫层析技术 马铃薯 马铃薯X病毒 马铃薯s病毒 病毒检测
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二重RT-PCR快速检测马铃薯病毒的方法 被引量:19
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作者 袁青 殷幼平 +1 位作者 王中康 黄振霖 《植物检疫》 2005年第3期135-138,共4页
本研究采用传统的蛋白酶K法和病毒RNA简易浸提法,从马铃薯块茎、茎干、叶梗、叶片中提取马铃薯X病毒,马铃薯Y病毒,马铃薯A病毒及马铃薯卷叶病毒RNA ,并设计了4种马铃薯病毒引物,优化了二重RT PCR反应条件,可以同步扩增出上述4种病毒,扩... 本研究采用传统的蛋白酶K法和病毒RNA简易浸提法,从马铃薯块茎、茎干、叶梗、叶片中提取马铃薯X病毒,马铃薯Y病毒,马铃薯A病毒及马铃薯卷叶病毒RNA ,并设计了4种马铃薯病毒引物,优化了二重RT PCR反应条件,可以同步扩增出上述4种病毒,扩增产生的靶带分别为562bp(PVX)、480bp(PVY)、3 3 6bp(PLRV)、2 55bp(PVA)。应用病毒RNA简易制样技术和优化的二重RT PCR反应条件,可以同步快速检测田间自然感染的马铃薯病毒,此研究还可适合于检测马铃薯脱毒种薯及试管苗,对马铃薯病毒病早期监测有一定的作用。 展开更多
关键词 PCR快速检测 RT-PCR 马铃薯卷叶病毒 马铃薯X病毒 马铃薯Y病毒 马铃薯A病毒 马铃薯病毒病 反应条件 马铃薯块茎 RNA 制样技术 自然感染 脱毒种薯 浸提法 蛋白酶 试管苗 优化 同步 茎干 田间
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马铃薯不同级别脱毒种薯病毒再侵染情况及产量变化 被引量:16
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作者 黄萍 何庆才 颜谦 《贵州农业科学》 CAS 2008年第4期39-41,共3页
通过对大西洋原原种、一级原种、二级原种、一级种薯和二级种薯的生产试验及其PVX、PVY、PVS、PLRV病毒的DAS-ELISA检测,结果表明,从原原种到一级种薯的生产过程中,产量随着脱毒种薯代数的增加而升高,其中以二级原种生产一级种薯的增产... 通过对大西洋原原种、一级原种、二级原种、一级种薯和二级种薯的生产试验及其PVX、PVY、PVS、PLRV病毒的DAS-ELISA检测,结果表明,从原原种到一级种薯的生产过程中,产量随着脱毒种薯代数的增加而升高,其中以二级原种生产一级种薯的增产幅度最显著;除原原种不带以上4种病毒外,一级原种、二级原种分别带3%、13.3%的PVS病毒,一级种薯带PLRV和PVS病毒,带毒率分别是5.8%、21%,二级种薯带PVY、PVS、PLRV病毒,带毒率分别是8.9%、30%、13%。 展开更多
关键词 脱毒马铃薯 再侵染 马铃薯X病毒 马铃薯Y病毒 马铃薯s病毒 马铃薯卷叶病毒
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移栽时期对脱毒马铃薯试管苗秋繁产量的影响 被引量:2
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作者 唐虹 牛立力 +3 位作者 金月龄 樊祖立 严云刚 唐兴发 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第8期69-71,75,共4页
为脱毒马铃薯的繁育与生产提供参考,通过对早、中熟马铃薯费乌瑞它、中薯三号、黔芋6号、黑美人4个品种在黔中地区进行大棚不同时期栽插、研究其对原原种扩繁产量的影响。结果表明:黔中地区秋季繁育原原种薯栽插时期要根据品种的生育... 为脱毒马铃薯的繁育与生产提供参考,通过对早、中熟马铃薯费乌瑞它、中薯三号、黔芋6号、黑美人4个品种在黔中地区进行大棚不同时期栽插、研究其对原原种扩繁产量的影响。结果表明:黔中地区秋季繁育原原种薯栽插时期要根据品种的生育期不同而不同,以8月30日-9月10日间成活率最高,为22.8%~88.3%;4个品种不同栽插时期处理中,生育期中熟的黔芋6号在8月30日栽插产量最高,产量达967.2 kg/667m2。 展开更多
关键词 脱毒马铃薯 品种 移栽期 原原种 产量
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