P2X7R过表达的巨噬细胞MSU晶体诱导痛风炎症反应过程中IL-1β、TNF-α、NLRP3表达观察

目的观察嘌呤能受体P2X配体门控离子通道7的配体(P2X7R)过表达白血病细胞诱导分化的巨噬细胞单钠尿酸盐(MSU)晶体诱导痛风炎症反应过程中NOD样受体家族3(NLRP3)蛋白、IL-1β、TNF-α表达情况。方法取人单核细胞白血病细胞系THP-1,并随机分为过表达组、空白组、模型组、对照组;过表达组和空白组分别转染P2X7R过表达质粒、空白载体质粒,转染5 d,将过表达组、空白组、模型组THP-1细胞用100 ng/mL的PMA刺激3 h后分化为巨噬细胞,另将MSU晶体用氢氧化钠溶解配制成浓度为100μg/mL的MSU乳糜状悬液加入培养液中孵育6 h;对照组正常培养。分别采用RT-PCR法和Western blot法测算巨噬细胞P2X7R mRNA、蛋白,ELISA法检测巨噬细胞上清液IL-1β、TNF-α,Western blot法测算巨噬细胞NOD样受体家族3(NLRP3)蛋白。结果与对照组比较,过表达组、空白组、模型组P2X7R mRNA和蛋白相对表达量升高,细胞上清液IL-1β、TNF-α水平升高,细胞NLRP3蛋白相对表达量升高(P均<0.05);与模型组、空白组比较,过表达组P2X7R mRNA、蛋白相对表达量升高,细胞上清液IL-1β、TNF-α水平升高,细胞NLRP3蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。结论P2X7R过表达白血病细胞诱导分化的巨噬细胞MSU晶体诱导痛风炎症反应过程中IL-1β、TNF-α、NLRP3表达增加,IL-1β、TNF-α水平升高可能通过激活NLRP3蛋白来实现。

P2X7受体抑制剂腹腔注射对红藻氨酸诱导小鼠癫痫发作及海马损伤的影响

目的观察P2X7受体(P2X7R)抑制剂对红藻氨酸诱导小鼠癫痫发作及海马损伤的影响。方法雄性C57BL/6小鼠96只,随机分为正常组36只、模型组36只、P2X7R抑制剂组24只。P2X7R抑制剂组于造模前30 min腹腔注射P2X7R特异性抑制剂A438079,模型组、正常组在同时点注射等量生理盐水。模型组、P2X7R抑制剂组腹腔注射红藻氨酸建立癫痫模型,正常组腹腔注射等量生理盐水。采用脑电图观察小鼠癫痫发作情况,Western blotting法检测小鼠海马组织P2X7R蛋白,尼氏染色观察小鼠海马CA1区损伤情况。采用旷场实验观察正常组、模型组小鼠焦虑样行为,若模型组存在焦虑样行为,则进一步将模型组分为焦虑对照亚组及P2X7R抑制亚组,P2X7R抑制亚组每天腹腔注射A438079,焦虑对照亚组每天腹腔注射等量生理盐水,持续14 d后再次进行旷场实验。采用水迷宫实验观察小鼠认知功能,若模型组存在认知功能损害,则进一步将模型组分为认知功能对照亚组及P2X7R抑制亚组,处理方式同上,持续14 d后再次进行水迷宫实验。结果脑电图记录结果显示,正常组未出现癫痫脑电图波形;模型组出现癫痫持续状态,脑电图表现出强放电功率及高振幅;P2X7R抑制剂组出现癫痫发作,但脑电图放电功率及振幅均较模型组减轻;脑电图总功率及平均振幅模型组>P2X7R抑制剂组>正常组(P均<0.05)。模型组海马组织P2X7R蛋白表达高于正常组,P2X7R抑制剂组海马组织P2X7R蛋白表达低于模型组(P均<0.05)。尼氏染色结果显示,对照组海马CA1区结构完整,存活神经细胞数多,尼氏体较大且较多;模型组海马CA1区结构完整性被破坏,神经细胞数量少,尼氏体数量减少;P2X7R抑制剂组海马CA1区结构、神经细胞及尼氏体数量均较模型组有所改善。旷场实验结果显示,模型组进入中心区域次数及中心区域停留时间均少于正常组,焦虑对照亚组进入中心区域次数及中心区域停留时间均少于P2X7R抑制亚组(P均<0.05)。水迷宫实验结果显示,模型组、正常组穿越平台次数及目标象限停留时间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论P2X7R抑制剂可减轻红藻氨酸诱导小鼠癫痫发作的强度和频率,改善癫痫所致海马损伤,且可缓解癫痫小鼠的焦虑样行为。

阻塞性睡眠呼吸暂停患者血清P2X7R、NF-κB水平与认知功能障碍的相关性

目的 研究阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)患者血清P2X7受体(P2X7R)和核因子-κB(NF-κB)水平与认知功能障碍的相关性。方法 选择2021年10月至2022年12月期间青海省人民医院收治的126例OSA患者作为OSA组,进一步根据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分分为MoCA评分<26分的认知功能障碍组(n=68)和MoCA评分≥26分的认知功能正常组(n=58);另取同期体检的健康志愿者作为对照组(n=105)。检测血清P2X7R、NF-κB水平,采用logistic回归模型分析OSA患者认知功能障碍的影响因素,采用ROC曲线分析各指标对OSA患者认知功能障碍的诊断价值。结果 OSA组患者的血清P2X7R、NF-κB水平高于对照组,差异有统计学意义(t=17.295、7.088,P<0.05);认知功能障碍组患者的血清P2X7R、NF-κB水平高于认知功能正常组,差异有统计学意义(t=8.469、8.497,P<0.05);血清P2X7R、NF-κB水平升高是OSA患者认知功能障碍的危险因素(P<0.05);OSA患者血清P2X7R、NF-κB水平与MoCA评分呈负相关(P<0.05);血清P2X7R、NF-κB水平诊断OSA患者认知功能障碍的曲线下面积分别为0.862(95%CI:0.800~0.923,P<0.05)和0.859(95%CI:0.794~0.923)。结论 OSA患者血清P2X7R、NF-κB水平升高且与认知功能障碍相关,血清P2X7R、NF-κB对OSA患者认知功能障碍具有诊断效能。

P2X家族蛋白在肿瘤中的研究进展

肿瘤间质中存在高浓度的细胞外ATP(extracellular ATP,eATP),eATP在肿瘤发生发展中起重要作用。P2X家族蛋白作为ATP的受体,在肿瘤中的作用受到广泛关注。P2X家族蛋白共有7个,均为离子通道型嘌呤受体,其中P2X3、P2X4和P2X7等在甲状腺癌、乳腺癌等肿瘤中存在异常表达,并影响肿瘤增殖、侵袭等生物学行为。该文就P2X家族蛋白的表达、生物学功能以及在肿瘤发生、发展中的作用进行综述。

冬凌草甲素对海马CA1星形胶质细胞P2X7受体电流的影响

目的:探索冬凌草甲素是否对海马CA1星形胶质细胞P2X7受体电流有影响。方法:采用Autodock软件对冬凌草甲素与P2X7蛋白进行分子对接;采用全细胞膜片钳记录冬凌草甲素对海马CA1星形胶质细胞P2X7受体激动剂Bz-ATP激发电流的影响。结果:冬凌草甲素与P2X7蛋白的结合能为-5.86 kcal/mol,可与P2X7蛋白的Lys592残基形成氢键,与Tyr550残基形成疏水作用;Bz-ATP能激发海马CA1区星形胶质细胞的电流反应,且1000μmol/L Bz-ATP激发的电流反应较强;10μmol/L冬凌草甲素溶液孵育1 h后,海马CA1区星形胶质细胞对谷氨酸能受体激动剂NMDA和AMPA溶液的电流反应无明显变化;对Bz-ATP的电流反应降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:冬凌草甲素可与P2X7蛋白对接形成稳定的复合物,具有较好的亲和力;冬凌草甲素可抑制海马CA1星形胶质细胞P2X7受体电流。

P2X7受体在癌痛中作用的研究进展

P2X7受体是一种ATP门控离子通道,在肿瘤条件下,P2X7受体的激活触发了促炎细胞因子的释放,刺激了伤害性神经元的兴奋,从而加剧了疼痛的传递。在临床前癌疼痛模型中,具有作为癌疼痛管理的新治疗靶点的潜力。

细胞外ATP激活受体P2X7在骨质疏松症中的作用机制

骨质疏松症已逐渐成为一个重大的医疗和社会经济问题,其典型特征包括骨密度下降、骨微结构损坏以及骨折风险的增加。现有的治疗策略主要集中在症状管理上,但其并未能从根本上改变病情的发展趋势。因此,寻找并开发针对新的治疗靶点是更有效的治疗策略,已经成为当前研究的重要方向。P2X7作为一种由胞外ATP激活的离子通道,在近年的研究中已证实其在骨形成细胞和骨吸收细胞的生长、功能和存活方面发挥了关键作用,对于骨质疏松症的治疗具有巨大的潜力。因此,P2X7有望成为骨质疏松症治疗的新靶点。笔者对P2X7在骨质疏松症中的作用以及如何针对这一新靶点的治疗进行综述,旨在为开发新的骨质疏松症治疗策略提供新的思路和方向。

高脂血症大鼠脑缺血/再灌注后p38 MAPK活化及对Bax和Bcl-2表达的影响

目的检测高脂血症大鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤后大脑皮质内磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、Bax和Bcl-2表达变化,及SB203580对p-p38 MAPK、Bax和Bcl-2表达的影响,研究在高脂血症脑I/R损伤中p38 MAPK活化对Bax和Bcl-2表达的影响。方法大鼠高脂血症模型建立后,将其随机分为3组,假手术组(sham)、手术组(I/R)、SB203580处理组(SB+I/R),每组10只。线栓法建立左侧大脑中动脉栓塞I/R模型,神经行为学评分观察大鼠神经行为损伤症状,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色显示脑梗死灶,TUNEL染色观察凋亡细胞,免疫组织化学法分析p-p38 MAPK、Bax和Bcl-2相对表达水平。结果与sham组比较,I/R组大鼠脑梗死体积百分比、细胞凋亡指数和神经行为学评分均显著升高,且p-p38 MAPK、Bax表达明显增高,Bcl-2表达明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与I/R组比较,SB+I/R组大鼠脑组织损伤减轻,梗死灶明显缩小,细胞凋亡指数明显降低,p-p38 MAPK表达明显降低,Bax表达减少而Bcl-2表达增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。SB+I/R组较I/R组神经行为学评分降低,但差异无统计学意义。结论在高脂血症大鼠脑缺血再灌注损伤过程中,p38 MAPK活化可调节Bax和Bcl-2的表达。

基于嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7的资生肾气丸镇痛机制研究

目的:探索资生肾气丸对醋酸致小鼠扭体模型的镇痛作用。方法:将42只小鼠随机分为7组,分别给予相应药液灌胃,末次灌胃1 h后造模,建立醋酸致小鼠扭体模型。观察小鼠扭体次数,计算其扭体抑制率,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E 2(PGE 2)、神经生长因子(NGF)含量,采用实时PCR(RT-PCR)检测嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)mRNA、Nod样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、NIMA相关激酶7(NEK7)mRNA的表达情况。结果:与模型组比较,随着时间的增加,资生肾气丸低剂量、中剂量、高剂量均可抑制小鼠扭体反应,降低扭体次数,增加小鼠扭体抑制率,降低小鼠血清中IL-1β、PGE_(2)、NGF的含量,降低P2X7RmRNA、NLRP3mRNA、NEK7mRNA的表达以抑制疼痛反应,以高剂量效果最优(P<0.05),与吲哚美辛、痛风舒片疗效相近。结论:资生肾气丸高剂量对小鼠血清疼痛因子的降低效果显著,其机制可能与嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7信号通路有关。

miR-216a对重症急性胰腺炎腺泡损伤及P2X7-NLRP3/caspase-1 通路的影响

目的探索miR-216a对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)腺泡细胞损伤及P2X7-NLRP3/caspase-1通路的影响.方法将大鼠胰腺腺泡细胞AR42J分为Con组、SAP组、anti-miR-NC组、anti-miR-216a组、Sch+miR-NC组、Sch+miR-216a组.Con组不做任何处理,其余各组采用雨蛙肽(10 nmol/L)联合脂多糖(lipo poly saccharide,LPS)(10 mg/L)处理大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J构建SAP细胞模型,anti-miR-NC组、anti-miR-216a组、Sch+miR-NC组、Sch+miR-216a组分别转染anti-miR-NC、anti-miR-216a、miR-NC、miR-216a mimics.酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)浓度;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测各组细胞中miR-216a及P2X7、NLRP3、caspase-1 mRNA相对表达量;Western blot法检测各组细胞中P2X7、NLRP3、Caspase-1、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cellymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved cysteinyl aspartate specific protease-3,Cleaved caspase-3)蛋白表达情况.结果各组细胞中IL-6、TNF-α含量比较,Con组<anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05).各组细胞凋亡率和Bax蛋白、Cleaved caspase-3蛋白相对表达量比较,Con组<Sch+miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<anti-miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05);各组细胞Bcl-2蛋白相对表达量比较,anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组<Con组,差异有统计学意义(P<0.05).各组细胞中miR-216a和P2X7、NLRP3、Caspase-1 mRNA及其蛋白相对表达量比较,Con组<anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05).结论miR-216a可通过抑制P2X7-NLRP3/caspase-1信号通路减轻SAP腺泡细胞炎症,并诱导细胞凋亡,从而减轻SAP腺泡损伤.

芒柄花黄素调控P2X7R/NLRP3通路对高糖诱导的心肌细胞炎症反应与焦亡的影响

目的探讨芒柄花黄素(FN)调控嘌呤能2X7受体(P2X7R)/核苷酸结合寡聚化结构域受体蛋白3(NLRP3)通路对高糖诱导的心肌细胞的炎症反应与细胞焦亡的影响机制。方法将H9C2细胞分为对照组、高糖(HG)组、HG+FN低浓度(FN-L)组、HG+FN中浓度(FN-M)组、HG+FN高浓度(FN-H)组、HG+FN-H+P2X7R激活剂(ATP)组。24 h后,CCK-8检测H9C2细胞活力变化;TUNEL染色检测细胞焦亡变化;qRT-PCR检测焦亡因子白细胞介素(IL)-18、半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)、NLRP3 mRNA表达水平;ELISA检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6和IL-1β水平;Western blot检测P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达水平。结果与对照组相比,HG组细胞活力显著下降(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05);与HG组相比,HG+FN-L组、HG+FN-M组、HG+FN-H组细胞活力显著增加(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著降低(P<0.05);与HG+FN-H组相比,HG+FN-H+ATP组细胞活力显著下降(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论FN通过抑制P2X7R/NLRP3通路减轻高糖诱导的心肌细胞的炎症反应与细胞焦亡,缓解细胞损伤。

P2X7受体/NLRP3轴对痛风急性发作的调控作用机制研究

目的 探究P2X7受体/NLRP3轴在痛风急性发作小鼠模型中的调控作用机制。方法 将C57小鼠随机分为5组:对照组(注射生理盐水,8只)、模型组(构建痛风小鼠模型,8只)、C组为NLRP3抑制剂组(模型动物鞘内注射NLRP3抑制剂,8只)、D组为P2X7抑制剂组(模型动物鞘内注射P2X7抑制剂,8只)、E组为P2X7抑制剂+NLRP3激活剂组(模型动物鞘内注射P2X7抑制剂+NLRP3激活剂组,8只)。造模结束称质量后处死小鼠,取各组小鼠的静脉血和肝肾组织。使用ELISA试剂盒检测促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达情况;Western blot检测小鼠肠组织中NLRP3、IL-1β、ASC、Caspase-1、P2X7相关蛋白的表达情况。结果 与对照组比较,模型组小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α表达提高(P <0.05),NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7蛋白表达水平增加(P <0.05);与模型组比较,抑制NLRP3表达,IL-1β、IL-6、TNF-α表达降低(P <0.05);与模型组比较,抑制P2X7表达,IL-1β、IL-6、TNF-α、P2X7与NLRP3的表达降低(P <0.05);与模型组比较,抑制P2X7表达,同时过表达NLRP3,IL-1β、IL-6、TNF-α表达无统计学意义(P> 0.05);NLRP3、ASC、Caspase-1降低,P2X7表达增加(P <0.05)。结论 P2X7受体/NLRP3轴能够促进痛风急性发作小鼠模型的炎症作用,可作为药物研发的重要靶点,对疾病的治疗具有参考意义。

背根神经节嘌呤受体亚型P2X3R介导小鼠术后急—慢痛转化

目的探讨不同部位不同嘌呤受体亚型在小鼠切口术后痛转化中的作用差异。方法足底切口恢复后注射PGE_(2)构建术后痛转化模型。第一部分:C57BL/6小鼠随机分为对照(Con)组、假敏化(sHP)组、敏化(HP)组,检测机械痛阈、自发痛评分和焦虑样行为;Western blot检测患侧L 3-5背根神经节(DRG)和脊髓背角(SCDH)中P2X3R和P2X7R蛋白表达变化。第二部分:C57BL/6小鼠随机分为Con组、HP+生理盐水组、HP+P2X3R拮抗剂组或HP+P2X7R拮抗剂组,观察拮抗不同亚型嘌呤受体对小鼠机械痛阈的影响。结果与正常小鼠相比,切口痛小鼠注射PGE_(2)后机械痛阈明显下降,自发痛评分明显增加(P<0.05),未表现出焦虑样行为(P>0.05),且P2X3R蛋白在DRG中表达明显增多(P<0.05),在SCDH中未检出,而P2X7R蛋白在DRG和SCDH各组中表达均无差异(P>0.05)。拮抗P2X3R能阻断术后痛转化的产生,而拮抗P2X7R无明显影响。结论切口痛小鼠经PGE_(2)诱导可出现急慢性痛的转化,不伴发焦虑样情绪,DRG中P2X3R可能是参与术后痛转化的关键受体之一。

基于NOD样受体3/嘌呤能受体P2X7通路探讨芪蛭真武汤对盐敏感高血压肾病大鼠的机制

目的基于NOD样受体3(NLRP3)/嘌呤能受体P2X7(P2RX7)通路探讨芪蛭真武汤对盐敏感高血压肾病大鼠的机制。方法选取Dahl/SS盐敏感大鼠28只,按随机数字表法分为模型组、芪蛭真武汤高、常剂量组和阳性对照组,每组各7只,SS-13BN盐不敏对照大鼠(含有肾素基因13号染色体替换的大鼠)7只(空白对照组)。各组大鼠行HE和Masson染色和免疫组化反应。记录动物一般状态观察,肾脏指数,全自动生化分析仪检测血清肌酐、尿素氮,Western blot检测蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血压明显升高,与模型组比较,中药不同剂量治疗组血压水平降低,其中阳性对照组呈现血压下降趋势;真武汤高剂量组治疗28 d后血压水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);真武汤常剂量组治疗第14、21天后血压水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组大鼠24 h尿蛋白、尿素氮和肌酐比较,模型组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);芪蛭真武汤高、常剂量组和阳性对照组较模型组有不同程度降低,常剂量组下降,差异有统计学意义(P<0.05);模型组较对照组肾间质增宽,肾小管出现散在的空泡状,有部分蓝色胶原纤维沉积;芪蛭真武汤高、常剂量组和阳性对照组胶原纤维沉积分数较模型组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,模型组NLRP3、P2RX7、CCL2和IL-1β蛋白水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);芪蛭真武汤高、常剂量组和阳性对照的NLRP3、P2RX7、CCL2和IL-1β蛋白表达较空白对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),芪蛭真武汤常剂量组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对盐敏感高血压肾病大鼠应用芪蛭真武汤治疗,可有效改善大鼠肾组织病理损害,通过调控P2RX7/NLRP3通路降低大鼠炎症指标,改善盐敏感高血压肾病大鼠症状,以常剂量芪蛭真武汤效果最佳。

右美托咪定通过P2X7调控NLRP3/IL-1β通路减轻大鼠炎性痛

目的探讨右美托咪定(Dex)在慢性炎性痛大鼠模型中对嘌呤能P2X7及NOD样受体蛋白(NLRP)3/白细胞介素(IL)-1β通路的影响。方法将60只大鼠随机分为对照组、模型组、Dex低、高剂量组(10、20μg/kg)、Bz-ATP组(Dex 20μg/kg+P2X7激动剂Bz-ATP 15μg/kg),每组12只。左后爪足底内注射完全弗氏佐剂(CFA)诱发炎性疼痛模型,大鼠于建模前1 d、建模后即刻及建模后1、2、3 d进行腹腔注射给药,1次/d。给药结束后,行为学测试检测大鼠机械痛阈(MWT)和热痛阈(PWTL);酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑脊液中IL-1β水平;分离L4~L6背根神经节(DRG),免疫荧光法检测DRG中P2X7、NLRP3与神经元特异核蛋白(NeuN)的共表达;蛋白免疫印迹法检测DRG中P2X7、NLRP3、半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1、IL-1β蛋白表达。结果与对照组相比,模型组MWT、PWTL显著下降(P<0.05);脑脊液中IL-1β,DRG中P2X7与NeuN、NLRP3与NeuN共表达水平、P2X7、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达均显著升高(P<0.05)。与模型组相比,Dex低、高剂量组MWT、PWTL明显升高(P<0.05);脑脊液中IL-1β,DRG中P2X7与NeuN、NLRP3与NeuN共表达水平、P2X7、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达均明显降低(P<0.05),且使用Bz-ATP激活P2X7受体,可明显逆转Dex的抗炎镇痛作用。结论Dex可能通过下调P2X7,抑制NLRP3/IL-1β通路,减轻大鼠慢性炎性痛。

P2X7受体在骨科疾病中作用的研究进展

P2X7受体属于嘌呤能受体,是P2X受体家族的成员,位于细胞表面的一种三聚体配体门控阳离子通道[1]。目前已经证实在很多细胞类型表面都有表达,包括造血干细胞、间充质干细胞、白细胞、红细胞、骨细胞、皮肤细胞,甚至各种恶性肿瘤细胞。同时,P2X7受体存在很多亚型。在人体中,P2X7受体变异大约有10种蛋白剪切体变化亚型;P2X7受体从A到J;P2X7受体A是保留完整长度的受体。P2X7受体B、E、G、J缺乏C末端结构[2]。该受体的配体是ATP,介导Na^(+)、K^(+)离子内流和Ca^(2+)阳离子外流的快速通过[3]。激活的P2X7受体还可以使其在细胞表面的孔隙扩大,允许非选择性的最大900Da的有机亲水性阳离子通过;带阳性电荷的胆碱基和荧光染料,例如乙啶基[4-5]。但是,这一功能不是P2X7受体独有的作用,P2X受体家族里其他成员也有类似的功能。

过表达P2X4受体介导三叉神经痛的实验研究

目的:本课题组前期发现,P2X4受体可能通过调控脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达,进而介导三叉神经痛(trigeminal neural,TN)分子机制。为此,在TN大鼠模型中转染过表达P2X4受体,进行验证。方法:以结扎框下神经慢性损伤法建立TN大鼠模型,P2X4受体过表达质粒舌下静脉转染至TN大鼠中,以面部痛敏阈检测仪、荧光定量PCR、间接免疫荧光、Western blot和ELISA法检测大鼠三叉神经脊束核(spinal trigeminal nucleus,STN)和三叉神经节(trigeminal ganglia,TG)部位疼痛阈值,P2X4、BDNF和TrkB转录水平,P2X4和BDNF定位情况,P2X4、BDNF、TrkB蛋白表达和ERK磷酸化水平,炎性因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达。结果:过表达P2X4受体组大鼠疼痛阈值降低,STN和TG部位P2X4、BDNF受体和TrkB转录水平升高(P<0.01),STN中BDNF受体与小胶质标志物OX42共定位、TG中P2X4与胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)共定位,STN和TG部位ERK磷酸化水平升高(P<0.01),大鼠血清中IL-1β和TNF-α表达水平升高(P<0.05)。结论:过表达P2X4受体降低大鼠疼痛阈值,表明P2X4离子参与了TN疼痛通路,其机制为P2X4调控了BDNF/ERK通路,增强了ERK磷酸化和炎性因子IL-1β和TNF-α表达。

基于P2X7R/NLRP3通路探讨枳葛口服液改善大鼠酒精性肝损伤的作用机制

目的探讨枳葛口服液改善大鼠酒精性肝损伤的作用机制。方法60只大鼠随机分为正常组,模型组(白酒),枳葛口服液高、中、低剂量组(10、5、2.5 mL/kg),造模及给药12周后处死大鼠,计算肝脏指数,HE染色观察肝组织病理学改变,Western blot法检测肝组织P2X7R、NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达,免疫组织化学法检测肝组织NLRP3蛋白表达,ELISA法检测血清IL-6、IL-18、TNF-α、NF-κB水平。结果与模型组比较,枳葛口服液高剂量组大鼠肝脏指数降低(P<0.05),大鼠肝组织形态正常,基本无脂肪空泡及炎症细胞浸润,肝组织P2X7R、NLRP3、caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),血清IL-6、IL-18、TNF-α、NF-κB水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论枳葛口服液可能通过降低P2X7R/NLRP3通路相关蛋白表达,减轻大鼠炎症因子产生,从而发挥改善酒精性肝损伤的作用。

右美托咪定调控miR-150-5p/P2X7受体轴减轻脑出血大鼠小胶质细胞活化

目的:探讨右美托咪定(DEX)对脑出血(ICH)大鼠小胶质细胞(MG)活化的影响以及对miR-150-5p/P2X7受体(P2X7R)轴的调控作用。方法:将大鼠分为假手术组(n=12)、模型组(n=63),建立ICH大鼠模型,DEX低(25μg/kg)和高剂量(50μg/kg)组、DEX(50μg/kg)+NC antagomir(20nmoL/L,5μL)组以及DEX(50μg/kg)+miR-150-5p antagomir(20nmoL/L,5μL)组,每组12只。腹腔注射,每日1次,每次0.2mL,连续给药7d。给药结束后24h,进行神经功能评分;分离血清,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α、IL-1β含量;分离出血区(海马CA2区)脑组织,检测脑组织含水量,HE染色观察组织病理变化,免疫荧光观察MG形态,qRT-PCR法检测miR-150-5p、P2X7R mRNA表达,Western blot法检测离子钙接头蛋白分子-1(Iba-1)、P2X7受体(P2X7R)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与P2X7R靶向关系。结果:与模型组比较,DEX低、高剂量组脑组织病理变化逐渐减轻,红细胞与炎性细胞浸润减轻,核固缩现象减少;MG数量明显减少,胞体变小;神经功能评分、脑组织中miR-150-5p表达明显升高(P<0.05);血清中TNF-α、IL-1β含量,脑组织含水量,脑组织中P2X7R mRNA和蛋白表达以及Iba-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。与DEX高剂量组、DEX+NC antagomir组比较,DEX+miR-150-5p antagomir组可见大量红细胞和炎性细胞浸润,脑组织结构紊乱,细胞排列无序;MG数量显著增多,胞体变大;神经功能评分、脑组织中miR-150-5p表达均明显降低(P<0.05);血清中TNF-α、IL-1β含量,脑组织含水量,脑组织中P2X7R mRNA和蛋白表达以及Iba-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果表明P2X7R是miR-150-5p的下游靶基因。结论:DEX能够通过上调miR-150-5p、下调P2X7R表达抑制MG活化,在ICH中发挥保护作用。

嘌呤受体P2X配体门控离子通道7与老年高血压合并冠心病患者心肌缺血的关系

目的 分析外周血胞膜上嘌呤受体P2X配体门控离子通道7(P2X7R)水平与老年高血压合并冠心病患者心肌缺血及自主神经改变的关系。方法 前瞻性选取2020年8月至2022年8月三二〇一医院诊治的老年冠心病患者146例,根据心肌缺血情况分为心肌缺血组86例,非心肌缺血组60例。比较2组外周血P2X7R水平与心肌缺血总负荷(TIB)差异,分析P2X7R与TIB的相关性。采用ROC曲线分析P2X7R对心肌缺血的预测价值。以P2X7R预测心肌缺血的截断值分为高水平组76例,低水平组70例,比较2组心率变异性时域指标、频域指标差异。结果 心肌缺血组外周血P2X7R及TIB明显高于非心肌缺血组(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,P2X7R水平与TIB呈正相关(r=0.624,P<0.01)。ROC曲线分析显示,P2X7R预测老年高血压合并冠心病患者心肌缺血的截断值为698.94 ng/L,曲线下面积为0.800(95%CI:0.726~0.874),敏感性、特异性分别为70.9%、88.3%。P2X7R、TIB是老年高血压合并冠心病患者心肌缺血发生的危险因素(OR=2.056,95%CI:1.373~3.079,P<0.01;OR=1.276,95%CI:1.128~1.444,P<0.01)。高水平组心率变异性时域指标明显低于低水平组,心率变异性频域指标明显高于低水平组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 外周血P2X7R是老年高血压合并冠心病患者心肌缺血的影响因素,与心肌缺血严重程度相关,可反映自主神经功能损害程度。