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马立克氏病病毒pp38基因上游的一个双向启动子研究 被引量:7
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作者 丁家波 崔治中 +1 位作者 孙淑红 姜世金 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期162-166,共5页
马立克氏病病毒 (MDV)pp38基因上游是病毒基因组DNA复制原点。在其两侧均含有启动子TATA box、CAAT box等特征性的保守基元 ,推测是一个天然的双向启动子。为了在体外验证其双向启动活性 ,本研究以MD Vpp38为报告基因 ,并将其ORF插入到p... 马立克氏病病毒 (MDV)pp38基因上游是病毒基因组DNA复制原点。在其两侧均含有启动子TATA box、CAAT box等特征性的保守基元 ,推测是一个天然的双向启动子。为了在体外验证其双向启动活性 ,本研究以MD Vpp38为报告基因 ,并将其ORF插入到pUC18中 ,构建了pUC pp38质粒。将包含该启动子完整区域的 789bp序列分别以正反两个方向克隆进pUC pp38质粒中pp38报告基因的上游 ,获得的重组质粒pProfpp38和pProrpp38。将所获得的重组质粒分别转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,通过间接免疫荧光试验检测pp38基因的表达以验证该启动子的双向启动活性。结果表明 ,马立克氏病病毒复制原点区的启动子无论以何种方向插入pUC pp38质粒中 ,在转染细胞2 4h内能检测到pp38基因的表达 ,4 8h后能获得高效和持续的表达。逐渐缩小该启动子的范围 ,最终在 32 0bp时 ,仍能检测到两个方向较强的启动活性。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 pp38基因 双向启动子 重组质粒 鸡胚成纤维细胞 MDV
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马立克氏病病毒pp38基因真核表达质粒的构建及其在鸡胚成纤维细胞中的表达 被引量:4
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作者 姜世金 丁家波 +4 位作者 张志 孙淑红 王玉 杨汉春 崔治中 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期117-119,共3页
通过 PCR方法扩增马立克氏病病毒 (Marek′s disease virus,MDV) Md11株的 pp38基因 ,并将其克隆到真核表达载体 pc DNA3.1/ zeo(+)中。阳性克隆鉴定后 ,在脂质体作用下转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,通过间接免疫荧光试验 (IFA)检测到了 p... 通过 PCR方法扩增马立克氏病病毒 (Marek′s disease virus,MDV) Md11株的 pp38基因 ,并将其克隆到真核表达载体 pc DNA3.1/ zeo(+)中。阳性克隆鉴定后 ,在脂质体作用下转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,通过间接免疫荧光试验 (IFA)检测到了 pp38在 CEF中的表达。 展开更多
关键词 马立克氏病 病毒 pp38基因 真核表达质粒 构建 鸡胚成纤维细胞 表达
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马立克氏病病毒pp38基因启动子和增强子的克隆和序列分析 被引量:3
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作者 丁家波 赵文明 +3 位作者 姜世金 张纪元 王增福 崔治中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期93-96,共4页
参考GeneBank发表的马立克氏病病毒(MDV)国际标准强毒株GA的基因序列,设计合成一对引物,分别以RB1B,814,GD2(广东分离株),J 1 E(北京分离株),Md11,Md5,CVI988等不同毒株的MDV基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得了预期大小的PCR产物。该... 参考GeneBank发表的马立克氏病病毒(MDV)国际标准强毒株GA的基因序列,设计合成一对引物,分别以RB1B,814,GD2(广东分离株),J 1 E(北京分离株),Md11,Md5,CVI988等不同毒株的MDV基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得了预期大小的PCR产物。该产物经pGEM T easy克隆后测序,将所得序列进行比较分析。结果发现:不同毒株间pp38基因的启动子和增强子序列间有缺失突变,序列的同源性大于95 9%,其中大多数的突变发生在MDV复制的原点附近。 展开更多
关键词 马立克氏病 病毒 pp38基因 启动子 增强子 基因克隆 序列分析
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应用亲和层析法提纯鸡马立克氏病病毒pp38基因重组产物 被引量:8
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作者 秦爱建 崔治中 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期239-243,共5页
利用鸡马立克氏病病毒(MDV)Ⅰ型特异单克隆抗体H_(19)致敏Sepharose 4B-CNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒pp38基因重组产物,获得良好效果。提纯的蛋白质在SDS-PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在... 利用鸡马立克氏病病毒(MDV)Ⅰ型特异单克隆抗体H_(19)致敏Sepharose 4B-CNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒pp38基因重组产物,获得良好效果。提纯的蛋白质在SDS-PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在免疫印迹试验中该蛋白质条带也能被单克隆抗体H_(19)识别。利用该提纯的重组pp38免疫小鼠,所制备的小鼠抗血清在免疫荧光染色试验中不仅能与感染重组病毒的昆虫细胞Sf9反应,也能和Ⅰ型MDV型感染的鸡胚成纤维细胞反应。 展开更多
关键词 pp38基因产物 马立克氏病毒 色谱法
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马立克氏病病毒pp38基因和1.8kb转录子之间双向启动子的特性研究 被引量:1
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作者 丁家波 崔治中 +2 位作者 姜世金 孙爱军 孙淑红 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期363-367,共5页
从马立克氏病病毒(MDV)基因组DNA复制原点区某一点,将介于MDVpp38基因和1 8kb转录子之间的双向启动子分割成两个单方向的启动子。以pp38为报告基因,pUC18质粒为载体,构建了含不同方向完整启动子序列的pProfpp38和pProrpp38质粒,以及含... 从马立克氏病病毒(MDV)基因组DNA复制原点区某一点,将介于MDVpp38基因和1 8kb转录子之间的双向启动子分割成两个单方向的启动子。以pp38为报告基因,pUC18质粒为载体,构建了含不同方向完整启动子序列的pProfpp38和pProrpp38质粒,以及含分割后单方向启动子序列的pdProfpp38和pdProrpp38质粒。4种质粒分别转染鸡胚成纤维细胞(Chickenembryofibroblast,CEF)后,均能检测到pp38基因的表达。进一步以氯霉素乙酰转移酶(Chloramphenicolacetyltransferase,CAT)为报告基因,构建了含不同方向完整双向启动子的pProfCAT和pProrCAT质粒,以及含分割后单方向启动子序列的pdProfCAT和pdProrCAT质粒。通过转染试验,定量分析了完整启动子和分割后启动子在两个方向上的启动活性。实验结果表明,分割后的启动子在两个方向上的启动活性均比相应方向上完整启动子的活性低,其中1 8kb转录子方向上的活性下降了4 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 pp38基因 1.8kb转录子 双向启动子
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马立克氏病病毒pp38基因启动子和增强子的部分功能 被引量:1
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作者 丁家波 姜世金 +3 位作者 孙淑红 王增福 张纪元 崔治中 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期6-8,共3页
通过 PCR技术 ,以马立克氏病病毒 (MDV) RB1B株基因组 DNA为模板 ,扩增了包括 pp38基因及其启动子 -增强子和终止子在内的 2 2 0 0 bp的核酸片段。将该片段用 Sac 和 Sph 酶定向克隆到 p U C18质粒中 ,构建成重组质粒 ;将重组质粒转染... 通过 PCR技术 ,以马立克氏病病毒 (MDV) RB1B株基因组 DNA为模板 ,扩增了包括 pp38基因及其启动子 -增强子和终止子在内的 2 2 0 0 bp的核酸片段。将该片段用 Sac 和 Sph 酶定向克隆到 p U C18质粒中 ,构建成重组质粒 ;将重组质粒转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,用小鼠抗大肠杆菌表达的 pp38血清作间接免疫荧光试验 ,验证 pp38基因的表达。结果 ,在转染的细胞浆中看到了绿色的荧光 。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 pp38基因 启动子 增强子 间接免疫荧光试验
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马立克氏病病毒Ⅰ型疫苗毒克隆株pp38基因同源物的扩增和克隆
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作者 朱国强 王永坤 +1 位作者 崔治中 殷震 《江苏农业研究》 CSCD 1999年第2期10-13,共4页
用 P C R 技术,从马立克氏病病毒( M D V) C V I988/ C 株感染的鸡胚成纤维细胞( C E F)基因组 D N A 中扩增出含起始密码子的 M D V pp 38 基因同源物编码序列。在以 Digoxigenin ... 用 P C R 技术,从马立克氏病病毒( M D V) C V I988/ C 株感染的鸡胚成纤维细胞( C E F)基因组 D N A 中扩增出含起始密码子的 M D V pp 38 基因同源物编码序列。在以 Digoxigenin ( Dig.)标记的 pp38 基因作为探针,在 Southern blot中,该探针能识别该 P C R 扩增片段。将该 P C R 扩增片段在 Bam HⅠ和 PstⅠ位点克隆进 p U C18 质粒载体,酶切分析筛选到含 pp38 基因同源物的重组质粒并进行了全序列分析,证明该重组质粒是 pp 38 基因同源物克隆。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 聚合酶链反应 pp38基因同源物
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马立克病病毒pp38基因的编码序列及译读框 被引量:5
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作者 崔治中 L.F.Lee H.J.Kung 《江苏农学院学报》 CSCD 1991年第3期1-5,共5页
马立克病病毒(MDV)与致肿瘤相关的38kd磷蛋白(pp38)基因的编码序列是一个不含有内含子的由870个碱基对组成的DNA片断。从对MDVpp38-λgtll Lac Z融合基因的定序及已知Lac Z基因的译读框,直接读出了MDVpp38基因的译读框。根据计算,由该... 马立克病病毒(MDV)与致肿瘤相关的38kd磷蛋白(pp38)基因的编码序列是一个不含有内含子的由870个碱基对组成的DNA片断。从对MDVpp38-λgtll Lac Z融合基因的定序及已知Lac Z基因的译读框,直接读出了MDVpp38基因的译读框。根据计算,由该译读框推导出的该基因编码的由290个氨基酸组成的初级多肽分子量约为31kd. 展开更多
关键词 马立克病 病毒 pp38基因 编码序列
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马立克氏病病毒pp38基因产物对其上游双向启动子活性的增强作用 被引量:2
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作者 丁家波 崔治中 +1 位作者 姜世金 Sanjay Reddy 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2005年第6期519-526,共8页
为了研究鸡马立克氏病病毒(MDV)pp38基因和1.8 kb mRNA转录子基因间一双向启动子的活性,本研究以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,构建了启动子以pp38方向转录的重组质粒pP(pp38)-EGFP和以1.8 kb方向转录的重组质粒pP(1.8-kb)-E... 为了研究鸡马立克氏病病毒(MDV)pp38基因和1.8 kb mRNA转录子基因间一双向启动子的活性,本研究以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,构建了启动子以pp38方向转录的重组质粒pP(pp38)-EGFP和以1.8 kb方向转录的重组质粒pP(1.8-kb)-EGFP.将这二个重组质粒分别转染鸡胚成纤维细胞(CEF)、MDV rMd5克隆株感染的CEF(rMd5-CEF)以及pp38基因缺失的MDV rMd5Δpp38克隆株感染的CEF(rMd5Δpp38-CEF),结果只有在转染rMD5-CEF样品中才能检测到EGFP的表达;将上述二个EGFP重组质粒分别与能表达pp38的重组质粒pcDNA-pp38共转染CEF和rMd5Δpp38-CEF,在CEF中仍检测不到EGFP的表达,而在rMd5Δpp38-CEF形成的空斑周围,能检测到EGFP的表达.结果提示pp38是该双向启动子发挥作用的必要条件,但该启动子活性的发挥仍需除pp38以外的其他因子的共同作用.将pcDNA-pp38质粒和pp24表达质粒pcDNA-pp24,以及EGFP表达质粒共转染无MDV感染的CEF时,能检测到EGFP的表达.核酸阻滞试验表明,pp38必须和pp24共表达时,才能和启动子结合,表现出阻滞现象.说明pp38和pp24可能以聚合体形式与启动子结合并增强启动子的转录活性.还证明了该双向启动子在1.8 kb mRNA转录子方向的启动活性显著高于pp38基因方向. 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 pp38基因 1.8 KB mRNA转录子 双向启动子
原文传递
Molecular Comparisons of Marek's disease virus strains of different pathotypes for their gI,gE,pp38 and meq genes
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作者 CUIZhi-zhong WEIPin +1 位作者 DINGJia-bo ZHUSu-juan 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2004年第1期1-5,共5页
Five to ten serotyqe I Marek’s disease virus (MDV1) strains of different pathotypes were compared for their DNA sequences of gI, gE, pp38 and meq genes. The reference strains were vMDV GA and JM, vvMDV RB1B and Md11(... Five to ten serotyqe I Marek’s disease virus (MDV1) strains of different pathotypes were compared for their DNA sequences of gI, gE, pp38 and meq genes. The reference strains were vMDV GA and JM, vvMDV RB1B and Md11(p16), vv+MDV strains 648A and 584A,vaccine strain CVI988/Rispens; Chinese strains were: v MDV strain N, vvMDV strain G2, vaccine strain 814. Only random aa changes were found in 12 positions within gE of 497 aa among 10 analyzed strains and in 10 positions within gI of 355 aa among 5 strains. There was no relationship found between virus pathotypes and aa changes of both glycoproteins. The aa changes happened in 14 positions within meq of 339 aa among 5 compared strains. But a proline deletion at aa #194 in a proline-rich domain of meq were shared by two vaccine strains CVI988/Rispens and 814, the latter was a non-pathogenic vaccine strain of serotype 1 isolated in 1983 in China. In another hand, vv+MDV strains 648A demonstrated 5 unique aa changes and 4 of them also located in the proline-rich region. The pp38 was very conservative among sequenced 10 strains, there were only two positions at #107 and #109 with aa altered in its 290 aa. All tested MDV1 strains had glutamine at #107, instead, only vaccine CVI988 had arginine at the position and lost its epitope reactive with Mab H19, to which all other tested MDV1 strains were positive. However, CVI988 and vMDV GA shared a Mab T65-recognized epitope when there was glycine at aa#109. It was glutamic acid at aa#109 in all other MDV1 strains which were not reactive with Mab T65. It seems like that there is some relationship between pathotypes and sequences of pp38 and meq, but more strains need to be compared. 展开更多
关键词 家畜病毒学 MDV1 发病机理 分子机理 gⅠ基因 GE基因 pp38基因 MEQ基因
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重组鸡痘病毒载体及其在禽流感疫苗中的应用 被引量:4
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作者 郗洪生 王滨坤 郑世民 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2006年第5期22-24,共3页
关键词 DNA重组技术 禽流感疫苗 病毒载体 鸡痘病毒 应用 基因工程疫苗 病毒性传染病 pp38基因 传染性法氏囊 病毒变异
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马立克氏病病毒38kd磷蛋白H19-和T65-抗原表位分析及鸡对该抗原表位点突变病毒的免疫反应 被引量:3
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作者 崔治中 张志 +1 位作者 秦爱建 L.F.Lee 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2003年第3期263-272,共10页
对马立克氏病病毒(MDV)38 kd磷蛋白(pp38)基因的编码序列的测定表明,所有在间接荧光抗体试验(IFA)中与单抗H19反应的10个不同致病型MDV毒株,在第320位碱基为“A”,相应第107位氨基酸是谷氨酰胺,而在IFA中不与单抗H19反应的疫苗株CVI988... 对马立克氏病病毒(MDV)38 kd磷蛋白(pp38)基因的编码序列的测定表明,所有在间接荧光抗体试验(IFA)中与单抗H19反应的10个不同致病型MDV毒株,在第320位碱基为“A”,相应第107位氨基酸是谷氨酰胺,而在IFA中不与单抗H19反应的疫苗株CVI988相应位点分别是“G”和精氨酸。另一方面,在IFA中能与另一个单抗T65反应的毒株,在第326位碱基是“G”,第109位氨基酸是甘氨酸,而其他不与单抗T65反应的毒株,相应位点碱基和氨基酸分别是“A”和谷氨酸。通过比较CVI988及其在pp38基因的第320和326位的单一或双碱基点突变病毒CVI988/rpp38(AG)和CVI/rpp38(AA)对H19和T65的反应性,证明了在第107和109位的谷氨酰胺和甘氨酸分别对pp38上的H19和T65两个抗原表位起关键作用。比较CVI988及其点突变株CVI/rpp38(AG)在SPF鸡诱发的抗体反应表明,接种了点突变株CVI/rpp38(AG)鸡的抗体反应出现得比天然株抗体反应明显延缓且显著降低。进一步对MDV不同抗原成分的相应抗体水平比较表明,该功能区内可能存在着第3个特异性抗原表位,它决定于CVI988株pp38第107位的精氨酸,而且天然CVI988株及其点突变株诱发的抗MDV抗体水平间的显著差异可能正与这个抗原表位相关。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 38kd磷蛋白 pp38基因 H19 T65 抗原表位 点突变 免疫反应
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